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大劣按蚊TEP1 cDNA的克隆和生物信息学分析

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第三军医大学学报 2009年第11期31卷 993-996页

作者：胡晓飞王英潘春江刘涛谢佳何谐姜晓梅黄复生第三军医大学学员旅7队重庆400038 第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅20队重庆400038 第三军医大学学员旅21队重庆400038

目的克隆大劣按蚊(Anopheles dirus)含硫酯键蛋白1(thioester-containing protein 1,TEP1)的cDNA,并分析其序列。方法根据已报道的冈比亚按蚊等多种昆虫的TEP1氨基酸保守序列设计简并引物,以大劣按蚊血淋巴细胞总RNA为模板,进行RT-PCR... 详细信息

目的克隆大劣按蚊(Anopheles dirus)含硫酯键蛋白1(thioester-containing protein 1,TEP1)的cDNA,并分析其序列。方法根据已报道的冈比亚按蚊等多种昆虫的TEP1氨基酸保守序列设计简并引物,以大劣按蚊血淋巴细胞总RNA为模板,进行RT-PCR扩增。对目的片段纯化回收,经TA克隆后测定其核苷酸序列。利用DNASIS程序分析该序列,并推导其氨基酸序列,最后利用BLAST和DNASIS等进行不同昆虫TEP1氨基酸序列的比对。结果RT-PCR扩增出一约770 bp的条带,TA克隆后DNA测序发现,阳性克隆的核苷酸序列长774 bp,推导其氨基酸序列长258 aa。生物信息学分析表明,该序列与冈比亚按蚊、阿拉伯按蚊、斯氏按蚊TEP1基因的氨基酸序列同源性分别达72%、72%和59%,与冈比亚按蚊的TEP4氨基酸序列同源性为59%。结论从大劣按蚊血淋巴细胞中成功克隆出了TEP1的cDNA部分序列。

关键词：大劣按蚊 TEP1 RT—PCR 生物信息学天然免疫

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大劣按蚊丝氨酸蛋白酶cDNA克隆和表达

中国人兽共患病杂志 2004年第2期20卷 92-95页

作者：徐文岳黄复生夏莉莎段建华第三军医大学基础部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶。方法　根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶 (prophenoloxidase -acti vatingenzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT -PCR扩增 ,克隆和测定插入片段 ;所... 详细信息

目的　克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶。方法　根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶 (prophenoloxidase -acti vatingenzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT -PCR扩增 ,克隆和测定插入片段 ;所得序列进行BLAST查询 ,并原核表达其中的两种PPAE样丝氨酸蛋白酶cDNA ,通过SDS -PAGE和Westernblotting检测表达产物。结果和结论　获得了 3种大劣按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列 ,即AdsP1(5 12bp) ,AdsP2(488bp)和AdsP3(5 12bp)。AdsP1和AdsP3与冈比亚按蚊sP14D1、sP14D2、3种昆虫PPAE和黑腹果蝇Easter很相似 ,推测AdsP1和AdsP3可能是大劣按蚊的PPAE ,起调节大劣按蚊黑化包裹约氏疟原虫反应的作用。另外 ,成功表达了AdsP1和Ad sP3部分cDNA序列。

关键词：大劣按蚊丝氨酸蛋白酶 cDNA克隆表达

大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 494-497页

作者：杨松黄复生段建华况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组 ,以挤压法收集各组的血淋巴 ,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进... 详细信息

目的　探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组 ,以挤压法收集各组的血淋巴 ,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS PAGE分离 ,Westernblot检测丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶的表达差异 ,并利用免疫组织化学进行血细胞丝氨酸蛋白酶与前酚氧化酶的定位检测。结果　SDS PAGE显示吸糖水大劣按蚊有 3 4条蛋白带 ,而吸正常小鼠血和吸感染血蚊血淋巴有 3 5条蛋白带 ,而且在分子量约 160× 10 3和 66× 10 3的蛋白差异带显著 ,吸正常血及感染血后表达增强。吸糖水和吸正常小白鼠血组血淋巴丝氨酸蛋白酶呈现 2条带 ,分子量分别约 160× 10 3和 15 0× 10 3,3组蚊血淋巴前酚氧化酶呈现 1条带 ,分子量约 66× 10 3,吸正常小鼠血和吸感染血组蚊 1d后血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达均显著上调 ,尤其疟原虫感染后表达最强。感染 1d后中肠前酚氧化酶带型明显增宽。免疫酶化学显示 ,丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶在血细胞内均呈颗粒状分布 ,血细胞外血淋巴液内有少许散在颗粒分布。结论　约氏疟原虫卵囊黑化期间 ,大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达增强 ,提示二者可能参与了卵囊黑化包裹?

关键词：大劣按蚊约氏疟原虫黑化 westerm印迹免疫组织化学

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大劣按蚊感染食蟹猴疟原虫B株的实验观察

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1989年第1期 68-69页

作者：宋宗臣刘连珠黄复生樊俊琴第三军医大学寄生虫学教研室

国外早已用多种按蚊建立食蟹猴疟原虫B株猴模,并研究了原产于泰国的大劣按蚊(巴拉巴按蚊)对其敏感性,但未见我国海南岛大劣按蚊的研究报告。我们于1987年1月开始,用我室建立的海南大劣按蚊自然交配种群进行感染试验。材料和方法食蟹... 详细信息

国外早已用多种按蚊建立食蟹猴疟原虫B株猴模,并研究了原产于泰国的大劣按蚊(巴拉巴按蚊)对其敏感性,但未见我国海南岛大劣按蚊的研究报告。我们于1987年1月开始,用我室建立的海南大劣按蚊自然交配种群进行感染试验。材料和方法食蟹猴疟原虫B株(Plasmodium cynomolgi

关键词：大劣按蚊泰国海南涎腺唾液腺疟原虫感染率

感染食蟹猴疟原虫的大劣按蚊血淋巴和胃水解物氨基酸分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1990年第4期8卷 284-286页

作者：黄复生祁兆平周成贵孙玮第三军医大学寄生虫学教研室第三军医大学仪器中心

大劣按蚊感染食蟹猴疟原虫B株后第10d,血淋巴内的蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、赖氨酸含量均较对照组低。第9d蚊胃水解物分析结果表明,感染蚊胃中的多数氨基酸含量增加,其中缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸的含量是对照组3倍以上,氨基酸... 详细信息

大劣按蚊感染食蟹猴疟原虫B株后第10d,血淋巴内的蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、赖氨酸含量均较对照组低。第9d蚊胃水解物分析结果表明,感染蚊胃中的多数氨基酸含量增加,其中缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸的含量是对照组3倍以上,氨基酸的总量比对照组高70％以上。

关键词：食蟹猴疟原虫大劣按蚊血淋巴

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大劣按蚊在高温条件下的生长发育

中国媒介生物学及控制杂志 1998年第3期9卷 168-173页

作者：韩万柏宋宗臣解放军大连医学高等专科学校第三军医大学

目的：观察大劣按蚊（海南株）在高温条件下的生长、发育情况。方法：分为４个组，即２５±１℃（对照组）、３０±１℃、３３±１℃、３６±１℃，每组设３个样本。结果：３３±１℃是蚊卵孵育的致死高温条件；温度升高一定程度后，幼... 详细信息

目的：观察大劣按蚊（海南株）在高温条件下的生长、发育情况。方法：分为４个组，即２５±１℃（对照组）、３０±１℃、３３±１℃、３６±１℃，每组设３个样本。结果：３３±１℃是蚊卵孵育的致死高温条件；温度升高一定程度后，幼虫发育成熟时间提前，化蛹期时限延长，蛹发育质量低下；３６±１℃是成蚊的致死高温条件。在高温条件下，成蚊存活时限明显缩短，但对吸血活动影响不大，而饱血蚊产卵量明显减少，甚至几乎不能产卵。在３３±１℃时，ＬＴ５０平均为１天，仅为２５±１℃时ＬＴ５０的１１．１％。结论：高温对不同发育期蚊虫均有较大的影响，甚至是致死条件之一。

关键词：大劣按蚊高温生长发育

核糖体蛋白S7在大劣按蚊抗疟原虫感染免疫研究中的内标作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第5期21卷 264-267页

作者：徐文岳黄复生段建华第三军医大学基础部病原生物学教研室重庆400038

目的　探讨核糖体蛋白S7(ribosomalprotein ,rpS7)在大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫中的作用。　方法　根据rpS7的保守mRNA序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT PCR扩增 ,克隆、并测定序列 ;RT PCR结合凝胶图像扫描... 详细信息

目的　探讨核糖体蛋白S7(ribosomalprotein ,rpS7)在大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫中的作用。　方法　根据rpS7的保守mRNA序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT PCR扩增 ,克隆、并测定序列 ;RT PCR结合凝胶图像扫描比较、分析血餐后d1、d2、d3、d4、d7和d11,未吸鼠血组 (N)、吸正常鼠血组 (B)和吸感染约氏疟原虫鼠血组 (I)大劣按蚊血细胞中rpS7的转录差异。　结果　成功克隆大劣按蚊rpS7部分cDNA序列 ( 4 65bp) ,吸血和约氏疟原虫感染均未明显地影响大劣按蚊血细胞中rpS7的转录 (P >0 .0 5 )。　结论　大劣按蚊血细胞rpS7可作为研究大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫相关因子的内参照。

关键词：核糖体蛋白S7 大劣按蚊抗疟原虫感染免疫研究内标作用

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大劣按蚊种团E种的染色体和杂交证据

国际医学寄生虫病杂志 1991年第4期 188-189页

作者：许漱璧

大劣按蚊种团(Anopheles dirus complex)至少包括7个近似种,它们的分布自印度西南部横贯东南亚大陆至Conson岛、越南以及中国海南岛和台湾省。通过杂交和染色体研究证实了大劣按蚊E种确为该种团成员。大劣按蚊E种于1981年从印度西南部... 详细信息

大劣按蚊种团(Anopheles dirus complex)至少包括7个近似种,它们的分布自印度西南部横贯东南亚大陆至Conson岛、越南以及中国海南岛和台湾省。通过杂交和染色体研究证实了大劣按蚊E种确为该种团成员。大劣按蚊E种于1981年从印度西南部引进实验室,用人工交配方法传代。大劣按蚊E种4龄幼虫的有丝分裂染色体研究和大劣

关键词：大劣按蚊染色体种团

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大劣按蚊生殖营养周期的实验室观察

四川动物 1990年第2期9卷 13-14页

作者：黄复生刘连珠陈福珍况明书第三军医大学寄生虫学教研室

本文观察大劣按蚊的生殖营养周期。在实验条件下每只雌蚊一生平均产卵326.92个,其中有2只产卵900个以上,雌蚊寿命可达61天,有2只雌蚊吸血9次,完成8个生殖营养周期。

关键词：大劣按蚊生殖营养周期产卵力