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转录因子圈套策略研究进展

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生物化学与生物物理进展 2001年第6期28卷 802-805页

作者：王付龙徐祥梁华平刘昕第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所

转录因子圈套策略 (transcriptionfactor“decoy”strategy)是应用与顺式元件相一致的寡核苷酸双链转染细胞 ,竞争结合转录因子 ,从而抑制内源性基因表达 .

关键词：圈套策略转录因子基因治疗基因调控

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核因子κB靶向性圈套策略对膀胱癌细胞生长的影响

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中国现代医学杂志 2009年第3期19卷 375-378页

作者：文博彭瑞元邱建忠杨为民周四维深圳市宝安区人民医院泌尿外科广东深圳518101 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科湖北武汉430030

目的观察核因子κB诱骗剂—环状哑铃寡核苷酸(CD-ODN)对膀胱肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨核因子κB环状圈套策略在膀胱肿瘤基因治疗中的作用。方法脂质体介导法瞬时转染CD-ODN及其突变体(CD-ODN-mut)入膀胱癌BIU-87细胞株,荧光素酶报... 详细信息

目的观察核因子κB诱骗剂—环状哑铃寡核苷酸(CD-ODN)对膀胱肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨核因子κB环状圈套策略在膀胱肿瘤基因治疗中的作用。方法脂质体介导法瞬时转染CD-ODN及其突变体(CD-ODN-mut)入膀胱癌BIU-87细胞株,荧光素酶报告基因的方法检测不同处理组NF-κB活性的改变;MTT法、克隆形成试验检测各组细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞周期和早期凋亡。结果CD-ODN能明显降低膀胱癌细胞NF-κB活性,抑制膀胱癌细胞增殖和干细胞克隆形成,使细胞周期阻滞,促进膀胱癌细胞凋亡。结论CD-ODN可能通过阻断NF-κB信号通路来调控膀胱癌细胞的凋亡和周期,抑制细胞的增殖,促进其凋亡,为膀胱癌治疗提供新的思路。

关键词：膀胱肿瘤圈套策略细胞凋亡核因子κB

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NF-кB圈套策略与脑血管疾病

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国外医学（神经病学．神经外科学分册） 2003年第3期30卷 257-260页

作者：陈彬罗勇重庆医科大学附属第一医院神经内科400016

核因子Kappa B(NF-кВ)是一个广泛存在于真核细胞内并在机体炎症反应、免疫应答、细胞生长、分化、凋亡中起重要调节作用的转录因子。在脑血管疾病中,NF-кВ参与一系列病理生理反应。应用NF-кВ圈套策略抑制NF-кВ过度活化,在脑血... 详细信息

核因子Kappa B(NF-кВ)是一个广泛存在于真核细胞内并在机体炎症反应、免疫应答、细胞生长、分化、凋亡中起重要调节作用的转录因子。在脑血管疾病中,NF-кВ参与一系列病理生理反应。应用NF-кВ圈套策略抑制NF-кВ过度活化,在脑血管疾病实验显示良好治疗效果,有望成为新的基因治疗策略。

关键词：脑血管疾病核因子-κB 圈套策略基因治疗

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NF-kappaB圈套寡核苷酸防治SAH后CVS的实验研究

NF-kappaB圈套寡核苷酸防治SAH后CVS的实验研究

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作者：张健苏州大学

学位级别：硕士

第一部分SAH后兔基底动脉壁NF-kappaB、ICAM-1的表达变化目的探讨免疫炎症反应在SAH后CVS发病机制中的作用。方法应用新西兰家兔经枕大池二次注血制成SAH动物模型。在各相应时间点运用常规HE染色和免疫组化等方法,观察兔基底动脉管壁... 详细信息

第一部分SAH后兔基底动脉壁NF-kappaB、ICAM-1的表达变化目的探讨免疫炎症反应在SAH后CVS发病机制中的作用。方法应用新西兰家兔经枕大池二次注血制成SAH动物模型。在各相应时间点运用常规HE染色和免疫组化等方法,观察兔基底动脉管壁形态学以及NF-kappaB、ICAM-1在管壁上表达的动态变化。结果在SAH后第3天基底动脉血管腔已开始狭窄,第7天达到高峰,之后狭窄渐减轻,14天时基本接近正常。SAH后3天NF-kappaB表达增加,5-7天表达持续在一个较高的水平,随后开始下降;ICAM-1表达变化趋势与NF-kappaB相似,但在表达高峰时相上稍迟于后者。结论NF-kappaB、ICAM-1在血管壁上的表达变化与CVS的发生时相密切相关,提示由其参与介导的血管壁炎症反应可能在CVS的发生和发展过程中起了重要的作用。第二部分NF-kappaB圈套寡核苷酸防治SAH后CVS的实验研究目的观察NF-kappaB圈套寡核苷酸对SAH后CVS的防治作用,从而为CVS的治疗提供一种全新的模式。方法利用兔二次注血模型,在二次注血前运用NF-kappaB圈套寡核苷酸对CVS进行防治,利用DSA造影测定BA直径和TCD测定脑血流速率来评价CVS,以常规HE染色和免疫组化的方法观察兔基底动脉管壁形态以及NF-kappaB、ICAM-1在管壁上的表达。结果治疗组血管狭窄的程度、血流速率的增加、形态学的改变及NF-kappaB、ICAM-1在管壁上表达都较对照组明显减轻,并

关键词：蛛网膜下腔出血脑血管痉挛核转录因子- kappaB 细胞间黏附分子-1 核转录因子- kappaB 细胞间黏附分子-1 寡核苷酸圈套策略

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聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒载NF-κB圈套ODNs抗脑微血管内皮细胞缺血后炎性损伤及其机制的研究

聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒载NF-κB圈套ODNs抗脑微血管内皮细胞缺...

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作者：秦伟重庆医科大学

学位级别：硕士

背景:缺血性脑血管病是严重威胁人们生命健康的常见病、多发病。虽然,国内外对该病所作的大量实验与临床研究,使人们对脑缺血性损害及其药物干预等的认识不断深化,针对该病不同病理环节进行有目的、分阶段、联合治疗使其预后也有了较大... 详细信息

背景:缺血性脑血管病是严重威胁人们生命健康的常见病、多发病。虽然,国内外对该病所作的大量实验与临床研究,使人们对脑缺血性损害及其药物干预等的认识不断深化,针对该病不同病理环节进行有目的、分阶段、联合治疗使其预后也有了较大改观,但该病的治疗仍未取得理想效果。因此,寻找新的、针对性强的治疗靶点和策略势所必然。目前,对脑缺血/再灌注损伤机制的研究主要集中在氧自由基、兴奋性氨基酸、细胞内钙超载、线粒体的损伤、炎症反应和细胞凋亡等方面。其中,再灌注时的炎症反应促进了继发性脑损害,是脑缺血/再灌注损伤的主要原因之一。同时发现,脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMEC)受损是脑血管病特别是脑缺血发病的早期病变和基本诱因,与脑血管病发生发展密切相关,因此保护BMEC 的功能和结构显得尤其重要。活化的 BMEC 在转录因子,特别是核转录因子-κB(Nuclear factor-kappaB,NF-κB)系统的调节下,产生一系列细胞因子、酶类等介质,介导或直接参与白细胞和 BMEC 的相互作用以及血管、组织的损伤。多数学者认为 NF-κB 是炎症反应的中心环节。靶向 NF-κB 的抗炎治疗成为国内外众多学者研究的热点。人工合成的 NF- κ B 圈套寡脱氧核苷酸 (NF- κ B decoy oligodeoxynucleiotides 或NF-κB decoy ODNs)是含有NF-κB 结合位点的双螺旋寡核苷酸。当NF-κB从NF-κB-IκB复合物中解离出来以后,NF-κB decoy ODNs即可与游离的NF-κB结合,从而封闭了NF-κB,阻断其向核内移位及启动靶基因的转录。圈套策略以其特异性及高效性有着其它策略无可比拟的优势,成为一种新型的基因治疗方案。重庆医科大学硕士研究生学位论文 4同时也发现 NF-κB decoy ODNs 在体内滞留时间短、易被细胞内外核酸酶降解以及靶向进入细胞核内量少等问题。其后果是成本昂贵且细胞毒性作用大。而且众所周知,血脑屏障(blood brain barrier, BBB)的存在也限制了神经药物或用于基因治疗的核苷酸片段进入颅内,使其不能发挥有效的治疗作用。因此,在中枢神经系统疾病时,寻找一种新方法使药物能顺利通过 BBB 达到病变部分,发挥其治疗作用,已经成为医学研究中急需解决的难题。纳米粒作为靶向制剂的载体是近年来研究的热点。载药纳米粒经过适当的修饰,可有效解决 decoy ODNs 易被核酸酶降解的问题,进而可通过 BBB,把药物定向输送到中枢神经系统而发挥治疗作用。目的:(1) 探讨大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascularendothelial cells, BMEC)的培养方法并对之进行形态学观察;(2) 制备大小均匀、带正电荷、包封率高、血管内皮细胞摄入率高的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(polybutylcyanoacrylate nanoparticles,PBCA NP);(3) 建立一种方便、稳定、可靠的体外细胞氧糖剥夺(oxygenglucose deprivation, OGD)/复氧(reoxygenation)模型;(4) 通过该模型,研究 BMEC 在氧糖剥夺/复氧后 NF-κB p65 蛋白的表达、活化的动态规律;(5) 研究靶向 NF-κB 的哑铃形寡脱氧核苷酸(decoy ODNs)- PBCANP 复合物转染血管内皮细胞在该模型条件下对细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响。方法:取 Wistar 大鼠乳鼠脑组织,采用筛网过滤、胶原酶消化、离心等技术获取脑微血管内皮细胞并进行培养,通过倒置显微镜、免疫细胞化学进一步鉴定,采用 MTT 方法测定生长曲线;采用透射电镜、光散射、粒径仪、流式细胞仪、荧光显微镜等研究和评价 PBCA NP 的重庆医科大学硕士研究生学位论文 5理化特征、粒径、载基因能力以及该纳米粒载特异性基因的脑靶向性;采用细胞培养、MT

关键词：聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒子核因子-κB 氧糖剥夺/复氧脑微血管内皮细胞圈套策略细胞间粘附分子-1 诱生型一氧化氮合酶

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