检索结果-南通市图书馆

实时荧光定量RT-PCR在麻疹病毒检测中的应用价值

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医学信息 2021年第7期34卷 174-176页

作者：王颖赵志武天津市蓟州区疾病预防控制中心检验科

目的分析实时荧光定量RT-PCR在麻疹病毒检测中的应用价值。方法选取2018年12月～2020年12月我院收治的65例疑似麻疹患者作为研究对象,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量RT-PCR法对麻疹病毒进行检测,比较两种方法检测阳... 详细信息

目的分析实时荧光定量RT-PCR在麻疹病毒检测中的应用价值。方法选取2018年12月～2020年12月我院收治的65例疑似麻疹患者作为研究对象,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量RT-PCR法对麻疹病毒进行检测,比较两种方法检测阳性率以及不同检测时间阳性率。结果实时荧光定量RT-PCR检测阳性率为29.23%,高于ELISA法的10.77%,差异有统计学意义(P>0.05);第1天,ELISA法检测阳性率低于实时荧光定量RT-PCR法,差异有统计学意义(P实时荧光定量RT-PCR法,差异有统计学意义(P0.05)。结论实时荧光定量RT-PCR法检测麻疹病毒具有较高的应用价值,灵敏度较高,且操作简单。

关键词：实时荧光定量麻疹病毒酶联免疫吸附试验

实时荧光定量聚合酶链反应技术及细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值

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中国医药指南 2020年第26期18卷 47-48页

作者：罗周正张丽艳李贺杜波阜新市卫生健康服务中心(阜新市疾病预防控制中心)检验检测部辽宁阜新123000

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术及细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值。方法选取2013年1月至2018年12月阜新市哨点医院采集的4026份疑似流感咽拭样本作为研究对象,先后采用不用的检验方式进行检测,研究组采用实时荧光定... 详细信息

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术及细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值。方法选取2013年1月至2018年12月阜新市哨点医院采集的4026份疑似流感咽拭样本作为研究对象,先后采用不用的检验方式进行检测,研究组采用实时荧光定量PCR法,对照组采用细胞培养法,比较两种检测方法对流感病毒携带者样本临床分型阳性率的检测效果。结果研究组检出阳性样本512份。其中,检出新甲H1型149份,对照组分离毒株62株;研究组H3亚型206份,对照组分离毒株109株;研究组B型157份,对照组分离毒株97株,各组均未检出H5、H7、H9亚型。研究组检出阳性样本总数与对照组毒株总数呈正相关,且新甲H1型、H3型、B型与毒株分别呈正相关(P 实时荧光定量PCR技术对流感病毒检测的速度更快,灵敏度更高,具有较高的临床应用价值。

关键词：流感病毒实时荧光定量聚合酶链反应细胞培养法检验价值

实时荧光定量PCR检测HBV DNA室内质控分析

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医学信息（医学与计算机应用） 2014年第18期18卷 162-163页

作者：陆小玲周鸣桢广西武鸣县人民医院检验科广西武鸣530199

目的探讨实时荧光定量PCR在HBV DNA定量检测过程中的室内质控问题。方法用实时荧光定量PCR法检测2013年1~7月自制的乙肝阳性室内质控血清,与临床标本同步检测,计算每次阳性质控结果的常用对数、标准曲线的斜率、截距和相关系数(r)及相... 详细信息

目的探讨实时荧光定量PCR在HBV DNA定量检测过程中的室内质控问题。方法用实时荧光定量PCR法检测2013年1~7月自制的乙肝阳性室内质控血清,与临床标本同步检测,计算每次阳性质控结果的常用对数、标准曲线的斜率、截距和相关系数(r)及相关结果的均值(x)、标准差(s)和变异系数(cv),利用EXCEL折线散点图画出质控图进行质控。结果本室2013年1~7月测定自制的阳性室内质控结果测定值均在控,标准差和变异系数均在允许范围内,符合要求。结论本实验室采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA定量检测过程中,选用的质控方法和自制的质控品稳定性良好,能可靠有效地为临床提供准确的检验结果。

关键词：实时荧光定量聚合酶链反应 HBV-DNA 室内质控

LightCycler480实时荧光定量PCR仪在献血者血液筛查中的应用

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中国输血杂志 2010年第S1期23卷 174-175页

作者：孙秋影卢长春魏强庞淑芬黑龙江省血液中心 150056

目的应用PCR进行早期筛查主要是因为PCR的高灵敏和短的窗口期。核酸检测（NAT）是直接检测病原体核酸的一系列技术的总称,灵敏度高,可检出标本中极微量的核酸,在病毒感染后数天即能检出,可大大缩短病毒检测“窗口期”,提高输血安全性。... 详细信息

目的应用PCR进行早期筛查主要是因为PCR的高灵敏和短的窗口期。核酸检测（NAT）是直接检测病原体核酸的一系列技术的总称,灵敏度高,可检出标本中极微量的核酸,在病毒感染后数天即能检出,可大大缩短病毒检测“窗口期”,提高输血安全性。方法本站应用LC480系统进行的96或384个样本快速循环扩增PCR反应。通过监测核酸扩增时的荧光,可对产生的结果定量检测和同时进行分析。采用了HBV/HCV/HIV三联核酸检测试剂盒（荧光PCR）,应用DP1000核酸提取仪（上海科华）,8人份血样混合提取核酸,应用LightCycler(480实时荧光定量PCR仪进行HBV、HCV、HIV三联检测,LightCyc

关键词：血液筛查 LightCycler480 实时荧光定量核酸检测核酸扩增上海科华窗口期核酸提取试剂盒病毒检测

裸大麦PKABA1基因实时荧光定量PCR方法的建立

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江苏农业科学 2012年第12期40卷 16-18页

作者：吴昆仑邓晓青姚晓华青海省农林科学院青海大学农林科学院/青海省高原作物种质资源创新与利用国家重点实验室培育基地/青海省裸大麦遗传育种重点实验室青海西宁810016

根据GenBank上小麦(M94726)、大麦(AB058924)和黑麦(DQ295068)的蛋白激酶外显子3的编码基因的同源序列比对,设计基因PKABA1的引物,建立了用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测裸大麦PKABA1基因在不同低温处理时间下mRNA表达量的方法。以... 详细信息

根据GenBank上小麦(M94726)、大麦(AB058924)和黑麦(DQ295068)的蛋白激酶外显子3的编码基因的同源序列比对,设计基因PKABA1的引物,建立了用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测裸大麦PKABA1基因在不同低温处理时间下mRNA表达量的方法。以样本循环数为纵坐标、以稀释倍数的对数为横坐标建立标准曲线,其相关系数(r2)达到了0.996,扩增效率99%,熔解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,退火温度为(80.5±0.5)℃。结果表明,裸大麦PKABA1基因在不同低温处理时间下的表达量稳定,其实时荧光定量PCR法扩增效率高、特异性强、线性范围广、检测周期短,为PKABA1基因作为内参基因进行裸大麦功能基因表达的定量分析奠定了基础。

关键词：裸大麦实时荧光定量 PCR扩增标准曲线 PKABA1基因

EPG结合实时荧光定量PCR对新蚜虫疠霉侵染桃蚜致病机理初探

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EPG结合实时荧光定量PCR对新蚜虫疠霉侵染桃蚜致病机理初探

作者：薛承美中国计量学院

学位级别：硕士

桃蚜是多种蔬菜和农作物的重要害虫，不仅吸食植物汁液，而且还是多种植物病毒病的重要媒介昆虫。蚜虫专化性病原真菌新蚜虫疠霉(Pandoraneoaphidis)是自然界中分布最广泛的虫霉目昆虫病原真菌，可以侵染蚜虫进而引发流行病，导致蚜群... 详细信息

桃蚜是多种蔬菜和农作物的重要害虫，不仅吸食植物汁液，而且还是多种植物病毒病的重要媒介昆虫。蚜虫专化性病原真菌新蚜虫疠霉(Pandoraneoaphidis)是自然界中分布最广泛的虫霉目昆虫病原真菌，可以侵染蚜虫进而引发流行病，导致蚜群数量的急剧下降，是各种蚜虫的重要自然控制因子。本文以桃蚜（Myzus persicae）和新蚜虫疠霉为研究对象，利用刺探图谱技术（EPG）观察感病不同时期桃蚜与正常取食桃蚜的取食状态差异，同时通过分析实时荧光定量PCR技术（qPCR）筛选得到能够稳定表达的内参基因，并利用该内参基因进行了新蚜虫疠霉在蚜虫体内生长的相对定量，这为进一步研究新蚜虫疠霉和桃蚜的互作，探索关于新蚜虫疠霉侵染桃蚜的致病机理提供了理论依据。本研究得到的实验结果如下：（1）基于EPG技术测定感染新蚜虫疠霉的桃蚜和未感病正常桃蚜（对照）在实验植物上的各种刺吸波形，以取食波np、c、pd、E1、E2出现时间和次数为主要考虑的表征参数进行数据分析。结果发现：桃蚜在感染新蚜虫疠霉后，其取食行为包括取食行为中觅食时间（c波）变长，真正取食时间（E波）变短，非刺探（np波）次数与时间等受到一系列影响。桃蚜受新蚜虫疠霉感染死亡前16小时与正常桃蚜的各种表征参数的比较表明，np波平均时间和平均次数差异均不显著;出现C波平均时间和平均次数差异极显著;出现pd波平均时间和平均次数差异也极显著，而出现的E1波平均时间和次数差异均不显著;有趣的是，感病组出现的E2波平均时间与未感病组的平均时间差异显著;而出现的E2波平均次数却差异不显著。桃蚜受新蚜虫疠霉感染后6小时与正常桃蚜的各种表征参数的比较表明，两组处理出现的np波和C波平均时间差异不显著，但出现的np波和C波平均次数的差异却表现显著;出现的pd波平均时间和平均次数差异显著;但第一次出现pd波的时间差异不显著。另外，出现的E1波、E2波的平均时间和平均次数差异不显著。（2）本研究通过实时荧光定量PCR分析了新蚜虫疠霉中3个传统管家基因18S、28S、EF1mRNA表达差异情况，并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件综合分析了它们在4种生长阶段（分生孢子、萌发管时期、短菌丝和长菌丝）和3种营养条件（GLEN培养基、OS-SDB培养基和Grace培养基）下表达的稳定性。结果表明：基于公共数据库序列设计的候选内参基因的引物具有良好的扩增效率和特异性。经geNorm软件分析，新蚜虫疠霉在不同生长阶段和不同营养条件下3个候选内参基因的表达稳定性（M值）等级分别为：18S(0.457)＞28S(0.534)＞EF1(0.749)和18S(0.389)＞28S(0.557)＞EF1(0.607)。利用NormFinder软件分析，新蚜虫疠霉不同生长阶段和不同营养条件下3个候选内参基因的表达稳定性（稳定值）等级分别为：18S(0.084)＞28S(0.264)＞EF1(0.509)和18S(0.118)＞28S(0.355)＞EF1(0.403)。而BestKeeper软件分析得到的稳定性等级有所差异，在不同生长阶段和不同营养条件下候选内参基因28S表达最稳定，18S次之，EF1最不稳定。综合分析3款软件对荧光定量PCR结果的稳定性等级的平均值，得出在不同生长阶段和不同营养条件下候选内参基因18S表达最为稳定。（3）利用能够稳定表达的基因18S作为内参，通过荧光定量PCR技术对新蚜虫疠霉在桃蚜体内的增殖过程进行了初步的探索。建立了Chelxe-100快速提取DNA的方法，同时利用该方法提取感病桃蚜的基因组DNA，对新蚜虫疠霉侵染7个时间点的蚜尸进行了实时荧光定量PCR。通过分析基因的相对表达量结果，我们获得了能够较好地模拟新蚜虫疠霉在桃蚜体内增殖的方程。综上所述，本研究利用EPG技术观察感病不同时期桃蚜与正常取食桃蚜的取食状态差异，从宏观的角度对新蚜虫疠霉侵染桃蚜的致病过程进行了描述，同时通过分析实时荧光定量PCR技术（qPCR）筛选得到的内参基因18S对新蚜虫疠霉在蚜虫体内生长增殖的微观状态进行了研究。通过宏观和微观的内外相结合观测，为新蚜虫疠霉侵染寄主蚜虫的致病过程提供了实验数据，为进一步研究相关的致病机理打下基础。

关键词：桃蚜新蚜虫疠霉刺探电位图谱技术(EPG) 实时荧光定量 PCR(qPCR) 致病机理

实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α mRNA基因表达

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现代检验医学杂志 2006年第4期21卷 13-15页

作者：陈晓王宇学湖北中医学院医学检验与技术系湖北武汉430064

目的建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription po lym erase cha in reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达。方法用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光T aqm an方法及探针标记技术,建立实时... 详细信息

目的建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription po lym erase cha in reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达。方法用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光T aqm an方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-αmRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较。结果实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势。结论所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-αmRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确。

关键词：实时荧光定量反转录聚合酶链反应 TNF—α基因