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鼠李糖乳杆菌LS8基因组文库的构建

中国食品学报 2016年第6期16卷 64-70页

作者：辛红鸿张瑜刘景吕欣西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100

为通过构建基因组文库方法,探究鼠李糖乳杆菌LS8菌株的细菌素编码基因,采用质粒消除方法证明LS8菌株细菌素编码基因位于基因组DNA。在此基础上,提取LS8菌株基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1和Bam H1分别酶切基因组DNA,回收250~1 000 bp的片段... 详细信息

为通过构建基因组文库方法,探究鼠李糖乳杆菌LS8菌株的细菌素编码基因,采用质粒消除方法证明LS8菌株细菌素编码基因位于基因组DNA。在此基础上,提取LS8菌株基因组DNA,采用同尾酶Sau3A1和Bam H1分别酶切基因组DNA,回收250~1 000 bp的片段,然后采用T4 DNA连接酶将回收片段与已酶切并去磷酸化后的载体（p Bluescript SK）进行连接,采用Ca Cl2处理法转化大肠杆菌（TOP10）。通过蓝白斑和氨苄抗性筛选,得到阳性克隆1 480个,采用菌液PCR对克隆进行检测。将测序并拼接后所得101条序列在NCBI上比对,发现5个可能的细菌素编码基因。分别设计引物对上述序列进行PCR扩增和测序,为细菌素基因的异源表达奠定基础。

关键词：鼠李糖乳杆菌LS8 基因组文库细菌素

聚合酶链式反应递缩基因组文库以克隆抗生素生物合成基因簇

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上海交通大学学报 2009年第1期43卷 5-8页

作者：何云龙朱冬青白林泉邓子新上海交通大学生命科学与技术学院微生物代谢教育部重点试验室上海200240

在克隆阿维菌素(avermectin)生物合成基因簇的过程中,探索出了一条运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术对链霉菌基因组文库进行递缩法筛选、以克隆抗生素生物合成基因簇的新方法.依次以96孔培养板整板混合质粒、单排混合质粒和单个菌落为... 详细信息

在克隆阿维菌素(avermectin)生物合成基因簇的过程中,探索出了一条运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术对链霉菌基因组文库进行递缩法筛选、以克隆抗生素生物合成基因簇的新方法.依次以96孔培养板整板混合质粒、单排混合质粒和单个菌落为模板进行PCR扩增,以逐步递缩的方式定位包含目的基因的克隆.结果表明,与传统的菌落原位杂交方法相比,该方法具有简单、快捷、准确率高等优点.

关键词：聚合酶链式反应阿维菌素克隆基因组文库基因簇递缩法

基因组文库及基因小库构建在基因克隆中的应用

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第二军医大学学报 2000年第3期21卷 299-300页

作者：张平武邹蓓艳王慧丽孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 复旦大学遗传所

在基因克隆的方法选择中,构建基因组文库并筛选是克隆完整基因的经典方法, 但构建基因组文库技术复杂,步骤繁琐.若构建的文库不够大,常筛选不到所需的目的基因.因此我们尝试用另一种方法,即在试探性的Southern blot基础上构建基因小库,... 详细信息

在基因克隆的方法选择中,构建基因组文库并筛选是克隆完整基因的经典方法, 但构建基因组文库技术复杂,步骤繁琐.若构建的文库不够大,常筛选不到所需的目的基因.因此我们尝试用另一种方法,即在试探性的Southern blot基础上构建基因小库,从中筛选目的基因,可以大大减少筛库的工作量并提高筛到目的基因的成功率.现以克隆酵母Candida kefyr 的菊粉酶全基因为例将这两种方法加以比较.

关键词：基因组文库基因小库基因克隆

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灰树花总DNA的制备及基因组文库的构建

遗传 2004年第5期26卷 711-713页

作者：徐志祥程度李宝健中山大学生命科学院基因工程国家教育部重点实验室广州510275

灰树花是一种珍贵的药用真菌,因为多糖含量较高,较难获得高质量的总DNA,本文提出了一种制备高质量灰树花总DNA及构建灰树花基因组文库的方法。该方法制备的灰树花总DNA,经Sau3AⅠ酶切后,用于构建基因组文库,可得到2×105个转化子/50mg,... 详细信息

灰树花是一种珍贵的药用真菌,因为多糖含量较高,较难获得高质量的总DNA,本文提出了一种制备高质量灰树花总DNA及构建灰树花基因组文库的方法。该方法制备的灰树花总DNA,经Sau3AⅠ酶切后,用于构建基因组文库,可得到2×105个转化子/50mg,平均插入片段为14kb。为下一步克隆灰树花中的基因以及进行其他分子生物学研究奠定了基础。

关键词：灰树花 DNA提取基因组文库

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Raji细胞基因组文库的构建与筛选

中南大学学报（医学版） 2008年第3期33卷 185-191页

作者：高建明李小玲李桂源三峡大学医学院病理生理学教研室湖北宜昌443002 中南大学肿瘤研究所长沙410078

目的：构建Raji细胞基因组文库，用EBV DNA探针对文库进行筛选。方法：Raji细胞基因组DNA经BamHI酶切消化后，低熔点琼脂糖回收9～23kb的酶切DNA片段，通过匹配黏性末端与磷酸化的Lambda DASH ⅡBam HI酶切载体臂连接，在体外经包装系... 详细信息

目的：构建Raji细胞基因组文库，用EBV DNA探针对文库进行筛选。方法：Raji细胞基因组DNA经BamHI酶切消化后，低熔点琼脂糖回收9～23kb的酶切DNA片段，通过匹配黏性末端与磷酸化的Lambda DASH ⅡBam HI酶切载体臂连接，在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体，测定原始文库与扩增文库的滴度，用同位素标记的EBVDNA探针对Raji细胞基因组文库进行筛选。结果：Raji细胞原始文库与扩增文库的滴度分别为1．8×10^5和2．8×10^8pfu／mL。文库经筛选获得4个阳性克隆，随机挑取1个阳性克隆稀释后铺平板作进一步杂交鉴定，发现所有噬茵斑均有杂交信号，证明该克隆确为阳性克隆。抽提该阳性克隆DNA，进行Bam HI酶切鉴定，证实插入片段的长度为8．5kb。经测序、BLAST序列比对，结果显示插入片段一侧为EBV BamHI W片段，另一侧与人类15号染色体RPl1-665A22克隆高度同源。结论：Raji细胞基因组文库的成功构建，为进一步克隆包含EBV整合位点的细胞基因组序列、探讨EBV整合参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础。

关键词： Raji细胞基因组文库构建筛选

弓形虫基因组文库的建立、特异克隆的筛选和弓形虫病的DNA诊断

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1990年第3期8卷 165-169页

作者：夏爱娣顾允中徐世杰陈诗书杨惠珍徐克继钱宗立上海第二医科大学

首次建立弓形虫人株(ZS_2株)基因组文库,筛选出一个弓形虫特异DNA片段的克隆。对该克隆的DNA片段(1.1kb)进行了限制性内切酶图谱分析。应用Southern印迹法及斑点印迹法检测,结果示同位素^(32)P标记的该克隆DNA片段能与弓形虫DNA、人工... 详细信息

首次建立弓形虫人株(ZS_2株)基因组文库,筛选出一个弓形虫特异DNA片段的克隆。对该克隆的DNA片段(1.1kb)进行了限制性内切酶图谱分析。应用Southern印迹法及斑点印迹法检测,结果示同位素^(32)P标记的该克隆DNA片段能与弓形虫DNA、人工感染弓形虫幼猪白细胞和胸腺DNA、弓形虫感染病人DNA杂交,但不与正常人、正常幼猪外周血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、肺孢子虫、pBR322的DNA杂交。斑点杂交检测低限为100个弓形虫或500pg弓形虫DNA。该探针已成功地应用于多种弓形虫感染病例的检测,为弓形虫病提供了一个特异、灵敏的DNA诊断方法。

关键词：弓形虫基因组文库克隆弓形虫病

构建用于相关基因筛选的微囊藻产毒株基因组文库

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中华流行病学杂志 2001年第4期22卷 290-292页

作者：周晓明姚露洋俞顺章复旦大学预防医学研究所分子流行病学研究室上海200032

目的　构建含有微囊藻毒素 (MC)表达相关基因的基因组文库 ,用于分离MC相关基因或鉴别MC表达藻株。方法　使用MC产毒藻株NIES 90 ,获取基因组DNA ,酶切制备片段 ,克隆到质粒 pUC18中 ,转化JM10 9构成基因组文库。结果　建成容量覆盖蓝... 详细信息

目的　构建含有微囊藻毒素 (MC)表达相关基因的基因组文库 ,用于分离MC相关基因或鉴别MC表达藻株。方法　使用MC产毒藻株NIES 90 ,获取基因组DNA ,酶切制备片段 ,克隆到质粒 pUC18中 ,转化JM10 9构成基因组文库。结果　建成容量覆盖蓝绿藻基因组 10倍以上 ,插入片段介于 2 0 0～ 70 0bp的NIES 90基因组文库 ,其中获得至少一段序列具有NIES 90特异性 ,可能为MC相关基因。结论　构建文库成功。

关键词：微囊藻毒素基因组文库 MC 基因筛选

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基因组文库的构建和池化筛选

生物技术通报 2010年第5期26卷 11-15页

作者：陈献伟娜日苏朱超王会雷娜高剑峰关伟军马月辉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 石河子大学生命科学学院石河子832003 广西大学动物科学技术学院南宁530004 山西农业大学太谷030801

作为物种保护策略的重要部分,建立濒危畜禽的基因组文库,可有效保存濒危畜禽种质资源。BAC(bacterialartificial chromosome)文库具有高容量、遗传特性稳定和嵌合体少等优点,因而被用于畜禽基因组文库的构建。对BAC文库的构建方法和文... 详细信息

作为物种保护策略的重要部分,建立濒危畜禽的基因组文库,可有效保存濒危畜禽种质资源。BAC(bacterialartificial chromosome)文库具有高容量、遗传特性稳定和嵌合体少等优点,因而被用于畜禽基因组文库的构建。对BAC文库的构建方法和文库池化筛选系统作一综述。

关键词： BAC载体基因组文库池化筛选

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基因组文库的构建和筛选

基因组文库的构建和筛选

作者：智慧天津大学

学位级别：硕士

白色念珠菌是人体内最重要的机会型致病真菌,以二倍体形式存在,没有性别变化,至今尚未发现它的单倍体世代。白念珠菌由于其致病性和双倍体特性,对于研究其生物学特征、基因功能及致病机理产生了很多困难。所以,白色念珠菌的基因组文库... 详细信息

白色念珠菌是人体内最重要的机会型致病真菌,以二倍体形式存在,没有性别变化,至今尚未发现它的单倍体世代。白念珠菌由于其致病性和双倍体特性,对于研究其生物学特征、基因功能及致病机理产生了很多困难。所以,白色念珠菌的基因组文库可以在分子生物学及遗传学方面帮助我们研究白念珠菌的基因功能从而研究其致病机理。在本课题中,我们构建了白念珠菌基因组文库。然后,将白念珠菌基因组文库转入酿酒酵母基因缺失株中筛选我们感兴趣的基因从而研究白念珠菌的基因功能,致病机理及其对药物的敏感程度。在实验室已筛选出的对盐离子敏感的酿酒酵母缺失株的基础上,我们将一个以单拷贝载体为背景的酵母基因组文库转入这些缺失株中,筛选其相对应的基因,及其他可互补这些基因缺陷的基因,从而研究其盐离子耐受性的机制。

关键词：白色念珠菌基因组文库酿酒酵母酿酒酵母基因缺失文库筛选