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CD68、cyclin D1蛋白和bcl-6基因在弥漫性大b细胞淋巴瘤中的表达及意义

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中华病理学杂志 2015年第8期44卷 559-564页

作者：梁晓杰王晋芬白纬孙瑞芳山西省肿瘤医院病理科太原030013

目的探讨CD68、cyclin D1蛋白表达及bcl-6基因重排对弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）预后的影响。方法选取105例有详细随访资料的DLbCL患者石蜡样本，应用免疫组织化学EnVision法进行CD3、CDl0、CD20、CD68、cyclinD1、bcl-6、MUM1、SOX-1... 详细信息

目的探讨CD68、cyclin D1蛋白表达及bcl-6基因重排对弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）预后的影响。方法选取105例有详细随访资料的DLbCL患者石蜡样本，应用免疫组织化学EnVision法进行CD3、CDl0、CD20、CD68、cyclinD1、bcl-6、MUM1、SOX-11免疫标记，根据Han’s分类方法将DLbCL分为生发中心b细胞型（GCb型）和非生发中心b细胞型（***型）；应用荧光原位杂交（FISH）技术检测bcl-6基因重排。应用统计软件分析CD68蛋白、cyclin D1蛋白、bcl-6基因、化疗方案及各临床因素与生存期之间的关系。分别以GCb型、non-GCb型免疫表型和CHOP、R-CHOP化疗方案分组，比较疗效差异。结果105例患者中GCb型19例（18．1％），non-GCb型86例（81．9％），CD68高表达18例（17．1％），cyclin D1高表达36例（34．3％）。bcl-6基因重排21例（21．9％），CD68高表达、cyclinD1高表达与bcl-6基因重排三者之间无相关关系（P〉0．05）；单因素分析发现年龄≤60岁、临床分期I～Ⅱ期、IPI评分0～2分、乳酸脱氢酶（LDH）〈245 IU／L、GCb型、R-CHOP治疗方案患者的预后较好（P〈0．05），性别、原发部位与预后无相关关系（P〉0．05）。CD68、cyclin D1高表达、bcl-6重排者预后不良（P〈0．05）；分层结果显示GCb型或non-GCb型CD68高表达对比同种免疫表型组都具有较差的预后，non-GCb型时cyclinD1高表达和bel．6基因重排的预后不佳（P〈0．01，P=0．02）；治疗方案分层分析得出，在使用CHOP方案治疗时，CD68、eyclinD1高表达预后较差（P〈0．05），R-CHOP方案时，CD68、cyclinD1高表达与总生存期的差异无统计学意义（P=0．428和0．168）。多因素COX模型分析显示CD68高表达（P=0．026）、cyelinD1高表达（P=0．003）及LDH高水平（P=0．005）为各自独立的预后不良因素。结论CD68、cyclinD1高表达和bel-6基因重排提示预后差，CD68、cyclinD1蛋白和bel-6基因可以作为与DLbCL患者预后指标。

关键词：淋巴瘤大b-细胞弥漫性细胞周期蛋白D1 基因 bcl-6 预后

弥漫性大b细胞淋巴瘤中PRDM 1基因甲基化状态与预后的相关性

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中华病理学杂志 2016年第12期45卷 831-837页

作者：张兴艳马志萍崔文丽陈瑢古丽那尔·阿布拉江苗娜李新霞新疆医科大学第一附属医院病理科乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院血液科乌鲁木齐830054

目的探讨弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）组织中PRDM1基因启动子甲基化状态与免疫分型及预后的相关性，初步揭示该基因甲基化在DLbCL发生发展中的作用机制。方法选取初治DLbCL石蜡包埋组织100例，反应性增生淋巴结20例作为对照。免疫组织... 详细信息

目的探讨弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）组织中PRDM1基因启动子甲基化状态与免疫分型及预后的相关性，初步揭示该基因甲基化在DLbCL发生发展中的作用机制。方法选取初治DLbCL石蜡包埋组织100例，反应性增生淋巴结20例作为对照。免疫组织化学EnVision法检测CD20、CD10、bcl－6、bcl－2、PRDM1/blimp－1、MUM1蛋白表达，根据Hans分型法分型。甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法检测肿瘤组及对照组中PRDM1基因启动子甲基化状态并分析其与临床特征之间的关系。应用阳离子脂质体试剂转染法介导的小干扰RNA转染OCI－Ly1（GCb型）和OCI－Ly3（AbC型）细胞系，逆转录PCR和Western blot方法检测siRNA转染前后细胞系中PRDM1/blimp－1的表达情况。单因素生存分析（Kaplan－Meier）法分析PRDM1基因启动子甲基化及各临床特征与生存期之间的关系。结果100例DLbCL患者中，GCb型27例（27%），AbC型73例（73%）。PRDM1/blimp－1在DLbCL组阳性表达21例（21%），反应性增生淋巴结中广泛阳性（100%）。PRDM1基因启动子甲基化在肿瘤组共有23例（23%），而对照组中均为非甲基化，两者之间差异有统计学意义（P=0.004）。PRDM1基因启动子甲基化在不同年龄段、性别、Ann Arbor分期、血清乳酸脱氢酶水平、国际预后指数、免疫分型等临床病理参数之间无明显相关性。沉默表达siRNA转染细胞系，逆转录PCR和Western blot结果显示PRDM1/blipm－1在转染组表达较空白对照组及阴性对照组下降。单因素生存分析显示在年龄≥60岁、功能状态（PS）评分3-4分、有b症状组DLbCL患者生存率明显较低。结论在DLbCL患者中存在PRDM1基因启动子区CpG岛甲基化，由其所致的PRDM1基因表达沉默或减少可能是DLbCL发生的一个重要因素。体外沉默siRNA转染OCI－Ly1和OCI－Ly3细胞系，证实PRDM1基因在DLbCL中起到抑癌基因作用，PRDM1基因甲基化有望作为一个候选分子诊断标志物及可能的治疗靶点。

关键词：淋巴瘤大b-细胞弥漫性 DNA甲基化预后细胞系

GCET2兔单克隆抗体的制备及其在弥漫性大b细胞淋巴瘤中初步应用

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中华病理学杂志 2016年第12期45卷 844-849页

作者：潘红阳张昕霞翁媛媛周韧浙江大学病理学与法医研究所浙江大学病理学与病理生理学系杭州310058 宜康(杭州)生物技术有限公司

目的开发制备GCET2兔单克隆抗体，研究其在弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）诊断中的应用。方法采用兔单克隆抗体技术制备GCET2兔单克隆抗体；经免疫印迹、免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学和流式细胞术等方法鉴定其特异性；并用IHC法，... 详细信息

目的开发制备GCET2兔单克隆抗体，研究其在弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）诊断中的应用。方法采用兔单克隆抗体技术制备GCET2兔单克隆抗体；经免疫印迹、免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学和流式细胞术等方法鉴定其特异性；并用IHC法，检测GCET2与其他DLbCL诊断相关标志物（CD10、bcl-6、MUM1、GCET1、FOXP1、Ki-67和CMYC）在81例DLbCL、5例滤泡细胞淋巴瘤和2例burkitt淋巴瘤临床样本组织中的表达。结果GCET2（EP316）抗体能特异性识别生发中心b细胞及其来源的肿瘤组织和细胞系（Raji、Daudi和Ramos）中的GCET2蛋白；对81例DLbCL进行检测，GCET2的阳性率达到43.2%（35/81），明显高于其他生发中心标志物的阳性检出率。此外，CMYC高表达DLbCL样本在GCET2阴性表达和阳性表达样本中所占比例分别为15.2%（7/46）和2.8%（1/35）。结论本研究制备的GCET2（EP316）抗体具有良好的特异性，是一种敏感的生发中心b细胞标记抗体。GCET2与其他分子标志物联用，可能有助于提高对生发中心b细胞型DLbCL的检测敏感性。

关键词：淋巴瘤大b-细胞弥漫性生发中心抗体单克隆

PRDM1基因失活对C-MYC的调控在弥漫性大b细胞淋巴瘤中的作用

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中华病理学杂志 2018年第1期47卷 25-31页

作者：张兴艳马志萍崔文丽庞雪莲陈瑢王蕾张巍李新霞新疆医科大学第一附属医院病理科乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院血液科乌鲁木齐830054

目的研究PRDM1基因失活对C-MYC的调控在弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）中的作用,探讨其与免疫分型及预后相关性.方法选取2009年1月至2015年12月在新疆医科大学第一附属医院收治DLbCL患者的石蜡包埋组织100例,反应性增生淋巴结20例.免... 详细信息

目的研究PRDM1基因失活对C-MYC的调控在弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）中的作用,探讨其与免疫分型及预后相关性.方法选取2009年1月至2015年12月在新疆医科大学第一附属医院收治DLbCL患者的石蜡包埋组织100例,反应性增生淋巴结20例.免疫组织化学EnVision法检测CD20、CD10、MUM1、Ki-67、bcl-6、blimp1、C-MYC、PAX5蛋白表达,根据Hans分型法进行免疫分型.逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测两组中PRDM1、C-MYC mRNA表达情况.单因素生存分析（Kaplan-Meier）法从蛋白、mRNA水平分析 PRDM1/blimp1及C-MYC与预后相关性.应用阳离子脂质体转染法介导的小干扰RNA（siRNA）转染OCI-LY1[生发中心b细胞型（GCb型）]和OCI-LY3（non-GCb型）细胞系,RT-PCR和 Western blot方法检测 siRNA转染前后细胞系中 C-MYC mRNA和蛋白表达情况.结果 100例 DLbCL患者中,GCb型27例（27/100,27.0%）,non-GCb型73例（73/100,73.0%）.blimp1蛋白在肿瘤中阳性表达26例（26/100,26.0%）,反应性增生淋巴结中阳性表达20例（20/20,100.0%）.PRDM1 mRNA 高表达58例（58/100,58.0%）,其中 GCb 型22例（22/27,81.5%）,non-GCb型36例（36/73,49.3%）,两者之间差异有统计学意义（P=0.004）.同时,在mRNA水平,PRDM1在不同免疫分型、血清乳酸脱氢酶（LDH）水平、b症状、原发部位等临床病理参数表达有差异,C-MYC在性别、国际预后指数（IPI）评分、血清 LDH水平之间表达有差异, PRDM1与C-MYC 具有显著相关性（χ2=7.648,P=0.006）.沉默两个细胞系中 PRDM1基因后, RT-PCR和Western blot结果显示在OCI-LY1细胞系中C-MYC基因和蛋白在转染组表达较空白对照组及阴性对照组表达上调.结论在DLbCL中PRDM1基因失活所致的C-MYC基因表达上调可能是DLbCL发生的一个重要因素,为相关研究提供实验证据.同时,PRDM1蛋白及mRNA和免疫分型相关,PRDM1 mRNA是提示不良预后的标志.

关键词：淋巴瘤大b-细胞弥漫性基因原癌基因蛋白质c—myc

MGMT在中枢神经系统弥漫性大b细胞淋巴瘤中的表达及其预后意义

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中华病理学杂志 2016年第12期45卷 850-853页

作者：史倩芸冯潇王建军王璇鲍炜马捷石群立南京军区南京总医院病理科/南京医科大学 210002

目的探讨原发中枢神经系统弥漫性大b细胞淋巴瘤（PCNS-DLbCL）中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）蛋白的表达与临床病理特征、化疗以及预后的关系。方法应用EnVision二步法进行免疫组织化学染色，观察76例PCNS-DLbCL患者石蜡包埋组织... 详细信息

目的探讨原发中枢神经系统弥漫性大b细胞淋巴瘤（PCNS-DLbCL）中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）蛋白的表达与临床病理特征、化疗以及预后的关系。方法应用EnVision二步法进行免疫组织化学染色，观察76例PCNS-DLbCL患者石蜡包埋组织中MGMT蛋白表达情况，并对患者化疗情况及生存时间进行随访。结果PCNS-DLbCL中MGMT蛋白表达率为67.1%（51/76），男性患者MGMT阳性比例高于女性患者（P〈0.05）。单因素生存分析显示影响PCNS-DLbCL患者总生存期的临床病理因素中，年龄和病理分型与预后相关，但差异无统计学意义（P值分别为0.065和0.069）。MGMT阳性且年龄≥60岁的患者行化疗后生存时间较短（P=0.022）；老年化疗患者中，MGMT阳性患者预后明显差于阴性患者（P=0.044）。结论MGMT蛋白表达在男性患者中较多见。在同样行化疗的条件下，年龄≥60岁的患者MGMT阴性较阳性患者预后好，MGMT蛋白表达对于年龄≥60岁PCNS-DLbCL患者的治疗更加具有指导意义。

关键词：中枢神经系统肿瘤淋巴瘤大b-细胞弥漫性预后免疫组织化学

bcl-2蛋白及分类模型在弥漫性大b细胞淋巴瘤中的预后意义

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中华病理学杂志 2012年第12期41卷 813-817页

作者：李敏刘翠苓王小燕薛学敏高子芬北京大学基础医学院病理学系血液病理研究室 100191

目的探讨bcl-2蛋白表达以及Hans、Chan及Muris分类模型对弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）预后的提示意义。方法收集常规及会诊的237例DLbCL患者病例，对其石蜡切片行免疫组织化学EnVision法染色，检测Ki-67、CD3、CD45RO、CD20、CD79a、bc... 详细信息

目的探讨bcl-2蛋白表达以及Hans、Chan及Muris分类模型对弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）预后的提示意义。方法收集常规及会诊的237例DLbCL患者病例，对其石蜡切片行免疫组织化学EnVision法染色，检测Ki-67、CD3、CD45RO、CD20、CD79a、bcl-2、bcl-6、CD10、MUM-1、GCET-1、FOXP-1的表达。使用Hans、Chan及Muris分类模型进行分组并结合临床数据进行分析。结果男性131例，女性106例，平均年龄52．6岁。淋巴结发病最为常见（31．6％，75／237），结外发病以胃肠道（45．2％，71／157）为多见。Ki-67、CD3、CD45RO、CD20、CD79a、bcl-2阳性率分别为96．4％（215／223）、0、14．5％（11／76）、99．1％（231／233）、81．7％（85／104）、61．5％（139／226），分类标志物GCET-1、CD10、bcl-6、MUM-1及FOXP-1阳性率分别为27．9％（43／154）、24．8％（57／230）、50．2％（116／231）、46．3％（105／227）、80．2％（142／177）。患者均有完整随访资料，中位生存期为103．9个月，3年生存率51．3％（98／191）。bcl-2阴性组预后明显好于阳性组（P=0．019）。230例按Hans模型分组，95例为生发中心b细胞（GCb）组，135例为非GCb组，两组预后差异无统计学意义（P=0．102）；181例按Chan模型分组，68例为GCb组，113例为非GCb组，GCb组预后明显好于非GCb组（P=0．031）。218例按Muffs模型分组，154例为Groupl组，64例为Group2组，Groupl组预后明显好于Group2组（P=0．023）。bcl-2与Chan模型结合分组，bel-2蛋白在非GCb组中表达明显增高（P=0．028），非GCb中bcl-2阳性表达组预后最差，GCb中bcl-2阴性表达组预后最好，不同分组预后差异有统计学意义（P〈0．05）。结论国人DLbCL以非GCb更为常见，bel-2蛋白在非GCb组中表达明显增高。bel-2蛋白表达、Chan模型及Muris模型具有预后提示意义，bcl-2结合Chan模型是目前临床上明确肿瘤细胞起源、提示临床预后的最佳组合。

关键词：淋巴瘤大b-细胞弥漫性基因 bcl-2 预后

原发心脏CD5阳性且bcl-2、C-MYC双表达弥漫性大b细胞淋巴瘤临床病理学特征

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中华病理学杂志 2019年第12期48卷 951-954页

作者：张芬罗东兰陈玉刘健罗陆侨何娇严金海许洁骆新兰刘艳辉广东省人民医院(广东省医学科学院)病理医学部病理科广州510080

目的探讨原发心脏CD5阳性且为bcl-2、C-MYC双表达弥漫性大b细胞淋巴瘤的临床病理特征及治疗和预后情况.方法收集广东省人民医院诊治的心脏CD5阳性且为bcl-2、C-MYC双表达弥漫性大b细胞淋巴瘤患者2例的临床信息,分析其组织学形态、免... 详细信息

目的探讨原发心脏CD5阳性且为bcl-2、C-MYC双表达弥漫性大b细胞淋巴瘤的临床病理特征及治疗和预后情况.方法收集广东省人民医院诊治的心脏CD5阳性且为bcl-2、C-MYC双表达弥漫性大b细胞淋巴瘤患者2例的临床信息,分析其组织学形态、免疫表型、荧光原位杂交及治疗和预后情况.结果临床特征:例1男性患者,年龄55岁;例2女性患者,年龄61岁.手术所见:右心房或心室巨大肿物并侵犯邻近组织.组织学形态:形态较单一的大淋巴样细胞弥漫分布,核分裂象及凋亡易见.免疫组织化学结果:肿瘤细胞弥漫表达CD20、CD5、bcl-6、MUM1、C-MYC及bcl-2,Ki-67阳性指数≥90%.C-MYC、bcl-2及bcl-6荧光原位杂交:例1患者发生bcl-6易位,无其余基因异常;例2无基因异常.治疗及预后:例1患者经手术切除肿物确诊后放弃化疗,1个月后死亡;例2患者经4疗程的R-CHOP方案(利妥昔单抗+环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松龙)治疗后病情好转,改用阿帕替尼及依鲁替尼联合口服治疗,随访18个月病情稳定.结论原发心脏CD5阳性且bcl-2、C-MYC双表达弥漫性大b细胞淋巴瘤常表现为右心房或心室浸润性生长的大肿块、非生发中心b细胞免疫表型亚群并具有很高的增殖指数,可能提示了一部分原发心脏侵袭性淋巴瘤的病理特征.

关键词：心脏肿瘤淋巴瘤大b-细胞弥漫性抗原 CD5 免疫表型分型

树突细胞标志物CD21的表达是弥漫性大b细胞淋巴瘤的有利预后因素

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中华病理学杂志 2012年第12期41卷 818-822页

作者：姚伟凯王银萍彭芳郑彦邹亚斌高静娜刘雪力吉林大学第一医院病理科长春130021

目的观察CD21在弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）中的表达，并探讨其与各种临床病理因素及预后的关系。方法回顾性分析2005年6月至2011年9月吉林大学第一医院诊断明确、病例资料齐全的DLbCL患者的石蜡标本共80例，并且已经应用免疫组织化学... 详细信息

目的观察CD21在弥漫性大b细胞淋巴瘤（DLbCL）中的表达，并探讨其与各种临床病理因素及预后的关系。方法回顾性分析2005年6月至2011年9月吉林大学第一医院诊断明确、病例资料齐全的DLbCL患者的石蜡标本共80例，并且已经应用免疫组织化学（sP法）染色检测了肿瘤组织中Ki-67、CD20、CD79a、CD3、CD43、CD5、cyclinD1、bcl-2、CDl0、bcl-6、GCET-1、FOXP-1和MUM-1蛋白表达情况。同时检测肿瘤组织中CD21的表达情况。分析CD21的表达情况与各临床因素的关系，各临床因素及CD21与总生存期的关系。结果年龄≤60岁CD21＋患者比例（64．0％，16／25）显著高于CD21-患者（38．2％，21／55）；临床分期为Ⅰ-Ⅱ期CD21＋患者的比例（52．0％，13／25）显著高于CD21-患者（23．6％，13／55）；结外受累数〈2个CD21＋患者比例（68．0％，17／25）显著高于CD21-患者（41．8％，23／55）；国际预后指数（IPI）评分为0～2时CD21＋患者的比例（68．0％，17／25）显著高于CD21-患者（41．8％，23／55）；CD21＋患者为GCb分型的比例（60．0％，15／25）显著高于CD21-患者（23．6％，13／55）；CD21＋患者因DLbCL导致死亡的比例（32．0％，8／25）显著低于CD21-患者（56．4％，31／55）。单因素生存分析显示影响DLbCL患者总生存期的临床病理因素中，年龄、ECOG评分、乳酸脱氢酶（LDH）值、结外受累数、IPI评分、CD21的表达情况、治疗方案和疗效与预后密切相关，差异有统计学意义（P〈0．05）。Cox模型多因素分析显示，ECOG评分、LDH值、结外受累数、CD21的表达情况等因素与预后密切相关，差异有统计学意义（P〈0．05）。80例患者中CD21＋患者的总生存期显著高于CD21-患者（P〈0．01）。结论CD21＋的DLbCL患者有发病年龄低，临床分期早，节外受累数少以及IPI评分小的特点。CD21＋的DLbCL患者的总生存期及中位生存期均显著高于CD21-患者。CD21的表达情况、ECOG评分、LDH值、结外受累数等因素是DLbCL患者的独立预后因素，CD21的阳性表达对DLbCL患者的预后更有意义。

关键词：淋巴瘤非霍奇金大b-细胞弥漫性预后

Dishevelled2对弥漫大b细胞淋巴瘤OCI-Lyl0细胞凋亡的影响

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白血病．淋巴瘤 2016年第12期25卷 724-727,732页

作者：陈梅顾俊刘兴振刘淑鹏赵东宝上海市杨浦区中心医院血液科 200090 第二军医大学附属长海医院风湿免疫科上海200433 第二军医大学附属长海医院实验中心上海200433

目的观察Dishevelled（DVL）对弥漫大b细胞淋巴瘤（DLbCL）细胞株OCI-Lyl0凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法构建DVL2过表达慢病毒质粒并进行病毒包装，转染OCI-Ly10细胞。在肿瘤坏死因子α（TNF-α）重组蛋白刺激和不刺激的情... 详细信息

目的观察Dishevelled（DVL）对弥漫大b细胞淋巴瘤（DLbCL）细胞株OCI-Lyl0凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法构建DVL2过表达慢病毒质粒并进行病毒包装，转染OCI-Ly10细胞。在肿瘤坏死因子α（TNF-α）重组蛋白刺激和不刺激的情况下，采用流式细胞术检测转染病毒后OCI-Ly10细胞的凋亡率。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测NF-Kb通路下游调控的抗凋亡基因A20和GADD45b的表达情况。结果成功将病毒转染***0细胞，实现DVL2过表达。当DVL2过表达后，无TNF-α刺激时，OCI-Ly10细胞凋亡率较空载对照组增加[（15．46±2．37）％比（11．72±3．53）％，P=0．03）]，抗凋亡基因A20的mRNA相对表达量较空载对照组下降（0．66±0．01比1，P=0．04），GADD45b的mRNA相对表达量较空载对照组下降，但差异无统计学意义（0．79±0．15比1，P=0．642）。在TNF-α刺激下DVL2过表达的OCI-Ly10细胞凋亡率高于空载对照组[（22．78±4．56）％比（12．79±2．89）％，P=0．007]，A20和GADD45bmRNA表达明显增加，但是DVL2增加幅度小于空载对照组（A20：3．75．4±0．14比6．89±0．10，P=0．008；GADD45b：4．75±0．21比6．14±0．08，P：0．03）。结论DVL司促进OCI-Lyl0细胞凋亡，其作用机制可能与通过抑制NF-κb通路进而抑制其下游的抗凋亡基因有关。

关键词：淋巴瘤大b-细胞弥漫性 Dishevelled Wnt通路细胞凋亡