检索结果-南通市图书馆

作者：席鑫博山西医科大学

学位级别：硕士

目的:泌尿男性生殖系统畸形包括阴茎、睾丸、附睾、输精管、尿道畸形及隐匿阴茎等,其中尿道下裂及隐睾作为生殖系统畸形在尿道及睾丸畸形中为常见疾病。本实验拟用电磁辐射照射孕鼠,研究电磁辐射对仔鼠的影响及诱导雄性仔鼠发生生殖系... 详细信息

目的:泌尿男性生殖系统畸形包括阴茎、睾丸、附睾、输精管、尿道畸形及隐匿阴茎等,其中尿道下裂及隐睾作为生殖系统畸形在尿道及睾丸畸形中为常见疾病。本实验拟用电磁辐射照射孕鼠,研究电磁辐射对仔鼠的影响及诱导雄性仔鼠发生生殖系统先天畸形,并进一步探讨电磁辐射对仔鼠所产影响机制。方法:60只孕鼠随机分成5组,在孕11d,其中四组连续8d各组分别照射60MHz、120MHz、700MHz、1500MHz,其中A组为空白对照组,B组接受60MHz电磁辐射照射、C组接受120MHz、D组接受700MHz、E组接受1500MHz电磁辐射照射电磁辐射照射电磁辐射照射电磁辐射波及无辐射环境中,出生时观察仔鼠死胎率,出生后35d观察小鼠有无生殖系统畸形(尿道下裂、隐睾)。结果:A、B、C、D、E各组在仔鼠每窝个数及每窝成活数方面无明显统计学意义(P>0.05),D组对A、B、C、E组无明显统计学差异(P>0.05),E组对A组(对照组)、B组、C组每窝死胎数有统计学差异(P=0.015孕鼠所产雄性仔鼠个数方面无明显统计学意义(P>0.05)。仔鼠出生后35d使用放大镜及触诊观察雄性仔鼠外生殖器(阴茎及睾丸),B、C、D组无尿道下裂发生,A组尿道下裂发生率为1.72%(1/58),E组尿道下裂发生率为1.79%(1/56),A、B、C、D、E各组尿道下裂发生率无统计学差异(P>0.05);B、E组无隐睾发生,A组隐睾发生率为1.72%(1/58),C组隐睾发生率1.63%(1/61),D组隐睾发生率为1.59%(1/63),A、B、C、D、E各组隐睾发生率无统计学差异(P>0.05)。结论:不同频率的电磁辐射波对孕鼠产仔数、雄性仔鼠生殖系统的畸形无明显影响(P>0.05),对E组孕鼠死胎数有影响(P=0.015<0.05)。

关键词：泌尿生殖殖系统畸形电磁辐射孕鼠雄性仔鼠死胎

CPG-ODN的筛选和辅助乙肝疫苗免疫孕鼠的作用

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CPG-ODN的筛选和辅助乙肝疫苗免疫孕鼠的作用

作者：徐春光暨南大学

学位级别：硕士

目的：设计并合成含非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸的寡聚脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)，以期筛选出对新生儿脐血单个核细胞免疫刺激作用较强的CpG-ODN;观察不同剂量CPG-1826(5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’)辅助乙肝疫苗免疫孕鼠及仔鼠的... 详细信息

目的：设计并合成含非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸的寡聚脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)，以期筛选出对新生儿脐血单个核细胞免疫刺激作用较强的CpG-ODN;观察不同剂量CPG-1826(5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’)辅助乙肝疫苗免疫孕鼠及仔鼠的作用。方法：设计合成17条CpG-ODN，采用CpG-ODN刺激足月儿脐血单个核细胞，通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法初步筛选CpG-ODN;应用RT-PCR法检测CpG-ODN刺激单个核细胞后Toll样受体9(TLR-9)的mRNA表达情况，进一步验证其免疫刺激作用。选择CpG-1826(不同剂量)作为乙肝疫苗佐剂辅助免疫孕鼠，用ELISA方法检测孕鼠和仔鼠血清乙肝表面抗体(HBsAb)水平，并观察仔鼠存活数量和生长发育指标的变化。结果：筛选出2条对新生儿脐血单个核细胞具有明显免疫刺激作用的硫代修饰CpG-ODN，即CpG-1：5’-TCGCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGT-3’和CpG-6：5’-GACGTTCGAACGTCGACGTA-3’。MTT法测出CpG-1和CpG-6的吸光度值(A值)均高于空白对照(P＜0.05)。RT-PCR法得出CpG-1和CpG-6的TLR9／GADPH吸光度比值均高于阳性对照CpG-2006和空白对照(P＜0.05)。CPG-1826联合乙肝疫苗注射免疫孕鼠时，20 μg／只剂量组的孕鼠、仔鼠血清HBsAb含量均高于10 μg／只剂量组、40 μg／只剂量组、单纯乙肝疫苗组及空白对照组(P＜0.05)，但仔鼠存活数量以及体重、身长、胎脑和胎仔体重系数等生长发育指标间无显著性差异(P＞0.05)。结论：CpG-ODN 5’-TCGCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGT-3’和5’-GACGTTCGAACGTCGACGTA-3’能增强新生儿脐血单个核细胞的免疫效应;CPG-1826(20 μg／只)联合乙肝疫苗免疫孕鼠时，既能显著提高孕鼠及其仔鼠血清HBsAb水平，又不对仔鼠的生长发育造成不良影响，是一种较为理想的免疫佐剂。

关键词： CpG-ODN 脐血单个核细胞新生儿孕鼠仔鼠抗体

妊娠期孕鼠接触SEB对成年子代鼠胸腺及脾脏T细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

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妊娠期孕鼠接触SEB对成年子代鼠胸腺及脾脏T细胞Wnt/β-catenin信...

作者：孙潮蚌埠医学院

学位级别：硕士

研究背景根据我国卫生健康委员会发布的《关于印发全国出生缺陷综合防治方案的通知》显示,我国每年新生儿出生缺陷率为5.6%,其中环境因素约占10%,环境因素与遗传因素相互作用和原因不明者约占65%。妊娠期微生物感染是环境因素中生物因... 详细信息

研究背景根据我国卫生健康委员会发布的《关于印发全国出生缺陷综合防治方案的通知》显示,我国每年新生儿出生缺陷率为5.6%,其中环境因素约占10%,环境因素与遗传因素相互作用和原因不明者约占65%。妊娠期微生物感染是环境因素中生物因素的主要种类之一,金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,***)是临床常见的致病菌之一,除导致常见的化脓性感染和毒性休克综合症外,金葡菌也可因定植于生殖道等部位传递给胎儿,导致围产期感染、妊娠不良结局和胎儿发育异常等,因此金葡菌在妊娠期和围产期的感染已成为围产医学关注的突出问题。葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)为金葡菌分泌产生的一种主要外毒素性致病物质,同时具有超抗原特性。超抗原进入机体后非特异性激活T细胞克隆,受SEB刺激的T细胞被大量清除,再次刺激可诱导大部分反应性T淋巴细胞的凋亡或残余T淋巴细胞的不能增殖,致使T细胞数量改变和对特定抗原的免疫无应答,即造成微生物感染后的免疫无能现象。Wnt/β-catenin信号通路是个体发育过程中一条高度保守的信号通路,Wnt/β-catenin信号通路在动物胚胎的早期发育、器官形成、组织再生和其他生理过程中,具有至关重要的作用。T细胞较其他免疫细胞表达更高水平的Wnt分子,揭示Wnt/β-catenin信号通路在T细胞应答过程中扮演着更为重要的角色。导师课题组前期研究发现妊娠期孕鼠接触SEB可导致其子代鼠胸腺、脾脏和外周血中T淋巴细胞的数量发生改变,但关于Wnt/β-catenin信号通路是否介导妊娠期孕鼠接触SEB对T细胞的影响,目前尚不清楚,也未见国内外报道。本研究拟通过western blot和实时定量PCR研究成年子代鼠胸腺和脾脏T细胞Wnt/β-catenin信号通路的配体、通路关键分子和靶基因的蛋白和mRNA表达水平,同时用免疫荧光法检测信号通路关键分子β-catenin的表达及定位,以探讨妊娠期孕鼠接触SEB对成年子代鼠胸腺及脾脏T细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,其研究结果将为阐明SEB与有关免疫性疾病的发生机理关系、提高人口健康和出生质量具有极其重要的价值和意义。研究目的研究妊娠期孕鼠接触SEB对成年子代鼠胸腺及脾脏T细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。研究方法1.孕鼠模型的建立SD大鼠于每日傍晚时进行合笼,按照1:1的比例将雌性大鼠与雄性大鼠共同置于具有托盘的洁净笼具内,不放垫料,给予适量的饲料和水。次日晨8∶00进行检查,采用阴栓检查法,如在托盘内及雌性大鼠阴道内发现乳白色阴栓即认为该雌鼠已受孕,记录为妊娠第1天(gestational day 1,GD1)。将受孕大鼠随机分为磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffer saline,PBS)组和SEB组,SEB组孕鼠在GD16时给予尾静脉注射0.3 ml 50μg/ml SEB;PBS组采用相同方法给予同等体积的PBS处理。然后妊娠鼠正常饲养,自然分娩后的子代鼠饲养至成年期(3个月),在麻醉下获取成年子代鼠的胸腺和脾脏进行实验研究。2.胸腺与脾脏淋巴细胞的制备无菌条件下摘取SD大鼠脾脏或胸腺,置于无菌小皿中,用无菌剪刀将脾脏分为两份,撕去脾脏或胸腺被膜,用手术剪刀将脾脏或胸腺剪成小块。将脾脏或胸腺放置于200目网上,控制研磨力度,保持筛网悬空,使用研磨棒来研磨脾脏或胸腺。加入与脾脏或胸腺单细胞悬液等量的分离液,经密度梯度离心获得胸腺或脾脏淋巴细胞悬液。3.磁珠分选获得脾脏淋巴细胞中的CD4T与CD8T细胞将脾脏淋巴细胞悬液通过改良牛鲍计数板后,每10以内细胞加入20μl的CD4 Microbeads或CD8 Microbeads,直接进行阳性细胞标记,15 min后将与磁珠充分标记好的淋巴细胞悬液用running buffer重悬后,通过美天旎auto MACSTM Pro分选仪进行阳性分选,即可得到脾脏单阳性CD4T细胞或CD8T细胞。***-time PCR法检测mRNA表达水平提取SEB组和PBS组大鼠胸腺T细胞、脾脏CD4T细胞或CD8T细胞总RNA,去除基因组DNA,用逆转录试剂盒逆转录成c DNA。在罗氏PCR反应仪上用Real-time PCR方法检测胸腺或脾脏T细胞Wnt/β-catenin信号通路的β-catenin、c-myc、cyclin D1、mmp-7基因表达水平。*** blot法检测蛋白表达水平提取实验组与对照组成年子代鼠胸腺和脾脏组织的总蛋白,通过BCA蛋白定量试剂盒测定样本蛋白的浓度,通过western blot实验检测Wnt配体的蛋白表达情况。同样方法提取两组成年子代鼠脾脏CD4T细胞或CD8T细胞总蛋白,检测T细胞Wnt/

关键词：葡萄球菌肠毒素B 孕鼠脾脏 Wnt/β-catenin信号通路胸腺 T细胞

不同碘摄入量对大鼠孕鼠垂体TSH细胞的影响

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不同碘摄入量对大鼠孕鼠垂体TSH细胞的影响

作者：高伟天津医科大学

学位级别：硕士

目的:观察不同碘摄入量对孕20日龄Wistar大鼠的垂体促甲状腺激素细胞的形态学影响,进一步探讨不同程度的碘缺乏和碘过量对垂体-甲状腺轴影响的机制。方法:选用断乳后一个月龄雌鼠Wistar大鼠,体重70-100g,按体重随机分成5组:重度低碘组(... 详细信息

目的:观察不同碘摄入量对孕20日龄Wistar大鼠的垂体促甲状腺激素细胞的形态学影响,进一步探讨不同程度的碘缺乏和碘过量对垂体-甲状腺轴影响的机制。方法:选用断乳后一个月龄雌鼠Wistar大鼠,体重70-100g,按体重随机分成5组:重度低碘组(L1)、中度低碘组(L2)、轻度低碘组(L3)、适碘组(NI)、高碘组(HI)。各组动物均饲以低碘地区的粮食制成的低碘饲料,平均含碘量50μg/kg;饮用加入不同浓度的碘化钾自来水。5组饮水碘浓度依次为8μg/L、50μg/L、133.3μg/L、300μg/L、9966.7μg/L,以大鼠每日进食20g,进水30ml估计,上述5组雌鼠每日总碘摄入量依次约为:1.25μg/d、2.5μg/d、5μg/d、10μg/d、300μg/d。雄鼠与适碘组雌鼠相同条件饲养。大鼠饲养3个月后,各组按雌雄2:1合笼交配,在孕20天观察血清甲状腺激素水平变化。并于孕20日处死雌鼠,取其甲状腺和垂体,称重,,进行HE染色、Mallory三色染色及免疫组织化学染色,光镜观察垂体促甲状腺激素细胞形态学的改变。应用Motic Images Advanced 3.1图像分析系统测量以下指标:垂体促甲状腺激素细胞面数密度、体积密度和阳性细胞强阳性率。结果:1.各低碘组(LI)随缺碘程度的加重,甲状腺绝对重量和相对重量呈增高趋势,其中中度(L2)和重度低碘组(L1)与适碘组(NI)相比,有明显差异,且差异有统计学意义(p＜0.05)。高碘组(HI)甲状腺绝对重量、相对重量与适碘组相比无明显变化(P＞0.05)。2.各低碘组(LI)垂体绝对重量较适碘组(NI)增高,但差异无统计学意义(P＞0.05);高碘组(HI)垂体绝对重量低于适碘组,无统计学意义(P＞0.05);与适碘组相比,各低碘组(LI)和高碘组(HI)垂体相对重量无明显变化(P＞0.05)。3.对垂体TSH细胞免疫组织化学染色光镜下观察显示:TSH细胞多集中于腺垂体近中心侧。细胞胞质内免疫反应程度不同,反映较强细胞呈棕褐色,较弱者呈浅棕色,反应产物呈颗粒状,胞核均无阳性着色。各低碘组强阳性细胞内颗粒着色多偏于胞浆一侧。4.与适碘组(NI)相比,各低碘组(LI)垂体TSH细胞面数密度和体积密度随缺碘程度的加重呈增高趋势。中度低碘组(L2)和重度低碘组(L1)明显增高(P＜0.05),尤其重度低碘组(L1)增高更为显著(P＜0.01)。轻度低碘组(L3)和高碘组(HI)略高于适碘组(NI),但差异无统计学意义(P＞0.05)。5.随缺碘程度的加重,各低碘组(LI)强阳性细胞数量呈减少趋势,与适碘组(NI)相比,重度低碘组(L1)明显减少,且差异有统计学意义(p＜0.01)。高碘组(HI)较适碘组(NI)增高,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:1.长期严重碘缺乏可导致妊娠期大鼠血清甲状腺激素水平明显降低。2.碘缺乏和碘过量均未对垂体重量产生明显影响。***细胞的体积密度和面数密度随着低碘组碘剂量的减少而明显升高,随着缺碘程度的加重,TSH细胞功能活跃,以弱阳性细胞为主;而高碘时细胞大多处于颗粒贮存状态,强阳性细胞数量增多。4.低碘对孕鼠的影响比高碘更为显著;轻度低碘时,机体首先启动甲状腺的自身调节机制,当无法维持正常的甲状腺激素水平时,下丘脑-腺垂体-甲状腺轴作为二线保护机制而启动,促使垂体促甲状腺激素细胞处于代偿性高分泌功能状态,合成并释放大量TSH,TSH作用于甲状腺,刺激甲状腺组织增生,甚至形成甲状腺肿,甲状腺重量明显增加。而30倍高碘摄入量,对甲状腺功能及垂体细胞形态学不会有显著变化。

关键词：碘缺乏碘过量碘化钾垂体促甲状腺激素细胞孕鼠

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益卫汤抗孕鼠流感病毒的实验研究

益卫汤抗孕鼠流感病毒的实验研究

作者：何佳湖北中医学院

学位级别：硕士

目的:妊娠是一种复杂的生理过程,从免疫学上类似于器官移植,但结局又与器官移植不同,妊娠所致的孕妇全身和局部免疫功能抑制是母体对胎儿产生的保护性免疫应答。目前认为妊娠所致的免疫抑制主要是细胞免疫抑制,IgG、IgM随妊娠进程呈进... 详细信息

目的:妊娠是一种复杂的生理过程,从免疫学上类似于器官移植,但结局又与器官移植不同,妊娠所致的孕妇全身和局部免疫功能抑制是母体对胎儿产生的保护性免疫应答。目前认为妊娠所致的免疫抑制主要是细胞免疫抑制,IgG、IgM随妊娠进程呈进行性下降,这些变化使机体对各种病毒感染的易感性增加,引起本来潜伏在体内的细菌或病毒再活化,或者感染时引起比正常人更强烈的反应和更严重的疾病过程。流行性感冒(下称流感)是由流行性感冒病毒(下称流感病毒)引起的急性呼吸道传染病,在人群中常引起散发或流行,孕妇容易感染。西医目前大多数抗菌素和抗病毒药物对子代有不良影响而不适宜用于孕期感染。因此,寻求孕期安全高效的药物治疗是临床亟待解决的重大问题。近年来,随着对中医药研究的逐步深入,中医药抗病毒显示出独特的治疗作用。实践证明,许多中草药具有较好的抗病毒作用,而且其毒副作用小或无,临床的安全性高。导师郭荣主任医师经多年临床实践总结出了治疗孕期流感的中药方剂益卫汤,经临床实践疗效显著,无毒副作用。为了探明其治疗孕期流感的作用机理,本课题对该方进行了动物实验研究。方法:将雌雄小鼠按一定比例合笼,发现有阴道栓或镜检发现精子者作为妊娠第1天,选出孕鼠40只分成4组,每组10只。正常对照组:不接种病毒。模型组:每只用流感病毒鼠肺适应株FM10.05ml滴鼻。病毒唑组:按模型组接种病毒,同时给与病毒唑(0.065g/kg·d,连用7d)。益卫汤组:按模型组接种病毒,同时灌胃给予中药益卫汤(11g/kg·d,连用7d)。正常对照组和模型组均灌服等量生理盐水。实验第7天,末次给药后1小时,称重后处死孕鼠,采集血液及各脏器组织。观察益卫汤对感染孕鼠一般体征、单核巨噬细胞吞噬功能、肺指数、肺组织病理变化及脾指数的影响。结果:FM1株流感病毒感染孕鼠后,中药益卫汤对孕鼠一般体征有明显改善作用。碳粒廓清试验中,模型组单核巨噬细胞吞噬功能较正常对照组降低(p＜0.01),中药益卫汤组K值和a值较模型组高,与模型组相比有明显差异(p＜0.05),与病毒唑组比较无明显差异(p＞0.05)。益卫汤组孕鼠肺指数值,与模型组相比明显降低(p＜0.01),并且中药益卫汤对病毒感染孕鼠肺组织病理变化有一定改善作用。实验各组脾指数无明显差异。结论:中药益卫汤可明显改善流感病毒FM1感染引起的孕鼠一般体征变化,可提高流感病毒FM1感染孕鼠的单核巨噬细胞吞噬功能,降低肺指数,减轻感染孕鼠的间质性肺炎的病理改变。由此提示,中药益卫汤发挥了中药复方抗病毒的协同作用,通过抑制病毒增殖及调控免疫反应达到治疗效果。综观本方具有抗病毒、免疫调节等作用,为临床应用和进一步实验研究提供了依据。

关键词：益卫汤流感病毒孕鼠抗病毒免疫调节

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西咪替丁对孕鼠生殖和免疫功能影响的研究

西咪替丁对孕鼠生殖和免疫功能影响的研究

作者：罗旭东四川大学

学位级别：硕士

西咪替丁是一种组胺H受体阻断剂,临床上广泛应用于消化道溃疡及十二指肠溃疡的疾病,抗酸效果良好。国外现也有报道西咪替丁用于妊娠抗酸症状,但是妊娠期间的西咪替丁用药安全问题的研究比较少而且争议较多。仅有国外进行的几项流行病学... 详细信息

西咪替丁是一种组胺H受体阻断剂,临床上广泛应用于消化道溃疡及十二指肠溃疡的疾病,抗酸效果良好。国外现也有报道西咪替丁用于妊娠抗酸症状,但是妊娠期间的西咪替丁用药安全问题的研究比较少而且争议较多。仅有国外进行的几项流行病学相关研究,涉及到西咪替丁对妊娠影响的安全性问题。西咪替丁不仅仅局限于抗酸治疗方面的应用,而且现在还发现西咪替丁还具有很多种作用,尤其是作为一种免疫调节剂的研究成为热门。因此本研究进一步探讨西咪替丁对孕鼠的生殖功能的影响和对免疫作用的改变,研究西咪替丁对妊娠的影响及对胚胎的毒性和妊娠期间服用西咪替丁对孕期免疫力的改变情况,为临床合理用药提供依据。本文首先采用致畸实验方法,即孕鼠服用西咪替丁对妊娠和子代发育安全性的影响情况,包括孕鼠妊娠情况、胎鼠骨骼畸形、内脏畸形以及胎鼠发育等指标。然后测定孕鼠腹腔巨噬细胞和外周血淋巴细胞数以及采用诱导迟发超敏反应的方法获取致敏的T细胞,采用体外淋巴细胞抗原特异性转化实验检测巨噬细胞的抗原递呈能力(诱导致敏T细胞增殖的能力)和CTLL-2法测定IL-2生

关键词：西咪替丁生殖功能免疫功能孕鼠

植物乳杆菌WLPL04在孕鼠中的移位及其对金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎的预防作用研究

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植物乳杆菌WLPL04在孕鼠中的移位及其对金黄色葡萄球菌引起的乳腺...

作者：钟常城南昌大学

学位级别：硕士

乳腺炎是哺乳期女性常见的炎症疾病,发病率高达33%。目前治疗手段主要是抗生素干预,但抗生素易导致耐药菌的产生和哺乳停止,因此有必要开发新的治疗手段。益生菌具有抑制病原菌、炎症等益生功能。母乳是益生菌重要来源。植物乳杆菌WLPL0... 详细信息

乳腺炎是哺乳期女性常见的炎症疾病,发病率高达33%。目前治疗手段主要是抗生素干预,但抗生素易导致耐药菌的产生和哺乳停止,因此有必要开发新的治疗手段。益生菌具有抑制病原菌、炎症等益生功能。母乳是益生菌重要来源。植物乳杆菌WLPL04源自健康母乳,具有广谱抗菌性能,可定植肠道并移位。为此,本文在对植物乳杆菌WLPL04进行荧光标记的基础上,通过孕鼠模型和乳腺炎母鼠模型,探究其在母鼠体内的移位路径及其对乳腺炎的预防作用。首先构建了红色荧光蛋白标记的WLPL04-m Cherry工程菌株。即以p MG36e为骨架,3种启动子驱动的m Cherry红色荧光蛋白基因为标记,构建重组质粒p MG36e-P-m Cherry、p MG36e-P-m Cherry和p MG36e-P-m Cherry,将其分别导入大肠杆菌,用红霉素抗性筛选重组子,并通过PCR、菌落颜色观察和激光共聚焦显微镜观察进行验证。验证成功后,将重组质粒导入植物乳杆菌WLPL04,并进行验证。结果显示,所选WLPL04重组子均能通过PCR检测到重组质粒的特异性条带,其菌落颜色无明显变化;但经离心后观察显示,含p MG36e-P-m Cherry的重组子显示明显粉色。激光共聚焦显微镜观察显示含p MG36e-P-m Cherry重组子具最强红色荧光;含p MG36e-P-m Cherry重组子次之;含p MG36e-P-m Cherry的重组子具微弱红色荧光。表明含重组质粒的WLPL04工程菌株已成功构建(分别命名为WLPL04/p MG36e-P-m Cherry、WLPL04/p MG36e-P-m Cherry和WLPL04/p MG36e-P-m Cherry)。进一步通过扫描电镜观察和生长曲线测定,分析重组质粒对植物乳杆菌的菌体形态及生长的影响,结果显示质粒p MG36e-P-m Cherry、p MG36e-P-m Cherry和p MG36e-P-m Cherry对植物乳杆菌的菌体形态及生长均无显著影响。综上,本研究选择WLPL04/p MG36e-P-m Cherry进行后续实验,并重命名为WLPL04-m Cherry。之后构建了孕鼠模型,在母鼠孕晚期和哺乳期补充WLPL04-m Cherry,通过体重监测、活菌计数及激光共聚焦显微镜观察、肠组织染色、免疫荧光分析,探究WLPL04-m Cherry在孕鼠体内的移位及可能路径。结果显示,补充WLPL04-m Cherry能增加母鼠体重,但不影响脏器指数。活菌计数结果显示,WLPL04-m Cherry能定植于母鼠肠道并移位到乳腺、胸腺、肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结(MLN)、肾脏、回肠、结肠、盲肠和脑中,同时在孕鼠肠道及肠外器官中的数量更多。进一步收集孕晚期乳腺、胎盘、脐带和6日龄仔鼠胃内容物(代替母鼠乳汁),进行活菌计数和激光共聚焦显微镜观察分析,结果显示WLPL04-m Cherry可在胎盘、脐带和乳汁中检出且显示红色荧光。母鼠回肠、结肠组织学分析显示,补充WLPL04-m Cherry对母鼠肠道组织结构无显著影响。免疫荧光染色结果显示,补充WLPL04-m Cherry对母鼠肠道和乳腺的紧密连接蛋白无明显影响。综上,植物乳杆菌WLPL04可在健康机体内定植并发生移位且对肠道及血乳屏障无不良影响。最后构建了金黄色葡萄球菌诱导的母鼠乳腺炎模型,通过活菌计数、H&E染色、免疫组化、免疫荧光染色和TUNEL染色,探究补充植物乳杆菌WLPL04-m Cherry对乳腺炎的预防作用。结果显示,补充WLPL04-m Cherry可降低母鼠乳腺、MLN和肝脏中的金黄色葡萄球菌的活菌数;能显著降低乳腺炎母鼠乳腺的组织病理学评分;能降低乳腺MPO表达量及其酶活;能维持紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1的水平;能缓解由金黄色葡萄球菌引起的乳腺细胞凋亡。体外WLPL04-m Cherry-金黄色葡萄球菌共培养模型结果显示WLPL04-m Cherry能有效抑制金黄色葡萄球菌的生长。综上,补充WLPL04-m Cherry可通过增强母鼠血乳屏障、抑制金黄色葡萄球菌生长、减少乳腺细胞凋亡等作用,有效预防金黄色葡萄球菌引起的母鼠乳腺炎。综上,本研究成功对母乳源植物乳杆菌WLPL04进行红色荧光标记,得到工程菌株WLPL04-m Cherry。在孕晚期及哺乳期补充WLPL04-m Cherry后,其能在不影响肠道和乳腺紧密连接蛋白的情况下,从肠道移位到肠外器官,且在孕鼠中数量较高。WLPL04-m Cherry还能通过抑制金黄色葡萄球菌的生长,修复血乳屏障,减少乳腺细胞凋亡来预防金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎。本文结果为后续植物乳杆菌的开发应用提供数据支撑。

关键词：植物乳杆菌WLPL04 荧光标记孕鼠移位乳腺炎

雌孕激素对孕鼠肝脏、胎盘组织中FXR/BSEP受体系统表达的影响研究

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雌孕激素对孕鼠肝脏、胎盘组织中FXR/BSEP受体系统表达的影响研究

作者：张利平重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过测定孕酮、苯甲酸雌二醇以及孕酮和苯甲酸雌二醇合用诱发的孕鼠肝内胆汁淤积症模型肝脏、胎盘组织中法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)及胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)的表达情况,探讨雌孕激素诱导妊娠期肝内胆... 详细信息

目的:通过测定孕酮、苯甲酸雌二醇以及孕酮和苯甲酸雌二醇合用诱发的孕鼠肝内胆汁淤积症模型肝脏、胎盘组织中法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)及胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)的表达情况,探讨雌孕激素诱导妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)过程中FXR和BSEP的作用机制。方法:孕15天SD大鼠60只随机分成对照组、实验组(A组、B组、C组),分别给予生理盐水,孕酮,苯甲酸雌二醇,苯甲酸雌二醇和孕酮合用皮下注射5天。于用药前、用药后测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆酸(TBA)总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)水平;测定胎鼠生长发育情况;H.E染色观察肝脏、胎盘组织形态学变化,免疫组化法测定肝脏及胎盘BSEP、FXR的表达情况。结果:用药后,实验组各项血清生化指标明显高于对照组水平(P0.05);实验组用药后各项血清生化指标较用药前显著升高(P鼠体重、死胎数与对照组相比较有显著差异(P孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积典型表现, C组肝脏结构紊乱,肝细胞肿胀,出现脂肪变性,并出现炎症性改变。免疫组化法检测到,实验组肝脏FXR表达升高,BSEP表达降低,与对照组相比差异具有显著性(P孕鼠胎盘也发现了少量FXR和BSEP的表达。结论:雌激素具有明确的诱发孕鼠肝内胆汁淤积症的作用,孕激素,雌孕激素也可诱导孕鼠肝内胆汁淤积症。二者合用加剧了胆汁淤积的程度,肝脏病变明显加重,加剧了胎儿预后不良。雌激素诱导的机理可能是通过上调肝脏FXR的表达及下调肝脏BSEP的表达来影响胆汁酸的合成与代谢,进而导致了肝内胆汁淤积的发生;孕激素引起ICP,可能因为某些孕酮代谢产物诱导了BSEP的传输抑制作用致胆汁酸淤积;同时孕酮代谢障碍造成非结合胆红素增高也是引起胆汁淤积的原因之一。孕激素可以强化雌激素诱导ICP的作用。

关键词：孕鼠胆汁淤积血清生化指标胆盐输出泵法尼醇受体

A型肉毒毒素对SD孕鼠激素水平及胚胎发育的影响

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A型肉毒毒素对SD孕鼠激素水平及胚胎发育的影响

作者：李丽遵义医学院

学位级别：硕士

目的：探讨肌肉注射A型肉毒毒素（BTX-A）对SD孕鼠血清雌激素、孕激素及其受体在生殖器官中表达的影响，了解BTX-A对胚胎的发育毒性，为BTX-A在临床用药的安全性提供理论依据和实验参考数据。方法： ***-A急性毒性试验：对SD雄性大鼠... 详细信息

目的：探讨肌肉注射A型肉毒毒素（BTX-A）对SD孕鼠血清雌激素、孕激素及其受体在生殖器官中表达的影响，了解BTX-A对胚胎的发育毒性，为BTX-A在临床用药的安全性提供理论依据和实验参考数据。方法： ***-A急性毒性试验：对SD雄性大鼠肌肉注射BTX-A检测最小致死量（MLD）与半数致死量（LD50）。(1)选健康成年普通级雄性SD大鼠20只，随机分为4组，右侧腓肠肌肌肉注射15U/kg、30U/kg、60U/kg、90U/kgWB4个剂量的BTX-A，观察BTX-A对大鼠的最小致死剂量（在90U/kg）。(2)选雄性SD大鼠50只，随机分为5组，以MLD为基础设计右侧腓肠肌肌肉注射剂量62U/kg、77U/kg、96U/kg、120U/kg、150U/kgWB5个剂量组，观察各组大鼠中毒、死亡情况，根据孙氏综合法改进的查表法，计算出BTX-A对SD大鼠7天的LD50。 ***-A对SD孕鼠血清雌激素、孕激素及受体表达、胚胎发育的影响：选SD孕鼠60只，随机分为6组每组10只。阴性对照组(NS，0.5ml/只)肌肉注射;A型肉毒毒素药物组分4个剂量（BTX-A30U/kg、60U/kg、90U/kg、120U/kgWB）肌肉注射;维甲酸药物对照组（100mg/kgWB灌胃）。各组孕鼠均于孕第8天给药1次，于孕18天麻醉取材。(1)孕鼠检测指标：测孕期体重增重率、卵巢与子宫重量指数、ELISA法测孕鼠血清雌激素、孕激素水平和IHC法测卵巢、子宫的雌激素受体与孕激素受体表达的情况。(2)胚胎检测指标：胚胎畸形、存活率、胎重、身长、尾长及四肢主要骨的骨长与骨化的检测。结果： 1. BTX-A对大鼠急毒试验：(1)最小致死量检测(MLD)：正常成年雄性大鼠分4组肌肉注射BTX-A（15U/kg、30U/kg、60U/kg、90U/kg），当剂量为90U/kg时出现急性中毒症状并出现死亡，由此提示BTX-A对大鼠的MLD为90U/kg。(2)半数致死量检测(LD50)：在MLD基础上再设BTX-A62U/kg、77U/kg、96U/kg、120U/kg、150U/kg等5个剂量组，最高剂量组(150U/kg)中毒症状最严重，7天死亡率达100%，根据孙氏综合法改进的查表法计算得出BTX-A对大鼠的LD50为114.77U/kg。 2. BTX-A对SD孕鼠孕期体重增重率、血清激素水平、生殖器官重量指数及其激素受体的影响：孕第18天检测各组孕鼠：①各组孕鼠在孕15天时，除BTX-A30U/kg剂量组外，BTX-A其余3个剂量组孕鼠体重均低于阴性对照组，孕18天时仅有120U/kg剂量组体重低于阴性对照组，相比均有显著性差异(P＜0.05);②BTX-A4个剂量组的血清雌激素、孕激素值均低于阴性对照组，除30U/kg剂量组以外，其余3组与阴性对照组比较，均有显著性差异(P＜0.05)。③卵巢和子宫90U/kg、120U/kg剂量组的重量指数均低于阴性对照组，相比均有显著性差异(P＜0.05)。④BTX-A各剂量组孕鼠子宫内膜与卵巢黄体的ER、PR表达均高于阴性对照组，相比均有显著性差异(P＜0.05)。且随着BTX-A剂量增加而表达增强。 3. BTX-A对大鼠E18胚胎发育的影响：①BTX-A剂量为120U/kg时，胚胎活胎率低于与阴性对照组，两组相比有显著性差异(P＜0.05)。BTX-A60U/kg、90U/kg剂量组出现畸形胚胎。②BTX-A120U/kg剂量组胚胎体重、尾长与身长均低于阴性对照组，比较有显著性差异(P＜0.05)，BTX-A4个剂量组的胎盘重均低于阴性对照组，相比较均有显著性差异(P＜0.05)。③BTX-A剂量达60U/kg、90U/kg时前肢肩胛骨、肱骨、尺骨、桡骨及后肢髋骨长度小于阴性对照组，比较有显著性差异(P＜0.05)，而股骨、胫骨、腓骨长度在BTX-A剂量60U/kg、90U/kg时均低于阴性对照组，比较有显著性差异(P＜0.05)。上述所有骨的骨化点长度在BTX-A的剂量30U/kg、60U/kg、90U/kg时均小于阴性对照组，相比较均有显著性差异(P＜0.05)。结论： 4.1大鼠肌肉注射BTX-A的最小致死剂量为90U/kg，而半数致死量为114.77U/kg。 4.2本实验条件下，孕鼠肌肉注射BTX-A剂量小于30U/kg时无母体毒性，无胚胎发育毒性。当剂量大于60U/kg时随剂量增加，孕鼠母体毒性与胚胎发育毒性逐渐加重，且有致畸作用。提示：微量肌肉注射BTX-A在安全剂量范围内（小于30U/kg）无孕鼠母体毒性及胚胎发育毒性作用，无致畸作用。

关键词： A型肉毒毒素雌激素孕激素胚胎发育孕鼠

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强迫游泳后孕鼠中枢ERα的表达

强迫游泳后孕鼠中枢ERα的表达

作者：王欲中国医科大学

学位级别：硕士

目的观察孕鼠在强迫游泳实验(FST)中的不动时间,了解孕鼠是否具有更明显的行为绝望表现(即停止挣扎、不动时间延长);同时观察反复强迫游泳后孕鼠的行为绝望程度(不动时间长短)是否加重;半定量测定强迫游泳后小鼠大脑皮质雌激素α受体(... 详细信息

目的观察孕鼠在强迫游泳实验(FST)中的不动时间,了解孕鼠是否具有更明显的行为绝望表现(即停止挣扎、不动时间延长);同时观察反复强迫游泳后孕鼠的行为绝望程度(不动时间长短)是否加重;半定量测定强迫游泳后小鼠大脑皮质雌激素α受体(ER)的表达水平,比较孕鼠和非孕鼠之间的差异;简单分析孕鼠在FST中的不动时间与中枢ER表达水平之间的数量关系;初步探讨小鼠FST的行为绝望程度(不动时间长短)与中枢ER表达水平之间是否直接相关。材料及方法同批次雌昆明鼠,来源于中国医科大学动物实验中心。随机分为受孕组(合笼受孕)和对照组,共获得31只孕鼠和27只对照鼠;其中有3只孕鼠早产,未进行第6次FST和免疫组化检测。孕鼠受精后12天,开始进行FST,随机抽取非孕鼠作为对照;一共6次FST,记录第2次和第6次的不动时间。完成6次FST后,取大脑组织,共有28只孕鼠和13只对照鼠标本;以海马为中心纵切,石蜡包埋,切片行免疫组化链霉菌抗生物素-过氧化物酶(SP)法半定量检测大脑皮质ER。统计学分析采用SPSS13.0软件;计量资料不满足正态分布和方差齐性,采取Mann-Whitney U检验;满足总体正态和样本方差齐性,采取两独立样本t检验;两变量间关系采用Pearson直线相关分析。结果孕鼠在第2次和第6次FST中不动时间均长于非孕鼠,P分别为0.011和0.016,差异有统计学意义;孕鼠第6次FST比第2次FST不动时间长,P为0.016,差异有统计学意义。强迫游泳后孕鼠和对照鼠大脑皮质均有ER表达,但孕鼠中枢ER组化评分高于非孕鼠,P为0.008,差异有统计学意义。比较第6次FST不动时间t＞180秒的孕鼠和t＜180秒的孕鼠之间大脑皮质ER组化评分差异,P为0.128,无统计学意义。小鼠两次FST的不动时间分别与中枢ER组化评分做散点图,均无明显直线相关趋势,R值为0.041和0.082,P值0.800和0.607,回归系数均无显著意义,不能认为有直线关系。结论孕鼠在FST中不动时间长于非孕鼠,行为绝望状态更明显,具有抑郁倾向;经过6次强迫游泳后孕鼠在FST中不动时间延长,可考虑作为一种产前抑郁症的模型。强迫游泳后孕鼠中枢ER表达水平明显高于非孕鼠,它可能与产前抑郁症的发生有关。孕鼠在FST中不动时间的长短与中枢ER表达水平之间尚未发现有数量上的联系;小鼠在FST不动时间与中枢ER水平之间尚未发现有直线关系,暂不能认为二者直接相关。

关键词：孕鼠强迫游泳试验(FST) 免疫组化(IH) 雌激素受体α(ERα)