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夹心elisa法检测脂肪酸结合蛋白的评价

国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2003年第4期24卷 248-248页

作者：范业萍孙心岩

心脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是一种分子量较小的蛋白.以较高浓度存在于心肌细胞浆中,因此,H-FABP被认为是心肌缺血性损伤有效的指标。本文评价了一种商品化的H-FABP为elisa检测方法(MARKIT-M)。

关键词：脂肪酸结合蛋白夹心elisa法心肌缺血性损伤 MARKIT-M法

肾综合征出血热患者T_H1/T_H2、Tc1/Tc2亚群比例及有关细胞因子变化的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第6期22卷 610-613页

作者：刘京梅刘雪松欧阳为明朱勇李琦曹云新金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者TH1样和TH2样细胞平衡状态以及血清中细胞因子的变化。方法　收集HFRS患者和健康个体血清 ,采用夹心elisa方法测定IFN γ、IL 4和TNF α的水平。分离PBMC ,采用三色流式细胞术分析HFRS患者CD4 + T... 详细信息

目的　探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者TH1样和TH2样细胞平衡状态以及血清中细胞因子的变化。方法　收集HFRS患者和健康个体血清 ,采用夹心elisa方法测定IFN γ、IL 4和TNF α的水平。分离PBMC ,采用三色流式细胞术分析HFRS患者CD4 + T细胞和CD8+ T细胞中IFN γ+ 和IL 4 + 细胞的百分率 ,观察HFRS患者TH1 TH2、Tc1 Tc2比例的变化 ,比较了不同病程和病情HFRS患者血清中上述指标的变化。结果　HFRS患者血清中TH1类和TH2类细胞因子水平均明显升高 ,其中IFN γ和IL 4的平均水平显著高于健康个体 (P =0 .0 16 ,P =0 .0 19)。HFRS患者PBMC中TH1、TH2、Tc1、Tc2细胞的平均百分率均高于健康个体 ,Tc细胞比例的改变较TH 细胞明显 ,TH1样细胞的比例较TH2样细胞变化明显。发热期患者血清中IFN γ、IL 4和TNF α的水平明显高于恢复期患者。发热期的重症患者的IFN γ水平升高较轻症明显。结论　HFRS患者血清中IFN γ和IL 4水平以及PBMC中TH1、TH2、Tc1和Tc2细胞的比例均有所升高 ,发热期的患者和重症HFRS患者上述参数变化更明显。

关键词：肾综合征出血热 TH1/TH2 Tc1/Tc2 细胞因子 HFRS 夹心elisa法三色流式细胞术

酶联免疫吸附试验间接抗体夹心检测SARS-CoV抗原方法的建立和应用

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中华流行病学杂志 2005年第4期26卷 277-281页

作者：丘立文汤汉文王亚娣廖金娥郝卫温坤何秀敏车小燕南方医科大学珠江医院中心实验室广州510282 珠海经济特区海泰生物制药有限公司

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARSCoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(elisa)方法用于SARSCoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARSCoVN蛋白免疫BALB/c小鼠和新... 详细信息

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARSCoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(elisa)方法用于SARSCoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARSCoVN蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体,采用elisa间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验,建立抗原捕获抗体夹心elisa法测定SARSCoVN抗原。结果获得9株特异性针对SARSCoVN蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体,通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验,筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体,与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体,建立了抗体夹心elisa法,测定重组SARSCoVN蛋白最高灵敏度为50pg/ml,特异性达99.86%,测定420份血清学确诊的SARS患者血清,其中发病1-10天阳性检出率为90.1%,11-20天检出率为23%,21天以上均为阴性,与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应。结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的SARSCoV抗原的elisa捕捉法,可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究。

关键词：酶联免疫吸附试验(elisa) 冠状病毒(SARS-CoV) 夹心elisa法 SARS-CoV感染严重急性呼吸综合征多克隆抗体 BALB/c小鼠 elisa间接法 elisa捕捉法单克隆抗体原方检测捕获抗体新西兰大白兔辣根过氧化物 SARS患者流行病学研究

抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体的研制及初步应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 209-212页

作者：谭峰潘长旺梁韶晖黄慧聪温州医学院寄生虫学教研室温州325035

目的制备抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体并研究其初步应用。方法用广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选分泌高滴度、高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用所得的单克隆抗体以Western blotting检测广州管圆线虫病患... 详细信息

目的制备抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体并研究其初步应用。方法用广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选分泌高滴度、高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用所得的单克隆抗体以Western blotting检测广州管圆线虫病患者血清,并建立双抗体夹心elisa法检测感染大鼠血清。结果获得3株分泌高滴度抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株(2A2、3F1、4H2),其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、猪囊尾蚴、旋毛虫抗原均不发生交叉反应。3株单克隆抗体均可识别广州管圆线虫成虫可溶性抗原蛋白Mr 15 000,以及患者血清中两种循环抗原Mr24 000和Mr15 000。双抗体夹心elisa检测阳性率为76.5%。结论制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的单克隆抗体,且在循环抗原的检测方面有应用前景。

关键词：广州管圆线虫可溶性抗原单克隆抗体循环抗原夹心elisa法

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杜仲提取物抗HIV活性成分的分离鉴定

中药材 2008年第6期31卷 847-850页

作者：吕琳孙燕荣徐伟刘叔文饶进军吴曙光南方医科大学药学院广东广州510515 科技部中国生物技术发展中心北京100081

目的:研究杜仲提取有效成分对HIV gp41六股螺旋束的抑制作用,为寻求新的抗HIV病毒进入抑制剂提供实验依据。方法:将杜仲水提取液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,萃取物干燥称量后制备成浓度为1mg/ml的样品液,用夹心免疫酶联法检测... 详细信息

目的:研究杜仲提取有效成分对HIV gp41六股螺旋束的抑制作用,为寻求新的抗HIV病毒进入抑制剂提供实验依据。方法:将杜仲水提取液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,萃取物干燥称量后制备成浓度为1mg/ml的样品液,用夹心免疫酶联法检测杜仲及其萃取物对HIV gp41六股螺旋束结构形成的抑制作用。结果:发现杜仲抗HIV gp41的活性部分存在于在乙酸乙酯萃取物中,经过醇沉后的上清液失去活性,而沉淀物具有较高的活性。结论:杜仲可抑制HIV gp41六股螺旋束的形成从而起到抗HIV的作用,其活性部位主要在乙酸乙酯萃取物里,活性物质是能被乙醇沉淀的大分子物质。

关键词： HIV gp41 病毒进入抑制剂杜仲夹心elisa法

抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 170-171,175页

作者：户义刘雪松朱勇刘莹许晓光薛江楠金伯泉第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032

目的 :制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体 (mAb) ,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心elisa法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法 :以hBCMA Ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合制备抗Fc段mAb ,用elisa等方法鉴定mAb的Ig亚... 详细信息

目的 :制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体 (mAb) ,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心elisa法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法 :以hBCMA Ig融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合制备抗Fc段mAb ,用elisa等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性 ,建立用于检测Ig融合蛋白的夹心elisa法 ;Westernblot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联 ,制备亲和层析柱 ,对LAIR1 Ig融合蛋白进行纯化。结果 :获得 7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤 (FMUFc1～FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb ,FMUFc5作为酶标记mAb ,成功地建立了检测Ig融合蛋白的elisa法 ,敏感度达到 2 μg/L ;在 7株mAb中 ,FMUFc6可用于Ig融合蛋白的Westernblot检测。用FMUFc6mAb制备的亲和层析柱 ,可有效地纯化LAIR1 Ig融合蛋白。结论 :成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb ,建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法。

关键词： Ig融合蛋白 Fc段单克隆抗体夹心elisa法亲和层析法

血清sPTA1(CD226)在判别肾移植术后急性排斥反应中的作用

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解放军医学杂志 2002年第10期27卷 865-867页

作者：李州利石炳毅蔡明周文强贾卫金伯泉解放军第309医院北京100091 第四军医大学免疫学教研室

用夹心elisa法测定肾移植患者血清sPTAP1水平。观察肾移植患者围手术期及急性排斥反应时血清可溶性血小板/T细胞活化抗原1（sPTA1,CD226）水平与排斥反应的相关性。结果显示,19例肾移植患者中经病理证实的排斥反应时sPTA1显著升高,经加... 详细信息

用夹心elisa法测定肾移植患者血清sPTAP1水平。观察肾移植患者围手术期及急性排斥反应时血清可溶性血小板/T细胞活化抗原1（sPTA1,CD226）水平与排斥反应的相关性。结果显示,19例肾移植患者中经病理证实的排斥反应时sPTA1显著升高,经加强免疫抑制剂治疗后,血清sPTA1下降,且sPTA1水平的变化早于临床症状表现。研究表明,sPTA1是一项较为可靠的判别和监测急性排斥反应的指标,与病理检查的结果有较好的一致性,可以作为移植物急性排斥反应的监测和预警指标。

关键词：术后肾移植可溶性血小板 T细胞活化抗原移植物排斥夹心elisa法

IL-12对SLE患者PBMC分泌IL-10、IFN-γ的影响

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中国皮肤性病学杂志 2004年第9期18卷 535-536页

作者：张红娟王宗发彭学标杨健杨文林广州医学院第二附属医院皮肤科广东广州510260 第一军医大学南方医院皮肤科广东广州510515

目的　了解白细胞介素 12 (IL 12 )对SLE患者外周血单一核细胞 (PBMC)分泌白细胞介素 10 (IL 10 )、γ 干扰素 (IFN γ)的影响。方法　在培养体系中加入或不加入IL 12 ,观察IL 12对SLE患者及正常对照PBMC分泌IL 10 ,IFN γ的水平变化... 详细信息

目的　了解白细胞介素 12 (IL 12 )对SLE患者外周血单一核细胞 (PBMC)分泌白细胞介素 10 (IL 10 )、γ 干扰素 (IFN γ)的影响。方法　在培养体系中加入或不加入IL 12 ,观察IL 12对SLE患者及正常对照PBMC分泌IL 10 ,IFN γ的水平变化。结果　IL 12可使SLE患者PBMC分泌IL 10水平降低而使IFN γ水平升高。结论　在体外 ,加入适当的IL

关键词：红斑狼疮,系统性细胞因子夹心elisa法

N-V蛋白酶两种elisa检测方法的建立及其初步应用

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N-V蛋白酶两种ELISA检测方法的建立及其初步应用

作者：石立红吉林大学

学位级别：硕士

N-V蛋白酶是从一种我国天然海洋生物体内发现的具有强烈纤维蛋白溶解作用的纤溶酶,对血栓分解具有潜在的作用[1]。为了进一步研究N-V蛋白酶的作用机理和它的代谢过程以及此药在临床上的应用,本实验初步建立了elisa的两种检测方法并对N-... 详细信息

N-V蛋白酶是从一种我国天然海洋生物体内发现的具有强烈纤维蛋白溶解作用的纤溶酶,对血栓分解具有潜在的作用[1]。为了进一步研究N-V蛋白酶的作用机理和它的代谢过程以及此药在临床上的应用,本实验初步建立了elisa的两种检测方法并对N-V蛋白酶在动物体内的代谢过程作了初步研究。 N-V蛋白酶是一种氨基肽酶[2],通过对N-V蛋白酶多克隆抗体的制备,我们对氨基肽酶这一酶类多克隆抗体的免疫制备过程有了初步了解,采用N-V蛋白酶加入弗氏佐剂免疫家兔的方法得到免疫血清[3],利用蛋白质等电点、盐析和疏水特性,运用硫酸铵沉淀法和phenyl-sepharose疏水色谱柱结合法提纯免疫血清。比一般的DEAE-纤维素层析、分子筛和硫酸铵-辛酸沉淀法获得的抗体相比,具有纯度高、实验步骤少、活性好、回收率高等优点。分别用双向免疫扩散电泳和SDS-PAGE电泳测效价和纯度,成功的用过碘酸钠氧化法把HRP标记于N-V蛋白酶多克隆抗体以及二抗即羊抗兔抗体,且酶标记质量完全符合以后的实验要求。我们成功建立N-V蛋白酶的两种elisa检测方法,分别为夹心elisa和间接elisa法。并将此方法与其他蛋白定量方法作了比较。该方法为N-V蛋白酶的药代和毒理研究提供技术手段,为临床中用药提供参考和临床检验提供技术,并初步确定正常家兔对N-V蛋白酶的体液免疫应答特点以及N-V蛋白酶在家兔体内的代谢过程。

关键词： N-V蛋白酶多克隆抗体夹心elisa法间接elisa法药物代谢动力学