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基于Notch通路研究化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞MRP1的影响

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中药新药与临床药理 2019年第12期30卷 1442-1448页

作者：李妮妮蒋成君郭艳汪电雷安徽中医药大学研究生院安徽合肥230031 安徽中医药大学药物代谢动力学研究室安徽合肥230031

目的基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响。方法根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5%、10%、15%、20%4个浓度对1... 详细信息

目的基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响。方法根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5%、10%、15%、20%4个浓度对16HBE细胞进行干预,CCK-8法检测细胞增殖率筛选出最佳作用浓度;细胞分为空白血清组、香烟烟雾提取物(CSE)+空白血清组、CSE+含药血清组、化痰降气胶囊含药血清组、Notch通路抑制剂DAPT+空白血清组、DAPT+含药血清组,用Western Blot法检测各组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达;以5-羧基二乙酸荧光素(5-CFDA)为底物,采用流式细胞术检测细胞内荧光强度的变化评价MRP1的外排功能;免疫荧光法检测Notch1的胞内段(NICD)核移位活性。结果化痰降气胶囊含药血清的最佳作用浓度为15%。与空白血清组比较,含药血清组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达呈浓度依赖性升高(P蛋白表达水平明显降低(P蛋白表达增加(P蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),MRP1的外排能力也降低(P<0.01),胞质胞核荧光强度均减弱。结论化痰降气胶囊含药血清可能通过Notch通路上调16HBE细胞中MRP1的表达和外排功能,这可能是其治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用机制之一。

关键词：化痰降气胶囊含药血清慢性阻塞性肺疾病多药耐药相关蛋白1 Notch信号通路人支气管上皮细胞

靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性

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中国病理生理杂志 2011年第12期27卷 2265-2269页

作者：邵淑丽崔婷婷贾红双谢振丽张伟伟刘迁陈薇薇李爽陈丽齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006

目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免... 详细信息

目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免疫荧光检测细胞MRP1蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内罗丹明123(Rho123)的潴留情况。MTT法检测细胞活力。结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定转染sh-MRP1-2.1-1和sh-MRP1-2.1-2后,A549/DDP细胞MRP1 mRNA和蛋白表达均显著降低,细胞内Rho123相对荧光强度由16.93%±0.58%分别升高至89.02%±0.59%和82.56%±1.37%;A549/DDP亲本细胞顺铂的IC50分别由(101.45±0.64)μmol/L降至(38.06±0.05)μmol/L和(53.72±0.36)μmol/L,5-氟尿嘧啶的IC50分别由(263.20±2.00)μmol/L降至(98.82±1.16)μmol/L和(141.81±0.49)μmol/L。结论:shRNA干扰表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-RMP1能够稳定、持久地抑制MRP1基因,有效地逆转了A549/DDP细胞的多药耐药性。

关键词：短发夹RNA 多药耐药多药耐药相关蛋白1 RNA干扰 A549/DDP细胞

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miR-134调控人肺腺癌细胞顺铂耐药

中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1214-1218页

作者：俞万钧汪一萍李纪鹏王华英宁波市鄞州人民医院呼吸与重症医学科浙江宁波315040 宁波市鄞州人民医院检验科浙江宁波315040

目的:探讨微小RNA-134(miR-134)在人肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用及机制。方法:采用miRNA芯片筛选A549/CDDP和A549细胞差异表达miRNA,应用real-time PCR验证miR-134的表达。将miR-134模拟物和抑制物分别转染A549/CDDP和A549细胞,应用MTT法检测肺癌细胞对顺铂的敏感性。Western blot技术检测miR-134对叉头框蛋白M1(FOXM1)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响。结果:miRNA芯片显示,13种miRNAs在A549/CDDP和A549细胞中呈显著表达;其中,miR-134下调最显著。miR-134模拟物转染组A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高(P蛋白表达,si-FOXM1转染组A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高(P蛋白表达。结论:miR-134能够增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与调控FOXM1和MRP1表达有关。

关键词：微小RNA-134 肺腺癌顺铂耐药叉头框蛋白M1 多药耐药相关蛋白1

miR-133a/b和MRP1在耐药性癫痫患者外周血含量的观察

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中国病理生理杂志 2015年第4期31卷 680-684页

作者：颜博李国良中南大学附属湘雅医院神经内科湖南长沙410008

目的:探讨外周血中microRNA-133a/b(miR-133a/b)及多药耐药相关蛋白1(multidrug resistanceassociated protein 1,MRP1)的含量与癫痫患者耐药性的相关关系。方法:生物信息学预测靶向调控MRP1的miRNAs,构建MRP1野生型及突变型3’UTR报告基因载体,双萤光素酶报告基因技术验证预测的miRNAs对MRP1的靶向调控作用。此外,收集95例接受药物治疗的癫痫患者(其中耐药患者37例,非耐药患者58例)外周血,实时荧光定量PCR检测外周血中这些miRNAs的含量,ELISA检测外周血中MRP1蛋白的含量。最后分析这些miRNAs及MRP1含量与癫痫耐药的相关性。结果:Target Scan软件预测miR-133a/b可能靶向调控MRP1,双萤光素酶报告基因技术发现,实验组(共转入miR-133a/b mimics、p MIR-MRP1及pRLTK质粒)较对照组(共转入scramble mimic、p MIR-MRP1及pRLTK质粒)相比,萤光素酶活性分别下调76.9%和64.1%(P耐药性癫痫患者中miR-133a/b的含量分别是耐药性癫痫患者含量的2.18倍和1.74倍(P耐药性癫痫患者中的含量是非耐药性癫痫患者中的3.72倍(P耐药性癫痫患者中miR-133a/b的含量分别是耐药性癫痫患者含量的2.76倍和2.95倍(P耐药性癫痫患者中的含量是非耐药性癫痫患者中4.99倍(P耐药性癫痫患者血清中,miR-133a/b呈现低水平,MRP1蛋白呈现高水平,miR-133a/b联合MRP1有望成为早期诊断癫痫药物敏感性的指标。

关键词： MicroRNA-133a/b 多药耐药相关蛋白1 耐药性癫痫

非小细胞肺癌细胞MRP1表达及其与耐顺铂关系的研究

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中华肿瘤防治杂志 2011年第14期18卷 1084-1087页

作者：聂芳张丽娇王笑歌何小雨王群马列唐裕福中国医科大学附属第四医院呼吸科辽宁沈阳110032

目的:研究多药耐药相关蛋白1(MRP1)是否在耐顺铂(DDP)的非小细胞肺癌(NSCLC)A549/DDP中高表达,探讨MRP1与NSCLC耐DDP的关系。方法:培养来源于同一母系的2株细胞系A549细胞系和A549/DDP细胞系,采用MTT法绘制A549细胞和A549/DDP细胞的生... 详细信息

目的:研究多药耐药相关蛋白1(MRP1)是否在耐顺铂(DDP)的非小细胞肺癌(NSCLC)A549/DDP中高表达,探讨MRP1与NSCLC耐DDP的关系。方法:培养来源于同一母系的2株细胞系A549细胞系和A549/DDP细胞系,采用MTT法绘制A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线,分别计算A549细胞和A549/DDP细胞的耐药指数;应用RT-PCR检测A549细胞和A549/DDP细胞中MRP1 mRNA的表达水平。结果:A549及A549/DDP的半数抑制浓度分别为0.65μg/mL和3.7μg/mL,得出A549/DDP对DDP的耐药性是A549的5.5倍。A549/DDP中MRP1的在转录水平的表达显著高于A549中MRP1的表达,P<0.05。结论:MRP1在耐DDP的NSCLC中高表达,而在不耐DDP的NSCLC中低表达,甚至不表达,说明MRP1的高表达与肺癌耐DDP有关,为以后研究通过抑制MRP1的表达从而逆转肺癌耐DDP提供理论依据。

关键词：癌,非小细胞肺多药耐药相关蛋白1 顺铂多药耐药性

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

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大连医科大学学报 2009年第3期31卷 237-241页

作者：纪振钢龙华张殿忠裘秀春孙宏慧马琼刘云燕文艳华王育才范清宇第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所陕西西安710038

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋白(MRP1)在脊索瘤细胞系CM-319中的表达及临床意义。[方法]用RT-PCR检测HIF-1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision... 详细信息

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋白(MRP1)在脊索瘤细胞系CM-319中的表达及临床意义。[方法]用RT-PCR检测HIF-1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF-1α、MRP1蛋白在CM-319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF-1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达(P相关。

关键词：缺氧诱导因子1α 多药耐药基因1 多药耐药相关蛋白1 脊索瘤

木犀草素对白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用及机制研究

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天津医药 2023年第12期51卷 1321-1325页

作者：周欣宇李京敏张婷贾秀红滨州医学院附属医院儿科 256603 滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室

目的探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用C... 详细信息

目的探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制。方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24 h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数。Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8实验检测Lut的细胞毒性及对ADR的增敏作用。取对数生长期K562/ADR细胞分为0μmol/L Lut组、2μmol/L Lut组、4μmol/L Lut组,采用流式细胞术检测细胞内ADR蓄积量的变化;RT-PCR法和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶pi(GST-pi)mRNA和蛋白的表达;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞内GSH的含量。结果与K562细胞相比,K562/ADR细胞株对ADR具有明显的耐药性,耐药倍数为53.69倍。与0μmol/L Lut相比,不同浓度Lut作用于K562/ADR细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制(P耐药倍数,降低细胞内GSH含量,下调细胞中MRP1、P-gp、GST-pi、Nrf2 mRNA及蛋白的表达(P耐药性,其机制可能与Lut下调Nrf2、MRP1、P-gp、GST-pi表达,进而增加细胞内ADR蓄积量有关。

关键词：白血病髓系慢性 BCR-ABL阳性木犀草素抗药性多药核因子E2相关因子2 多药耐药相关蛋白1 P-糖蛋白谷胱甘肽-S-转移酶pi

SIRT1在结直肠癌组织中的表达及其与MDR-1的关系

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山东医药 2016年第24期56卷 17-19页

作者：王静崔敏张骞李红张燕曹璋滨州医学院山东滨州256603 无棣县人民医院滨州市人民医院

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在结直肠癌组织中的表达及其与多药耐药相关蛋白1(MDR-1)的关系。方法选择结直肠癌患者162例,取手术切除的癌组织,采用免疫组化Envision法观察SIRT1、MDR-1的阳性表达,分析结直肠癌组织SIRT1阳性表达... 详细信息

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在结直肠癌组织中的表达及其与多药耐药相关蛋白1(MDR-1)的关系。方法选择结直肠癌患者162例,取手术切除的癌组织,采用免疫组化Envision法观察SIRT1、MDR-1的阳性表达,分析结直肠癌组织SIRT1阳性表达与患者临床病理参数及MDR-1阳性表达的关系。结果结直肠癌组织中SIRT1、MDR-1阳性表达率分别为66.0%(107/162)和59.3%(96/162)。结直肠癌组织SIRT1阳性表达与患者性别、肿瘤组织分化程度、临床分期及淋巴结转移无关(P均>0.05),与肿瘤长径有关(P相关(r=0.506,P相关关系。

关键词：结直肠癌沉默信息调节因子1 多药耐药相关蛋白1 免疫组织化学

慢性阻塞性肺疾病进程与肺支气管上皮细胞MRP1功能改变的相关性研究

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中国临床药理学与治疗学 2014年第1期19卷 8-14页

作者：汪辰吟陶秀华张弦汪电雷陈金佩杨丽丽曹银汪珊珊安徽中医药大学药学院安徽中人科技有限责任公司药理组淮南市第一人民医院药剂科合肥市第四人民医院药剂科

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)进程与肺支气管上皮细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)功能改变的相关性。方法:采用烟熏复合雾化吸入木瓜蛋白酶法制备COPD模型大鼠,将制备过程中的大鼠随机分成不同进程组,抑制剂组(在造模过程中给予MRP1抑... 详细信息

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)进程与肺支气管上皮细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)功能改变的相关性。方法:采用烟熏复合雾化吸入木瓜蛋白酶法制备COPD模型大鼠,将制备过程中的大鼠随机分成不同进程组,抑制剂组(在造模过程中给予MRP1抑制剂丙磺舒组),另设正常对照组和丙磺舒对照组。以上各组均测定大鼠的肺功能;除抑制剂组外,分别测定大鼠的肺上皮细胞通透性,检查肺上皮细胞完整性;并在静脉注射酚红后,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中酚红浓度和血浆中酚红浓度,以BALF中酚红浓度/血浆中酚红浓度的比值为评价COPD肺支气管上皮细胞MRP1的功能指标。结果:随着造模的进程,COPD大鼠肺功能逐渐降低,造模45d后差异具有统计学意义;BALF中酚红浓度/血浆中酚红浓度的比值逐渐降低,但各组肺上皮细胞通透性功能未发生明显改变;肺上皮细胞完整性良好。与正常对照组比较,在造模过程中,同时给予丙磺舒30d后,肺功能显著性降低;同时与不同进程组60d比较,给予MRP1抑制剂造模60d后,大鼠的FEV0.3%/FVC差异具有统计学意义。结论:COPD的进程与肺支气管上皮MRP1功能的改变具有一定的相关性。肺支气管上皮细胞MRP1的功能随着COPD进程逐渐下调,抑制MRP1的功能会进一步加重COPD的肺功能下降,使病情加重。

关键词：慢性阻塞性肺疾病进程多药耐药相关蛋白1 功能相关性