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中国生物工程杂志 2004年第7期24卷 82-84页

作者：龚伟方学平刘燕王晓燕范昌发梅兴国章扬培军事医学科学院毒物药物研究所北京100850 军事医学科学院输血研究所北京100850

为了获得重组CHO细胞持续高效表达HBsAg的最佳条件 ,应用填充床生物反应器和聚酯片 ,连续灌流培养分泌HBsAg的重组CHO细胞 ,考察灌流培养基中葡萄糖浓度对细胞代谢和HBsAg生产的影响。连续培养 60天 ,细胞密度可达 5 0× 1 0 6 ml。灌... 详细信息

为了获得重组CHO细胞持续高效表达HBsAg的最佳条件 ,应用填充床生物反应器和聚酯片 ,连续灌流培养分泌HBsAg的重组CHO细胞 ,考察灌流培养基中葡萄糖浓度对细胞代谢和HBsAg生产的影响。连续培养 60天 ,细胞密度可达 5 0× 1 0 6 ml。灌流培养液中葡萄糖浓度从5 0g L增加到 7 6g L时 ,葡萄糖消耗速率和乳酸浓度均随之上升。当葡萄糖浓度继续增加至9 3g L时 ,葡萄糖消耗速率和乳酸浓度呈下降趋势 ;当将葡萄糖浓度降回至 7 6g L后又开始回升。培养过程中最高抗原滴度达 1∶5 1 2 ,出现在以含 5 0g L葡萄糖的培养液灌流阶段的末期 ,即第 2 6天 ,维持 1 0天左右即迅速下降至 1∶1 2 8水平。共收液 335L ,纯化后获得抗原蛋白2 1 3 0 4mg ,平均产率为 635 94μg L ,较传统转瓶工艺 ( 4 1 4μg L)提高 5 3 6%。表明CHO细胞较长时间处于高乳酸水平下 ( >30mmol L)会严重影响产物的表达 ,应控制灌流培养液中的葡萄糖浓度在较低水平 ,或通过适当提高灌流速率使培养基中乳酸水平维持在较低水平。

关键词：填充床生物反应器 HBsAg 细胞培养聚酯片培养基

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用固定化菌体笼架填充床生物反应器生产酒精的研究

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齐齐哈尔轻工学院学报 1986年第3期 11-18页

作者：王运吉大连轻工业学院

为了将海藻酸钙固定化酵母应用于由甘薯及其它含固形物的淀粉质原料生产酒精,研制了笼架填充床生物反应器。结果表明,当该生物反应器用于一阶段发酵时,按糖醇转化率为93％,酒精浓度为7.8％(v/v)计算其乙醇生产能力(Productivity)为2.8g/... 详细信息

为了将海藻酸钙固定化酵母应用于由甘薯及其它含固形物的淀粉质原料生产酒精,研制了笼架填充床生物反应器。结果表明,当该生物反应器用于一阶段发酵时,按糖醇转化率为93％,酒精浓度为7.8％(v/v)计算其乙醇生产能力(Productivity)为2.8g/1.h,是传统间歇发酵的2～3倍,当做为发酵器和细胞发生器进行转移发酵时,效率提高到4.3g/1.h。

关键词：固定化酵母发酵胶体淀粉质工业发酵分散体系填充床反应器固定床反应器酒精乙醇填充床生物反应器菌体

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基于黄铁矿与PHBV协同自养-异养反硝化试验研究

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应用基础与工程科学学报 2022年第2期30卷 282-294页

作者：吴为中赵柳周琦贾利霞北京大学环境科学与工程学院北京100871

针对污水处理厂深度脱氮需求,选用黄铁矿(FeS_(2))和聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)两种材料,构建应用于污水处理厂二级出水深度脱氮的反硝化生物填充床,通过进出水水质监测、材料结构表征(扫描电镜)、高通量测序等技术手段,探究了FeS_(2)-PHB... 详细信息

针对污水处理厂深度脱氮需求,选用黄铁矿(FeS_(2))和聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)两种材料,构建应用于污水处理厂二级出水深度脱氮的反硝化生物填充床,通过进出水水质监测、材料结构表征(扫描电镜)、高通量测序等技术手段,探究了FeS_(2)-PHBV协同自养-异养反硝化体系的工艺运行效果及机理.结果表明,FeS_(2)-PHBV协同反硝化体系脱氮速率优于单独FeS_(2)自养体系,当水力停留时间为2h时,脱氮效率为90%以上,且产生更少的硫酸盐副产物.相比于单独PHBV异养体系,协同体系在达到相同总氮去除效果的同时释放更低的DOC(23.62mg/L).FeS_(2)-PHBV协同体系中两种材料表面结构均较利用前发生了显著变化,这是由于材料表面生物膜的富集和利用.共混反应器内优势菌群为厌氧发酵菌属(Sporomusaceae)和梭菌属(Clostridium sensu stricto 7),两者实现了共混体系异养-自养的协同反硝化效果,其中Fe代谢相关梭菌属(Clostridium)主导的自养反硝化在共混系统脱氮过程中可能发挥着重要作用.

关键词：黄铁矿固相碳源自养-异养反硝化填充床生物反应器生物膜优势菌

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耐热羧酸酯酶的挖掘及其对农药的降解研究

耐热羧酸酯酶的挖掘及其对农药的降解研究

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作者：杨晓慧华东理工大学

学位级别：硕士

本课题通过对实验室已有的一些野生嗜热菌株筛选,进行新型羧酸酯酶的研究,最终实现将开发的羧酸酯酶应用于农药降解。在平板筛选实验中,得到一株可以水解三丁酸甘油酯并产生明显水解圈的原始菌株Geobacillus uzenensis 23175,通过对原... 详细信息

本课题通过对实验室已有的一些野生嗜热菌株筛选,进行新型羧酸酯酶的研究,最终实现将开发的羧酸酯酶应用于农药降解。在平板筛选实验中,得到一株可以水解三丁酸甘油酯并产生明显水解圈的原始菌株Geobacillus uzenensis 23175,通过对原始菌的基因组分析,设计简并引物进行PCR,得到羧酸酯酶est741的基因序列。通过分析,est741具有741 bp的开放阅读框,编码246个氨基酸的羧酸酯酶,命名为Est741,已于NCBI上提交其基因序列。基于基因工程技术,将羧酸酯酶基因est741分别在大肠杆菌BL21(DE3)和巴斯德毕赤酵母KM71中表达。对羧酸酯酶Est741的酶学性质测定发现,Est741的最适pH和最适温度为8.0和50℃。为了进一步改善羧酸酯酶Est741的性质,通过定点突变得到优良的突变体Est741M,突变体的最适温度从50℃升高到60℃,可作为嗜热酯酶。在温度耐受性方面,与Est741(1.3 h)相比,Est741M在70℃时T1/2为2.5 h。此外,Est741M的催化效率也略有提高。为了进一步应用,将羧酸酯酶Est741M固定在环氧树脂材料lx-105s上,与游离酶相比,固定在环氧树脂上得到的固定化酶lx-Est741M在70℃下的T1/2为36.8 h。对羧酸酯酶的催化性质进行探索后,发现lx-Est741M可以降解马拉硫磷及各种拟除虫菊酯农药。当马拉硫磷的浓度为20 mg/L,与50 U的纯酶反应40分钟后,马拉硫磷的降解率为95.8%。使用10 mL填充床柱反应器,测定了固定化酶lx-Est741M对拟除虫菊酯农药废水的降解能力。结果表明,当联苯菊酯浓度为500mg/L,将2.5 g固定化酶加入10 mL柱反应器中,泵速为0.7 mL/min时,lx-Est741M对联苯菊酯的降解率为90.4%。经过十批次农药降解的连续反应后,lx-Est741M表现出较高的操作稳定性并保持72%的初始活性。本研究首次从Geobacillus uzenensis 23175中获得新酶Est741,改善了酶学性质且拓展了相关应用,本文关于使用环氧树脂固定化酶处理农药污染废水的初步研究揭示了潜在的工业应用。

关键词：羧酸酯酶定点突变固定化酶农药降解填充床生物反应器

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