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大劣按蚊Torso⁃like基因鉴定分子结构及表达特征

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中国血吸虫病防治杂志 2020年第6期32卷 584-590页

作者：朱凌倩胡小康许静李石柱冯欣宇中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、国家热带病研究中心、WHO热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 上海交通大学医学院全球健康学院

目的鉴定大劣按蚊Torso⁃like(tsl)基因及表达特征,为深入研究tsl基因功能提供理论基础。方法根据黑腹果蝇和冈比亚按蚊tsl基因,检索大劣按蚊全基因组并鉴别大劣按蚊tsl基因,设计特异性引物,并采用PCR和逆转录PCR技术扩增目的基因。利用... 详细信息

目的鉴定大劣按蚊Torso⁃like(tsl)基因及表达特征,为深入研究tsl基因功能提供理论基础。方法根据黑腹果蝇和冈比亚按蚊tsl基因,检索大劣按蚊全基因组并鉴别大劣按蚊tsl基因,设计特异性引物,并采用PCR和逆转录PCR技术扩增目的基因。利用生物信息学软件分析tsl基因编码TSL蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、蛋白质二级结构和三级结构,并进行系统发育进化分析。利用实时荧光定量PCR技术检测该基因在大劣按蚊各组织中的表达水平。结果大劣按蚊tsl基因全长16751 bp,CDS区长1134 bp,编码377个氨基酸。TSL蛋白属于亲水性稳定蛋白。经生物信息学预测,TSL蛋白为位于膜外的分泌蛋白,且包含信号肽;其二级结构含α⁃螺旋(51.72%)、延伸链(12.20%)、β⁃折叠(4.78%)和无规则卷曲(31.30%),且能以5cj9.1.A为模板进行3D同源建模。系统发育进化分析发现大劣按蚊TSL蛋白与法老按蚊TSL蛋白亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测显示,tsl基因在大劣按蚊头、胸、腹、足均有表达,且在头部表达量最高、足部表达量较低。结论本研究从基因组水平鉴定了大劣按蚊tsl基因,分析了其蛋白结构及组织特异性表达特征,为进一步深入研究该基因功能奠定了基础。

关键词：大劣按蚊 Torso⁃like基因鉴定分子结构生物信息学

大劣按蚊含硫脂蛋白基因在约氏疟原虫感染中的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第1期29卷 25-28页

作者：王艳艳王英张健段建华黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的分析大劣按蚊含硫脂蛋白(TEP1)基因在约氏疟原虫感染过程中的作用。方法根据GenBank中大劣按蚊TEP1基因序列设计带有T7启动子的引物,以大劣按蚊cDNA为模板,进行PCR扩增,纯化产物,体外转录试剂盒合成AdTEP1双链RNA。羽化1～2日的雌... 详细信息

目的分析大劣按蚊含硫脂蛋白(TEP1)基因在约氏疟原虫感染过程中的作用。方法根据GenBank中大劣按蚊TEP1基因序列设计带有T7启动子的引物,以大劣按蚊cDNA为模板,进行PCR扩增,纯化产物,体外转录试剂盒合成AdTEP1双链RNA。羽化1～2日的雌性大劣按蚊分3组(200只/组):TEP1干扰组、绿色荧光蛋白(EGFP)干扰组和对照组。TEP1、EGFP干扰组按蚊分别进行胸部微量注射AdTEP1双链RNA、EGFP双链RNA各147 ng,对照组未处理。干扰后3d,每组取15只按蚊,去头,以大劣按蚊核糖蛋白S7(AdS7)为内参进行半定量PCR,检测干扰效果。干扰后4d,用约氏疟原虫BY256荧光株感染3组大劣按蚊。感染后9d,每组各解剖25只蚊胃,记录感染率和感染度。结果对照组和EGFP干扰组AdTEP1的表达条带亮度基本一致,而TEP1干扰组AdTEP1的表达条带亮度非常微弱。感染后9 d,蚊胃卵囊数统计学分析表明,对照组、EGFP干扰组和TEP1干扰组感染率分别为(24±2.83)%、(24±0.71)%和(80±3.54)%;感染度分别为0.32±0.7、0.44±0.85和5.52±4.84,TEP1干扰组明显高于对照组和EGFP干扰组(P大劣按蚊的感染率和感染度,增强了大劣按蚊对约氏疟原虫易感性。

关键词：含硫脂蛋白大劣按蚊约氏疟原虫 RNA干扰

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大劣按蚊吸血活动与交配受精的关系

昆虫学报 1986年第4期29卷 377-382页

作者：刘连珠宋宗臣陈福珍第三军医大学寄生虫学教研室第三军医大学寄生虫学教研室

大劣按蚊Anophelos dirus是我国及东南亚地区的重要传疟媒介。研究表明成蚊羽化后,在未喂血的情况下,可有较高的交配受精率。在同一蚊笼,吸血机会完全相同的条件下,大蚊笼受精雌蚊吸血率为59.88％,未受精雌蚊的吸血率为35.38％;小蚊笼... 详细信息

大劣按蚊Anophelos dirus是我国及东南亚地区的重要传疟媒介。研究表明成蚊羽化后,在未喂血的情况下,可有较高的交配受精率。在同一蚊笼,吸血机会完全相同的条件下,大蚊笼受精雌蚊吸血率为59.88％,未受精雌蚊的吸血率为35.38％;小蚊笼受精雌蚊的吸血率为74.13％,未受精雌蚊吸血率仅为43.56％。正常交配雌蚊的吸血率为49.71％,未进行交配的处女雌蚊吸血率为28.42％。同为正常交配蚊群,喂血组雌蚊受精率55.85％,不喂血组的受精率为44.51％。初步认为大劣按蚊的吸血活动与交配受精有一定的关系。

关键词：大劣按蚊受精率吸血

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大劣按蚊交配和产卵时间的实验室观察

昆虫学报 1988年第2期31卷 224-227页

作者：黄复生况明书陈福珍薛冲刘连珠护校八四年级实习生第三军医大学寄生虫学教研室重庆第三军医大学寄生虫学教研室

大劣按蚊(Anopheles dirus Peyton ＆ Harrison,1979)是东南亚和我国海南岛山林地区的重要传疟媒介,其生物学特性已有较多文献报道。但由于大劣按蚊是野栖蚊种,分布和栖息于山区森林中,所以较难在自然界中观察到该蚊的交配和产卵行为,... 详细信息

大劣按蚊(Anopheles dirus Peyton ＆ Harrison,1979)是东南亚和我国海南岛山林地区的重要传疟媒介,其生物学特性已有较多文献报道。但由于大劣按蚊是野栖蚊种,分布和栖息于山区森林中,所以较难在自然界中观察到该蚊的交配和产卵行为,我们在实验室建立大劣按蚊自然交配种群之后,对该蚊的郊配、产卵时间进行了观察,这对疟疾的流行病学研究和媒介的防制有一定的参考价值。

关键词：大劣按蚊蓝光产卵时间黄光实验室观察产卵高峰光照度光照强度黎明蚊种受精率繁殖性能

大劣按蚊雄蚊的交配能力和日龄及交配次数对其生殖系统形态学影响的观察

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昆虫学报 1989年第4期32卷 438-444页

作者：黄复生况明书刘连珠第三军医大学寄生虫学教研室

本文在实验室条件下,观察大劣按蚊(Anopheles dirus)雄蚊交配能力和日龄、交配及交配后间歇期对其生殖系统形态学的影响。羽化后1小时可见丝状精子,22小时尾器全部旋转180°。3—12日龄雄蚊交配能力最强。随着日龄增加,精囊数逐渐减少,... 详细信息

本文在实验室条件下,观察大劣按蚊(Anopheles dirus)雄蚊交配能力和日龄、交配及交配后间歇期对其生殖系统形态学的影响。羽化后1小时可见丝状精子,22小时尾器全部旋转180°。3—12日龄雄蚊交配能力最强。随着日龄增加,精囊数逐渐减少,睾丸内成熟精子占据整个睾丸的比例逐渐增加,附腺透明区宽度变窄直至消失。多次交配比一次交配后,其睾丸内精子量减少、透明区宽度增加明显;交配后经过一定间歇期后,生殖系统能重新恢复活力,但多次交配后其恢复程度和速度远比交配一次者为慢。大劣按蚊雄蚊生殖系统的变化可初步判断其日龄和交配史。

关键词：大劣按蚊生殖系统日龄交配雄蚊

大劣按蚊血淋巴酚氧化酶与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

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第三军医大学学报 2001年第4期23卷 440-442页

作者：徐文岳黄复生张锡林况明书段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　探讨大劣按蚊血淋巴酚氧化酶 (PO)与约氏疟原虫卵囊黑化的关系。方法　以大劣按蚊 /约氏疟原虫模型 ,利用聚丙酰凝胶电泳后的酶底物显色法 ,比较、分析血餐后 5、7、11、15d时不吸血组、吸正常血组和感染组 3组的雌大劣按蚊血淋... 详细信息

目的　探讨大劣按蚊血淋巴酚氧化酶 (PO)与约氏疟原虫卵囊黑化的关系。方法　以大劣按蚊 /约氏疟原虫模型 ,利用聚丙酰凝胶电泳后的酶底物显色法 ,比较、分析血餐后 5、7、11、15d时不吸血组、吸正常血组和感染组 3组的雌大劣按蚊血淋巴酚氧化酶的单酚氧化酶 (MPO)和双酚氧化酶 (o DPO)活性 ;同时观察感染组约氏疟原虫的感染度及其卵囊黑化比率。结果　感染组的血淋巴MPO和o DPO酶活性明显高于不吸血组和吸正常血组 (P 大劣按蚊前酚氧化酶级联反应。

关键词：约氏疟原虫大劣按蚊血淋巴酚氧化酶黑化

大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶的交叉免疫活性

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第三军医大学学报 2008年第1期30卷 11-14页

作者：王英徐文岳陈继德段建华周桃莉黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的探讨大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶之间是否存在交叉免疫反应性。方法首先利用生物信息学方法分析不同昆虫间丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列的保守性,尤其是大劣按蚊与烟草天蛾间丝氨酸蛋白酶的序列相似性;然后,PinPoint Xa-1表达载体... 详细信息

目的探讨大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶之间是否存在交叉免疫反应性。方法首先利用生物信息学方法分析不同昆虫间丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列的保守性,尤其是大劣按蚊与烟草天蛾间丝氨酸蛋白酶的序列相似性;然后,PinPoint Xa-1表达载体对大劣按蚊丝氨酸蛋白酶进行体外原核表达,利用Western blot方法检测表达产物与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶抗血清之间的免疫反应性。结果生物信息学分析结果显示,不同昆虫间(包括大劣按蚊与烟草天蛾)丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列具有较高保守性;成功进行了大劣按蚊丝氨酸蛋白酶的体外原核表达,western blot结果显示,烟草天蛾丝氨酸蛋白酶抗血清能够能够识别表达产物。结论大劣按蚊与烟草天蛾丝氨酸蛋白酶具有交叉免疫活性,利用烟草天蛾丝氨酸蛋白酶抗血清研究大劣按蚊丝氨酸蛋白酶是可行的。这将为下一步从蛋白水平研究大劣按蚊丝氨酸蛋白酶的生物学特性奠定基础。

关键词：大劣按蚊丝氨酸蛋白酶原核表达交叉免疫活性

大劣按蚊AdPPO2、AdPPO3基因cDNA克隆与组织定位

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 470-472页

作者：郝宏兴邱宗文段建华况明书黄复生王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法　根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR... 详细信息

目的　克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法　根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR方法筛选新的PPO克隆并测序 ;以RT PCR方法分析AdPPO2和AdPPO3在蚊血淋巴、蚊胃和唾液腺的分布情况。结果　AdPPO2和AdPPO3基因cDNA部分序列长均为 5 97bp ,编码 199个氨基酸 ;它们在血淋巴、蚊胃和唾液腺均有分布。结论　从大劣按蚊成功克隆获得 2种新的PPO基因家族成员的cDNA部分序列。

关键词：大劣按蚊前酚氧化酶基因克隆

大劣按蚊对约氏疟原虫卵囊黑化相关血细胞类型的初步鉴定

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第三军医大学学报 2004年第6期26卷 498-500页

作者：杨松时超美周桃莉黄复生况明书王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法　采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果　颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化... 详细信息

目的　鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞。方法　采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型 ,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶。结果　颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞 ,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶也主要分布于颗粒细胞和浆细胞内 ,其中颗粒细胞最常见。

关键词：大劣按蚊血细胞黑化免疫细胞化学