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实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

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中华检验医学杂志 2005年第3期28卷 299-301页

作者：鞠少卿张冬雷倪红兵王跃国苏建友施健王惠民孔宪涛仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军临床免疫中心上海200003 南通大学附属医院酶学研究室南通大学附属医院检验医学中心

目的研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体(BAFF-R)含量的方法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中BAFF-R mRNA表达的检测价值.方法在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针,用逆转录(RT-PCR)扩增... 详细信息

目的研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体(BAFF-R)含量的方法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中BAFF-R mRNA表达的检测价值.方法在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针,用逆转录(RT-PCR)扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BAFF-R mRNA含量,并以 BAFF-R mRNA和β2M mRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价.结果 RFQ -PCR检测BAFF-R含量的线性范围为109 ～101 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为12.5%和11.9%,高浓度样本批内和批间CV分别为8.3%和9.3%.30名健康献血员样本的PBMC中,83%(25/30)有BAFF-R mRNA表达,范围为0.14～1.03.结论 RFQ -PCR检测BAFF-R mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性.

关键词：实时荧光定量含量 B细胞表达水平 mRNA表达 PBMC 激活因子 PCR) 荧光探针 R基因

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中CDK4基因的表达

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 773-775页

作者：胡和平满晓波王健唐亮王红阳吴孟超邱秀华第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 东方肝胆外科研究所信号转导实验室上海安图医院普通外科

目的 :应用实时荧光定量 PCR法检测原发性肝细胞癌中 CDK 4基因的表达。方法 :提取手术切除人肝癌和癌旁组织总 RNA并逆转录为 c DNA。应用实时荧光定量 PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中 CDK 4的表达水平。结果 :2 0例肝细胞癌标... 详细信息

目的 :应用实时荧光定量 PCR法检测原发性肝细胞癌中 CDK 4基因的表达。方法 :提取手术切除人肝癌和癌旁组织总 RNA并逆转录为 c DNA。应用实时荧光定量 PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中 CDK 4的表达水平。结果 :2 0例肝细胞癌标本中有 18例肿瘤组织中 CDK 4基因表达明显高于癌旁肝组织 ,其中 7例高出 4倍以上。结论 :实时荧光定量PCR可以准确定量测定基因的表达 ;CDK 4基因在肝细胞癌的发生。

关键词：原发性肝癌实时荧光定量 PCR法 CDK4基因基因表达

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实时荧光定量PCR应用及实验条件优化

大连医科大学学报 2007年第4期29卷 404-407页

作者：丁超李惠民云南省第二人民医院血液科云南昆明650031

实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,在保持了PCR技术灵敏、快速、特异特点的基础上增加了定量的特点。在检测微小残留病变,肿瘤标志性基因及病毒负荷量等方面为临床医生判断病情,了解预后发挥着不可替代的作用。荧光定... 详细信息

实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,在保持了PCR技术灵敏、快速、特异特点的基础上增加了定量的特点。在检测微小残留病变,肿瘤标志性基因及病毒负荷量等方面为临床医生判断病情,了解预后发挥着不可替代的作用。荧光定量PCR为科学发挥着巨大作用的同时,人们也不断对其实验条件进行优化,保证定量结果的准确。

关键词：实时荧光定量 PCR 优化

实时荧光定量PCR检测手足口病肠道病毒71型与柯萨奇病毒16型临床分析

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中华医院感染学杂志 2014年第24期24卷 6074-6075,6078页

作者：王海周蕾张永乐刁宏燕浙江省立同德医院检验科浙江杭州310012 杭州市儿童医院检验科浙江杭州310014 杭州市第六人民医院检验科浙江杭州310013 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003

目的探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16... 详细信息

目的探讨肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A 16型(Cox A16)实时荧光定量PCR检测在早期诊断手足口病(HFMD)中的意义,为临床治疗提供参考依据。方法对2012年3月-2013年6月157例疑似HFMD患儿的粪便、疱疹液、鼻咽拭子样本进行EV71、Cox A16、肠道病毒(EV)的实时荧光定量PCR检测,根据试剂说明书的标准判定;采用SPSS16.0进行数据分析。结果粪便中EV、EV71、Cox A16的检出率分别为94.09%、42.04%、38.85%,高于鼻咽拭子样本,差异有统计学意义(P实时荧光定量PCR法检测EV、EV71、Cox A16。

关键词：手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A 16型实时荧光定量聚合酶链反应

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

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临床检验杂志 2008年第3期26卷 194-196页

作者：高丽潘世扬束永前谢而付陈进步赵文君穆原张丽霞陈丹黄珮珺张寄南南京医科大学第一附属医院临床检验中心南京医科大学第一附属医院肿瘤科南京210029 南京医科大学第一附属医院江苏省生物诊断与治疗重点实验室南京210029

目的建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法。方法以肺癌细胞株NCI-H460作为RASSF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μl健康人血浆中,制备得到模... 详细信息

目的建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法。方法以肺癌细胞株NCI-H460作为RASSF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆。用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA。对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测。以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量。结果实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆)。15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%)。5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml。结论实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强。

关键词： RASSF1A 甲基化实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应肺癌血浆DNA

实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌外周血hTERT mRNA的表达及临床意义

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中国实验诊断学 2010年第8期14卷 1272-1273页

作者：彭玉林郑文宏黄强玲景德镇市第三人民医院检验科江西景德镇333001

结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,死亡率较高。在常规影像学发现肿瘤转移之前检测到外周血中隐匿存在的肿瘤细胞对预测肿瘤复发、转移、指导临床治疗等方面具有重要意义。端粒酶与细胞恶变、肿瘤的发生发展密切相关,而端粒酶催化亚... 详细信息

结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,死亡率较高。在常规影像学发现肿瘤转移之前检测到外周血中隐匿存在的肿瘤细胞对预测肿瘤复发、转移、指导临床治疗等方面具有重要意义。端粒酶与细胞恶变、肿瘤的发生发展密切相关,而端粒酶催化亚基(hTERT)可能在端粒酶活性调节中起重要作用。为此,本研究采用实时荧光定量PCR检测结直肠癌外周血hTERTmRNA的水平,探讨其在直肠癌中的表达及意义。[第一段]

关键词： hTERTmRNA 荧光定量PCR检测结直肠癌外周血实时荧光定量临床意义端粒酶催化亚基恶性肿瘤

实时荧光定量PCR与常规PCR方法检测猪圆环病毒2型的比较

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2016年第12期 133-135页

作者：师小潇潘晓梅张伟徐龙飞刘强德李延涛贺笋新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐830011

猪圆环病毒2型（PCV-2）是猪圆环病毒（PCV）两种基因型中的一种,为小颗粒、无包膜、环状单股DNA病毒,其基因组大小为1 767 bp或1 768 bp,包含7个读码框架。***等[1]首先从患断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasti... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV-2）是猪圆环病毒（PCV）两种基因型中的一种,为小颗粒、无包膜、环状单股DNA病毒,其基因组大小为1 767 bp或1 768 bp,包含7个读码框架。***等[1]首先从患断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的猪群中分离到PCV-2,

关键词：猪圆环病毒实时荧光定量 PMWS Allan 基因组大小 wasting 读码 DNA 重组质粒皮炎综合征

实时荧光定量PCR技术检测牙周致病菌的研究现状

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口腔医学研究 2009年第3期25卷 380-382页

作者：朱丽芳郑瑜谦闫福华福建医科大学附属口腔医院牙周科福建福州350002

牙菌斑中绝大多数细菌为口腔正常菌丛,是人类与微生物长期共存进化过程中形成的微生物群,对宿主无不良影响,仅少数细菌与牙周病的发生、发展密切相关,在各型牙周病的病损区,常可分离出一种或几种优势菌,它们具有显著的毒力或致病性,能... 详细信息

牙菌斑中绝大多数细菌为口腔正常菌丛,是人类与微生物长期共存进化过程中形成的微生物群,对宿主无不良影响,仅少数细菌与牙周病的发生、发展密切相关,在各型牙周病的病损区,常可分离出一种或几种优势菌,它们具有显著的毒力或致病性,能通过多种机制干扰宿主防御能力,具有引发牙周破坏的潜能,称之为牙周致病菌(periodontal pathogen)。用于检测牙周致病菌的方法很多,如细菌培养、免疫分析、酶促反应、分子生物学、聚合酶链反应(PCR)等。[第一段]

关键词： PCR技术检测牙周致病菌实时荧光定量细菌培养聚合酶链反应微生物群分子生物学不良影响

实时荧光定量PCR技术及其在中医药研究中的应用

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中国实验方剂学杂志 2014年第22期20卷 238-241页

作者：龚美蓉陈凤丽曹晨孙亦农王明艳南京中医药大学南京210023

在中医现代化研究过程中,越来越多地应用先进的现代科学技术,聚合酶链式反应(PCR)技术作为一项重要的研究工具,亦被不断地用于中医药的研究。荧光定量PCR是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术,在PCR反应体系中计入荧... 详细信息

在中医现代化研究过程中,越来越多地应用先进的现代科学技术,聚合酶链式反应(PCR)技术作为一项重要的研究工具,亦被不断地用于中医药的研究。荧光定量PCR是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术,在PCR反应体系中计入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效,高通量而且高敏感性等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足,目前该技术已逐渐成为中医药研究中的重要手段。本文概述了实时荧光定量PCR技术分别在中医诊断、中医药理研究、中医证实质研究和针刺作用机制研究中的应用。通过文献研究表明:应用实时荧光定量PCR,可以从分子基因水平探讨方剂或单味药及有效成分在组织、细胞及至分子层次上的作用机制,了解药物作用部位及靶点。探讨中医证候的病理生理学基础,并为阐明其生物学本质提供了新思路。使我国传统中医药体系的科学性在分子生物学的基因水平上得到了初步的验证。这些研究思路和方法为中医药的研究提供了借鉴,实时荧光定量PCR有望更广泛的应用于中医药研究中。

关键词：实时荧光定量聚合酶链式反应文献研究