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豌豆发酵液对莲藕多酚氧化酶的抑制作用及机理

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中国食品学报 2016年第5期16卷 76-81页

作者：王洪斌肖萌李新楠王清章严守雷李洁华中农业大学食品科技学院武汉430070

研究了豌豆发酵液(PFB)对莲藕多酚氧化酶(PPO)活性的影响及其机理。采用硫酸铵分级沉淀,DEAE-52和Sephadex G-75柱层析纯化莲藕PPO,测定PFB对PPO的抑制动力学和圆二色谱。结果表明,所得PPO纯化酶纯化倍数、比酶活和蛋白质回收率分别为99... 详细信息

研究了豌豆发酵液(PFB)对莲藕多酚氧化酶(PPO)活性的影响及其机理。采用硫酸铵分级沉淀,DEAE-52和Sephadex G-75柱层析纯化莲藕PPO,测定PFB对PPO的抑制动力学和圆二色谱。结果表明,所得PPO纯化酶纯化倍数、比酶活和蛋白质回收率分别为99.71倍,2 627.36 U/mg和1.85%;PFB(4.0 mg/m L)对PPO的抑制率高达98.65%,其半抑制质量浓度IC50为1.81 mg/m L,对PPO的抑制为竞争性可逆抑制;莲藕PPO蛋白3级结构为全α型,2级结构主要由α-螺旋和无规卷曲构成,PFB作用后α-螺旋含量显著减少,β-折叠含量显著增加。豌豆发酵液是天然有效的多酚氧化酶抑制剂,通过改变酶的2级结构发挥抑制作用。本研究结果为莲藕保鲜提供了新的途径。

关键词：豌豆发酵液莲藕多酚氧化酶抑制作用圆二色谱

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六堡茶发酵前后多酚氧化酶的分离及酶学性质

食品科学 2022年第6期43卷 112-117页

作者：龙峻瑶黄丽夏宁滕建文韦保耀胡沛然广西大学轻工与食品工程学院广西南宁530000

为探索六堡茶发酵过程中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的来源及其酶学活性,采用不同pH值缓冲液、保护剂和液料比对发酵前后六堡茶PPO进行提取,通过(NH_(4))_(2)SO_(4)沉淀、透析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化PPO。结果表明:... 详细信息

为探索六堡茶发酵过程中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的来源及其酶学活性,采用不同pH值缓冲液、保护剂和液料比对发酵前后六堡茶PPO进行提取,通过(NH_(4))_(2)SO_(4)沉淀、透析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化PPO。结果表明:从六堡茶中分离纯化得到2个PPO同工酶,分子质量分别为59 kDa(PPO1)和70 kDa(PPO2),其中PPO1为茶树PPO,PPO2由发酵过程中微生物产生。底物邻苯二酚对PPO1和PPO2的最适浓度为0.5 mol/L,PPO1和PPO2的最适pH值分别为6.5和6.0,最适温度分别为40℃和35℃,PPO1的热稳定性优于PPO2,两者在90℃条件下处理5 min几乎完全灭酶。研究表明,六堡茶发酵后会产生新的同工酶,二者共同提高黑茶品质,为黑茶加工条件的控制和黑茶PPO的研究提供一定的理论基础。

关键词：六堡茶多酚氧化酶酶学性质发酵

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高分子络合树酯固定化多酚氧化酶的研究

生物化学与生物物理进展 2000年第4期27卷 434-437页

作者：雷福厚杨再环石晓红广西民族学院化学系南宁530006

为探索新的固定化酶方法 ,以漆酚酪氨酸树酯为固定化酶载体 ,与Cu2 + 络合制备成高分子络合剂 ,对多酚氧化酶固定化 ,实验结果表明 ,这种固定化方法是可行的 .固定化多酚氧化酶的适宜 pH值为 6 6 4和 7 17,在 6 0℃放置 2 5min后活... 详细信息

为探索新的固定化酶方法 ,以漆酚酪氨酸树酯为固定化酶载体 ,与Cu2 + 络合制备成高分子络合剂 ,对多酚氧化酶固定化 ,实验结果表明 ,这种固定化方法是可行的 .固定化多酚氧化酶的适宜 pH值为 6 6 4和 7 17,在 6 0℃放置 2 5min后活力保留 5 0 7% ,以邻苯二酚为底物的米氏常数为 1 49× 10 -2 mol/L ,较游离酶略小 .根据实验结果提出了固定化酶模型 .

关键词：高分子络合树酯多酚氧化酶固定化

分子动力学模拟分析超高压对固液两态多酚氧化酶稳定性的影响

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食品科学 2024年第16期45卷 33-44页

作者：李镜浩梁展鸿肖更生徐玉娟余元善吴继军彭健李璐程丽娜广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室广东省农产品加工重点实验室广东广州510610 岭南现代农业科学与技术广东省实验室广东广州510610 仲恺农业工程学院轻工食品学院广东广州510631 广东药科大学食品科学学院广东中山528400

以固态晶体(crystal,C-)、液态(liquid,L-)多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)为对象,采用分子动力学模拟的方法,分析其在常温(298.15 K)常压/高压(0.1~400.0 MPa)条件下分子构象的变化。结果表明:固液两态PPO的空间结构均随压力(0.1~4... 详细信息

以固态晶体(crystal,C-)、液态(liquid,L-)多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)为对象,采用分子动力学模拟的方法,分析其在常温(298.15 K)常压/高压(0.1~400.0 MPa)条件下分子构象的变化。结果表明:固液两态PPO的空间结构均随压力(0.1~400.0 MPa)增大而变的不稳定;与L-PPO相比,C-PPO对压力更敏感,表现出更高的残基波动,溶剂可及表面积和体积减小,蛋白结构更致密;α-螺旋向无规卷曲过渡,导致氢键数量不稳定,螺旋弹性也降低,整体构象差异明显;活性位点Cu^(2+)位置疏远,残基之间距离发生改变、运动出现随机化,干扰底物催化结合。因此,物理状态和压力改变PPO空间结构、残基运动模式和底物结合范围,影响酶稳定性。因此,PPO状态和压力因素对酶变性程度可排序为:固态>液态,物理状态>压力水平。

关键词：多酚氧化酶分子动力学模拟物理状态超高压稳定性

铜离子对烟草多酚氧化酶变性和复性影响的热力学研究(英文)

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无机化学学报 2005年第4期21卷 505-510页

作者：肖厚荣刘清亮徐小龙施春华中国科学技术大学化学系合肥230026

在有无5mmol·L-1CuSO4存在的两种情况下,运用荧光光谱研究了烟草多酚氧化酶在盐酸胍诱导下的变性和复性平衡。烟草多酚氧化酶在6.0mol·L-1盐酸胍变性30min(25℃)即完全失活。荧光光谱结果表明:铜离子能够提高烟草多酚氧化酶的结构稳... 详细信息

在有无5mmol·L-1CuSO4存在的两种情况下,运用荧光光谱研究了烟草多酚氧化酶在盐酸胍诱导下的变性和复性平衡。烟草多酚氧化酶在6.0mol·L-1盐酸胍变性30min(25℃)即完全失活。荧光光谱结果表明:铜离子能够提高烟草多酚氧化酶的结构稳定性和抗盐酸胍变性的能力,进而影响烟草多酚氧化酶在盐酸胍诱导下的变性和复性过程。没有外源铜存在的情况下,盐酸胍诱导的烟草多酚氧化酶变性和复性是一个可逆的二态过程;在5mmol·L-1CuSO4存在的条件下,由于结合了Cu2+的酶的中间态稳定性增加,显示特征荧光,结果显示,外源铜存在时,盐酸胍诱导的烟草多酚氧化酶变性和复性是一个可逆的三态过程。根据相应模型,进行了热力学计算。上述实验结果得到酶活性测定的进一步证实,在6mol·L-1盐酸胍中放置5,10,15,20,25,30min,烟草多酚氧化酶的剩余活性分别为18.7%,11.7%,8.9%,6.6%,3.6%,0.06%,但在5mmol·L-1CuSO4存在的条件下,剩余活性则分别为60.3%,44.6%,42.5%,40.2%,25.6%,25.3%。

关键词：铜离子多酚氧化酶荧光光谱法烟草热力学

Cu^(2+)与烟草多酚氧化酶相互作用研究

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无机化学学报 2003年第6期19卷 589-593页

作者：肖厚荣施春华夏炳乐盛良全张艳鸽刘清亮中国科学技术大学化学系合肥230026

本文通过酶活性测定,荧光光谱和紫外光谱研究了外加Cu2+与烟草多酚氧化酶(简称PPO)的相互作用。结果表明,微量铜的加入能增加酶的活性,犤Cu2+犦/犤PPO犦为0.20左右时酶活性最大,犤Cu2+犦/犤PPO犦为0.91时,Cu2+开始表现出对PPO活性的抑制... 详细信息

本文通过酶活性测定,荧光光谱和紫外光谱研究了外加Cu2+与烟草多酚氧化酶(简称PPO)的相互作用。结果表明,微量铜的加入能增加酶的活性,犤Cu2+犦/犤PPO犦为0.20左右时酶活性最大,犤Cu2+犦/犤PPO犦为0.91时,Cu2+开始表现出对PPO活性的抑制;Cu2+对PPO内源荧光的猝灭机制属于形成络合物所引起的静态猝灭,猝灭常数Ksv为8.0375×103L·mol-1;Cu2+的加入使PPO蛋白质分子构象发生变化,α-螺旋含量增加,多肽链及Trp和Tyr残基的芳杂环进一步向分子内收缩,疏水基团之间的疏水作用增强。

关键词：烟草多酚氧化酶铜(Ⅱ) 相互作用酶活性蛋白质分子构象荧光光谱法紫外光谱

多酚氧化酶在逆向胶团中的动力学性质与稳定性

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华中理工大学学报 1991年第3期19卷 91-96页

作者：刘曼西姚志萍华中理工大学生物工程系

本文研究了马铃薯多酚氧化酶在AOT/正己烷和Triton Χ-100/环己烷-正丁醇两种逆向胶团中的动力学性质和稳定性。研究表明,酶在AOT/正己烷中有较高的活性和很低的稳定性,而在Triton Χ-100/环己烷-正丁醇中有较低的活性和较高的稳定性。... 详细信息

本文研究了马铃薯多酚氧化酶在AOT/正己烷和Triton Χ-100/环己烷-正丁醇两种逆向胶团中的动力学性质和稳定性。研究表明,酶在AOT/正己烷中有较高的活性和很低的稳定性,而在Triton Χ-100/环己烷-正丁醇中有较低的活性和较高的稳定性。酶的活性和稳定性与胶团中水的体积分数（θ）相关。其动力学常数K_m则与水相接近。

关键词：多酚氧化酶逆向胶团动力学性质

海藻酸钠固定化多酚氧化酶及红棓酚的合成研究

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有机化学 2003年第1期23卷 57-61页

作者：郁建平郭刚军肖云鹏刘新宽古练权中山大学化学与化学工程学院广州510275 贵州大学生物化学营养研究所贵阳550025

利用海藻酸钠包埋、戊二醛交联固定化马铃薯多酚氧化酶 ,研究了固定化多酚氧化酶的条件及固定化多酚氧化酶的性质 ,并以固定化多酚氧化酶转化底物 1,2 ,3 苯三酚 ,对反应条件进行了优选以及对反应机理进行了推测 .结果表明 ,通过水相中... 详细信息

利用海藻酸钠包埋、戊二醛交联固定化马铃薯多酚氧化酶 ,研究了固定化多酚氧化酶的条件及固定化多酚氧化酶的性质 ,并以固定化多酚氧化酶转化底物 1,2 ,3 苯三酚 ,对反应条件进行了优选以及对反应机理进行了推测 .结果表明 ,通过水相中的酶促氧化及非酶反应 ,合成了红酚 .

关键词：海藻酸钠合成多酚氧化酶固定化 1,2,3-苯三酚红Pei酚酶促氧化反应机理

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多酚氧化酶的固定化及其酶学性质的研究

中国海洋大学学报（自然科学版） 2015年第8期45卷 90-96页

作者：王涵李瑾程华丽马启敏中国海洋大学环境科学与工程学院山东青岛266100 中国海洋大学海洋环境与生态教育部重点实验室山东青岛266100

以壳聚糖/蒙脱土插层复合物为载体,采用吸附法和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(PPO),考察了固定化酶的最佳制备条件及其酶学性质。结果表明,吸附法固定化多酚氧化酶(A-PPO)的最佳制备条件为pH=5.0,酶与载体质量比20mg/g,固定化时间6h,固... 详细信息

以壳聚糖/蒙脱土插层复合物为载体,采用吸附法和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(PPO),考察了固定化酶的最佳制备条件及其酶学性质。结果表明,吸附法固定化多酚氧化酶(A-PPO)的最佳制备条件为pH=5.0,酶与载体质量比20mg/g,固定化时间6h,固定化酶的载酶量为12.12mg/g,单位载体酶活为12.76×103 U/g,酶活回收率为81.7%。交联法固定化酶(C-PPO)的最佳制备条件为pH=4.0,酶与载体质量比75 mg/g,固定化时间6h,固定化酶的载酶量为18.33mg/g,单位载体酶活为2.78×103 U/g,酶活回收率为12.9%。A-PPO和C-PPO的最适酶促反应条件为pH=8.0,温度分别为40和30℃。与游离多酚氧化酶相比,固定化酶的操作稳定性、贮存稳定性均有所提高。固定化酶重复使用5次后,可保留37.6%以上的相对酶活。PPO,A-PPO和C-PPO的米氏常数Km值分别为0.48,0.56和3.06mmol/L,较游离酶的Km值均有所增加;最大反应速率Vmax分别为2.70,2.08和0.18U/g,较游离酶的Vmax值均有所减小。

关键词：多酚氧化酶壳聚糖固定化插层复合物酶学性质