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小黄鱼(Larimichthys polyactis)鰤鱼诺卡氏菌的分离及鉴定

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海洋与湖沼 2023年第4期54卷 1182-1190页

作者：吴迪阮泽超王跃斌张鼎元张燕许文军柴学军浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 浙江省海洋水产研究所、浙江省海水增养殖重点实验室浙江舟山316021

为探明舟山海域网箱养殖小黄鱼(Larimichthys polyactis)暴发的以体表溃疡、眼球溃烂、内脏出现白色结节为主要症状的疾病病因,对患病小黄鱼体表溃疡处和结节病灶处采集组织样本,在血琼脂平板上划线培养,通过分离、纯化到同一优势菌株ZH... 详细信息

为探明舟山海域网箱养殖小黄鱼(Larimichthys polyactis)暴发的以体表溃疡、眼球溃烂、内脏出现白色结节为主要症状的疾病病因,对患病小黄鱼体表溃疡处和结节病灶处采集组织样本,在血琼脂平板上划线培养,通过分离、纯化到同一优势菌株ZHNK2101。经形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA基因片段扩增及序列比对,确定该菌株为鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)。药敏试验结果显示,菌株ZHNK2101对哌拉西林、头孢曲松、丁胺卡那、庆大霉素等16种抗生素敏感。回归感染试验表明,该菌株可以感染小黄鱼并引起和自然感染相同的症状,半致死浓度LD50为7.28×10^(4)CFU/尾。另外,该病株会引起小黄鱼鳃、肝、肾和脾脏发生病理变化,主要表现为鳃丝紊乱,肝脏、肾脏、脾脏组织细胞纤维化形成病理性结节。试验首次报道了小黄鱼感染鰤鱼诺卡氏菌的病例,并从理化特性、药敏试验、回归感染及组织病理变化等方面对该菌株的特性进行了初步研究,为小黄鱼养殖过程中由鰤鱼诺卡氏菌引起的内脏白点病的早期预防和治疗提供基础数据。

关键词：小黄鱼(Larimichthys polyactis) 鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae) 药敏试验回归感染组织学病理

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患病草鱼肠道病原菌的分离鉴定及毒力研究

水产科学 2019年第2期38卷 152-162页

作者：邹升龚亮李东杰曹丽娜李艳平何昊城丁学知易敢峰夏立秋湖南师范大学生命科学学院淡水鱼类发育生物学国家重点实验室微生物分子生物学湖南省重点实验室湖南长沙410081 大北农水产科技集团福建诏安363500

自环洞庭湖区精养鱼池患病草鱼肠道中分离获得4种病原菌,进行16S rRNA基因和gyrB基因序列测定和在线比对,并对草鱼进行回归感染。随后进行4种病原菌的药敏特征、溶血活性试验,并利用PCR方法检测了6种毒力因子的携带情况。试验结果表明,... 详细信息

自环洞庭湖区精养鱼池患病草鱼肠道中分离获得4种病原菌,进行16S rRNA基因和gyrB基因序列测定和在线比对,并对草鱼进行回归感染。随后进行4种病原菌的药敏特征、溶血活性试验,并利用PCR方法检测了6种毒力因子的携带情况。试验结果表明,病原菌分别为温和气单胞菌、异常嗜糖气单胞菌、类志贺邻单胞菌和格氏乳球菌;4种病原菌回归感染草鱼,均能使草鱼患病致死,自死亡的草鱼体内均能分离得到相应感染的病原菌;4种病原菌对多种抗生素具有耐药性,且在脱纤维绵羊血血平板上检测到了温和气单胞菌、异常嗜糖气单胞菌AaB007的溶血活性;PCR结果表明,4种病原菌携带多种毒力因子。研究结果可为环洞庭湖区草鱼精养鱼池健康养殖及病害防治提供科学依据。

关键词：草鱼病原菌 16S rRNA基因 gyrB基因回归感染毒力基因

一株虹鳟源乌尔新不动杆菌的分离鉴定与其感染的病理损伤

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水产科学 2019年第6期38卷 797-803页

作者：吴春艳任思宇汪开毓蒲华靖重庆三峡职业学院重庆万州404155 四川农业大学动物医学院四川成都611130 重庆市开州区水产技术推广站重庆开州405400

自患病虹鳟肝、肾及体表溃烂组织中分离到1株革兰氏阴性的双球状菌株K180411,回归感染证实该菌为此次发病的病原菌。菌株K180411在LB平板上形成直径1 mm的半透明菌落,无法水解七叶苷,不能利用麦芽糖、葡萄糖、精氨酸,硝酸盐还原反应为阴... 详细信息

自患病虹鳟肝、肾及体表溃烂组织中分离到1株革兰氏阴性的双球状菌株K180411,回归感染证实该菌为此次发病的病原菌。菌株K180411在LB平板上形成直径1 mm的半透明菌落,无法水解七叶苷,不能利用麦芽糖、葡萄糖、精氨酸,硝酸盐还原反应为阴性,在5%的脱纤维羊血平板上形成β溶血环,16S rRNA与rpoB系统发育分析显示,菌株K180411与乌尔新不动杆菌MH113156和KJ789099的亲缘关系最近。结合生化特性鉴定、16S rRNA与rpoB系统发育分析,判定菌株K180411为一株乌尔新不动杆菌。乌尔新不动杆菌K180411感染后,虹鳟体表出现褪色斑,鳍条蛀蚀,脾肿大,肠道发炎等临床症状。组织学结果显示,肠道黏膜上皮大面积坏死,肠绒毛断裂脱落;肝细胞脂肪变性严重,局灶性坏死明显;鳃小片上皮细胞肿胀脱落。药敏结果显示,乌尔新不动杆菌K180411对环丙沙星、头孢噻肟、左氧氟沙星、恩诺沙星及卡那霉素敏感,对磺胺异噁唑、链霉素、青霉素、阿莫西林等耐药。

关键词：虹鳟乌尔新不动杆菌回归感染病理损伤

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斑马鱼病原菌的鉴定和药物敏感性分析

斑马鱼病原菌的鉴定和药物敏感性分析

作者：于翠霞华中师范大学

学位级别：硕士

斑马鱼(Danio rerio)作为一种模式动物,被广泛应用于遗传学、神经生物学、发育生物学、药物筛选和环境监测工作等科学研究领域。但是对病原菌影响斑马鱼健康状态的研究却比较少。其中由细菌引起的疾病发病率高,死亡率高,损失比较大,因... 详细信息

斑马鱼(Danio rerio)作为一种模式动物,被广泛应用于遗传学、神经生物学、发育生物学、药物筛选和环境监测工作等科学研究领域。但是对病原菌影响斑马鱼健康状态的研究却比较少。其中由细菌引起的疾病发病率高,死亡率高,损失比较大,因此一直是研究的重点。在目前实验用鱼细菌性疾病研究还比较匮乏的情况下,我们展开了本实验的研究,不仅为实验室科研能够顺利的进行提供了质量保障,而且还对模式动物斑马鱼细菌性疾病的防治积累了科学资料,为今后实现实验用鱼的标准化检测及应用能提供一定的参考。本课题从本实验室饲养的被病原菌感染的具有典型病症的斑马鱼身上,分离出具有较强致病性的致病菌分别为2号菌、3号菌、4号菌。我们对这3种菌进行细菌的形态观察和染色、生理生化特性、16SrDNA序列分析等鉴定得出,2号菌属于拜氏不动杆菌(Acinetobacter beijerinckii),3号菌属于维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、4号菌属于中间气单胞菌(Aeromonasmedia)。为了解这3种致病菌致病性的强弱,用不同浓度的病原菌采用浸泡的方式分别回归感染正常的斑马鱼,在处理的一周之内对斑马鱼的状态进行观察记录,并测定出拜氏不动杆菌、维氏气单胞菌和中间气单胞菌三种病原菌的半致死浓度,分别为1.0×108cfu/ml、3.3884X 105cfu/ml和3.4674×106cfu/ml,其中维氏气单胞菌病原菌对斑马鱼的毒力最强。为了消除病原菌对斑马鱼健康状态的干扰,保证实验用鱼的健康状态,我们选取了常见的杀菌药物,对这3种病原菌做了药物敏感性实验发现,这3种病原菌都对洛美沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星都极度敏感,故在实验室集约化养殖的斑马鱼中,可以用这些药物对这些病原菌造成的疾病进行控制和预防。通过本实验的研究,我们对实验室中患病斑马鱼的细菌性感染疾病有了一定的认识,保证了本实验室中利用斑马鱼的研究实验的顺利进行,更为以后实验用鱼的质量保障提供了依据。

关键词：斑马鱼细菌性疾病细菌鉴定回归感染药物敏感性分析

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蚂蟥红肿病病原性细菌初探

蚂蟥红肿病病原性细菌初探

作者：魏伟威南京农业大学

学位级别：硕士

蚂蟥（Whitmania pigra Whitman）为《中国药典》（2015年版）药材水蛭的基原动物之一,其干燥全体具有破血通经、逐瘀消癥的功效,用于治疗血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫、跌扑损伤,是众多治疗心血管疾病中成药的主要原料。目前,蚂蟥市... 详细信息

蚂蟥（Whitmania pigra Whitman）为《中国药典》（2015年版）药材水蛭的基原动物之一,其干燥全体具有破血通经、逐瘀消癥的功效,用于治疗血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫、跌扑损伤,是众多治疗心血管疾病中成药的主要原料。目前,蚂蟥市场需求大,蚂蟥野生资源日益枯竭,人工养殖已成必然趋势。近年来众多学者对蚂蟥呼吸和消化生理、摄食规律、养殖密度及投喂频率等方面做了大量研究,蚂蟥人工养殖已初步获得成功。本团队研究发现在人工高密度集约化养殖条件下,夏季高温容易滋生细菌引发细菌性疾病,从而影响蚂蟥生产效率和市场供应。本实验拟通过对夏季高温蚂蟥病原性细菌的探究,确定夏季高温蚂蟥病害的病原细菌,确定病原细菌对蚂蟥不同组织的损害及理化特性的影响,为夏季高温蚂蟥细菌性疾病的防治提供科学依据。研究结果如下:（1）利用16S rDNA技术和传统培养手段对患病蚂蟥病灶和肠道进行细菌分离和确定。16S rDNA分子技术表明各处理中细菌相对丰度均以变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门细菌最为丰富。与健康蚂蟥肌肉、肠道相比,发病蚂蟥肌肉、肠道中拟杆菌属、假单胞菌属、脱硫弧菌属细菌相对丰度显著升高,且在发病蚂蟥养殖水体和沉积物中具有含量丰富,说明拟杆菌属、假单胞菌属、脱硫弧菌属细菌大量增殖是诱发蚂蟥细菌性疾病的原因之一。利用传统分离手段从患病蚂蟥肌肉和肠道中分离得到的细菌经鉴定为荧光假单胞菌,通过回归感染发现蚂蟥感染荧光假单胞菌与蚂蟥自然患病症状一致,同时发现低浓度的荧光假单胞菌对蚂蟥的致死率低,高浓度荧光假单胞菌对蚂蟥具有很强的致死性,致死率为100%。表明荧光假单胞菌为高温患病蚂蟥的病原菌之一。（2）组织切片结果表明该细菌性疾病对蚂蟥肠道和肌肉组织结构具有显著影响。该细菌性疾病会引起蚂蟥肠道皱缩,肠道内壁肿胀,破坏组织细胞结构,导致蚂蟥肠道细胞分散,排列不整齐、细胞间质稀疏、细胞间隙变大;该细菌性疾病会破坏蚂蟥肌肉细胞结构,引起蚂蟥肌肉细胞细胞膜破裂、细胞核溶解、细胞壁肿胀、细胞排列稀疏。（3）细菌性疾病对蚂蟥肌肉和肠道的理化特性具有显著影响。患病蚂蟥肌肉和肠道的抗氧化酶（SOD、CAT、POD）酶活力较健康蚂蟥肌肉和肠道酶活力均显著降低（P＜0.05）;患病蚂蟥肌肉和肠道的能量代谢酶（LDH、SDH、MDH）酶活力较健康蚂蟥肌肉和肠道酶活力均显著降低（P＜0.05）;患病蚂蟥肌肉和肠道中热激蛋白70、90和凝集素基因表达量较健康蚂蟥显著升高（P＜0.05）。细菌回归感染实验结果表明细菌感染后蚂蟥肌肉和肠道的抗氧化酶、能量代谢酶酶活力均表现出先上升后下降的趋势,在感染后期感染蚂蟥肌肉和肠道的抗氧化酶、能量代谢酶活力均显著低于对照组;感染蚂蟥肌肉和肠道热激蛋白和凝集素的相对表达量同样呈现先升高后下降的趋势,但在感染后期其相对表达量仍均显著高于对照组肌肉和肠道。

关键词：蚂蟥细菌组织切片理化特性回归感染

香鱼致病性类志贺邻单胞菌的分离与生化药敏鉴定

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香鱼致病性类志贺邻单胞菌的分离与生化药敏鉴定

作者：阚宏玉宁波大学

学位级别：硕士

本文以从患体表溃烂病的香鱼（Plecoglossus altivelis）和分离自患病香鱼体内的病原菌为研究对象,描述了患病香鱼的病理症状,研究了患病香鱼的5种组织的病理学变化,利用自动微生物鉴定系统配合相应鉴定卡和分子生物学方法对分离得到的... 详细信息

本文以从患体表溃烂病的香鱼（Plecoglossus altivelis）和分离自患病香鱼体内的病原菌为研究对象,描述了患病香鱼的病理症状,研究了患病香鱼的5种组织的病理学变化,利用自动微生物鉴定系统配合相应鉴定卡和分子生物学方法对分离得到的三个菌株进行种属鉴定,人工感染后确定了NH21菌株为此次香鱼病害的病原菌,经回归感染确定了该菌株对香鱼的致病性,计算半致死量(lethal does 50%,LD),对25种抗生素进行药敏试验,为今后香鱼养殖中出现类似病症的预防和治疗提供了参考资料。主要结果如下:病鱼的病理症状表现为皮肤和肌肉组织溃烂,溃烂处鳞片和皮肤脱落,周围皮肤充血,肌肉组织突出,肛门红肿;解剖后可发现肠道肿胀变薄,肠道充血、出血,肠腔内有淡黄色炎性黏液。组织病理学研究表明患病香鱼体表溃烂处肌纤维断裂,周围可见红细胞、炎性细胞浸润,呈坏死性肌炎表现;鳃丝和鳃小片中红细胞增多,鳃丝间细胞和粘液细胞增多,细胞边界不明显,有淋巴细胞浸润,部分鳃丝上皮细胞瓦解;病鱼肝细胞的细胞核呈空泡样,部分肝细胞与周围肝细胞之间产生缝隙而被“隔离”,核内染色质边集,部分细胞凋亡、溶解;患病香鱼脾脏内红细胞数量减少,细胞排列不规则,白细胞聚集,核深染,细胞之间出现空泡;肠腔内黏膜上皮细胞脱落,在肠腔内溶解。从患病鱼体表和肠道组织中分离到三株菌,命名为NH21、AHN2和AVH3,它们在TSA（Tryptose soya agar,胰酪大豆胨琼脂培养基）平板上生长的的菌落低突,边缘光滑,表面湿润。革兰氏染色结果显示三株菌均为革兰氏阴性菌,菌形态为短杆状,端圆。经生理生化特征和16S r DNA序列分析分别鉴定为类志贺林单胞菌（Plesiomonas shigelloides）、嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）和维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）,分别命名为NH21、AHN2和AVH3。在以金黄色葡萄球菌为外群构建的系统进化树中,分离菌株NH21、AHN2和AVH3分别与同种菌株聚为一簇,嗜水气单胞菌与维氏气单胞菌的菌株聚为一大簇,三株菌与同种菌株的同源性都大于99%,作为外群的金黄色葡萄球菌单独成簇。AHN2和AVH3菌株经人工感染后的香鱼表现出体黑,游动缓慢,轻微浮头等症状,与文献中的描述相似,而NH21感染后的香鱼表现出肛门红肿,鳍基部充血的症状,与自然感染的香鱼症状相似,确定菌株NH21为此次香鱼体表溃烂病的病原。经回归感染后,使用改良的寇式计算法计算可得菌株NH21的半致死量LD为2.51×10～7CFU/m L。25种抗生素的药敏试验结果显示菌株NH21对阿奇霉素、头孢氨苄、新生霉素、多粘菌素B、头孢西丁、呋喃唑酮6种抗生素敏感,对麦迪霉素、氨苄西林、羧苄西林、阿莫西林、链霉素、卡那霉素、环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、多西环素、四环素、磺胺异噁唑、氧氟沙星耐受;对红霉素、克拉霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、氟苯尼考、复方新诺明6种抗生素处于中介状态。毒力基因与耐药基因实验检出菌株NH21毒力基因feo B、csr A、ssb、pho P、csg G、waa A、pan D、sod B、clp P共9个,不存在毒力基因nan E和hsd M;耐药基因emr D、cat B、mac B、ksg A、tol C、amp E、bac A、acr A均在菌株NH21中被检测到。综上所述,本文首先对患体表溃烂病香鱼的病理症状进行了描述,随后进行了组织病理学研究。病原菌分离共分得三个菌株,经生化特征鉴定和16S r DNA序列分析确定三个菌株分别是类志贺邻单胞菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌。经人工感染后,确定类志贺邻单胞菌为此次香鱼体表溃烂病的病原菌。同时,针对NH21菌株通过回归感染试验、药敏试验、毒力基因与耐药基因试验,确定了分离菌株NH21的一些菌株特性。

关键词：香鱼类志贺邻单胞菌回归感染半致死量药敏试验

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养殖锯缘青蟹支原体病原的分离与鉴定

养殖锯缘青蟹支原体病原的分离与鉴定

作者：楼丹贵州大学

学位级别：硕士

2004年入秋以来,浙江省三门县发生了严重的青蟹疾病,死亡率高,造成了极大的经济损失。据不完全估计,2004年三门县由此造成的经济损失达1.5亿元左右。至今尚无有效的控制方法。本文主要针对三门县近年来发生的锯缘青蟹流行疾病开展研究,... 详细信息

2004年入秋以来,浙江省三门县发生了严重的青蟹疾病,死亡率高,造成了极大的经济损失。据不完全估计,2004年三门县由此造成的经济损失达1.5亿元左右。至今尚无有效的控制方法。本文主要针对三门县近年来发生的锯缘青蟹流行疾病开展研究,分离并确定病原,为病害的预防和控制技术研究提供实验依据和理论基础。本文以浙江省台州市三门县患病养殖锯缘青蟹为研究对象,通过改良Frey培养基对青蟹支原体病原进行分离,利用理化试验和分子生物学研究对分离株进行鉴定,通过分离菌回接健康青蟹确定其致病力,同时利用电镜观察菌株超微结构,得出如下结果：1.本文成功从濒死患病的锯缘青蟹腮、肠组织中分离得到一株支原体,命名为My-1d。在固体培养基上其菌落形态呈典型的“煎蛋状”。理化试验初步确定菌株为支原体科。通过已报道支原体16S rRNA基因序列设计PCR引物并进行扩增、克隆。基因测序分析后证明分离株属于莱氏无胆甾原体(Acholeplasma laidlawii),模式株为PG-8A(登录号：CP000896.1),同缘性达到99%以上。2.菌株My-1d负染后,在电镜下观察发现支原体具高度多形态特征,以链珠状、分枝状、球状、双球状等为主,菌体整体形态呈两头大,中间小。菌株内部切片超微结构观察到支原体无细胞壁,外部为一层原生质膜,胞质染色后类似细颗粒物,内部可见染色较深的核糖体。3.病原回归感染实验证明该支原体能够使健康锯缘青蟹引起疾病和死亡。人工感染患病青蟹症状与自然青蟹发病现象相似,通过电镜观察,可在组织电镜切片中观察到与菌株My-1d相似形态的支原体存在。其中以注射方式感染效果最为显著。

关键词：锯缘青蟹支原体分离纯化生化鉴定分子鉴定超微结构回归感染

稀有鮈鲫卵细胞系的建立及其对草鱼呼肠孤病毒增殖特性研究

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稀有鮈鲫卵细胞系的建立及其对草鱼呼肠孤病毒增殖特性研究

作者：刘世旭天津农学院

学位级别：硕士

草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)属于水生呼肠孤病毒属,是水生呼肠孤病毒属中危害最大的病原之一,也是中国分离的第一株水生动物病毒,可感染草鱼和青鱼,严重时造成80%-100%的死亡率。稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)是一种小型... 详细信息

草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)属于水生呼肠孤病毒属,是水生呼肠孤病毒属中危害最大的病原之一,也是中国分离的第一株水生动物病毒,可感染草鱼和青鱼,严重时造成80%-100%的死亡率。稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)是一种小型的实验鱼类,研究证明稀有鮈鲫对部分草鱼呼肠孤病毒株很敏感,感染GCRV后,鱼体会表现出明显的出血病症状,甚至死亡。草鱼出血病流行病学调查显示,目前国内有三种基因型GCRV,基因II型为主要流行株型,GCRV-Ⅱ型毒株存在不能产生细胞病变,病毒增殖量低,常用草鱼细胞携带病毒等问题,亟需建立无病原携带且对GCRV-Ⅱ敏感的细胞系进行GCRV-Ⅱ型病毒致病机制、疫苗研发研究。本研究主要包括两部分内容:1.稀有鮈鲫卵细胞系的建立:本文采用胰蛋白酶消化法进行稀有鮈鲫卵组织的体外培养,并通过对培养液配方条件的优化成功地进行了稀有鮈鲫卵细胞的原代培养和继代培养,该细胞命名为GrE(Gobiocypris rarus eggs,GrE)。结果显示,GrE细胞的较适宜培养液为含有10%胎牛血清(FBS)的M199培养液,较适宜培养温度为28℃。细胞的贴壁、生长和分裂状态良好,GrE细胞为典型的上皮样细胞;经连续继代培养后,已成功建立了稀有鮈鲫卵细胞系,现已继代培养至第70代;染色体分析结果显示,GrE染色体众数为2n=66,核型为2n=30m+24sm+10t+2st,而稀有鮈鲫鱼体的染色体数目为2n=50,GrE细胞的染色体数目已发生改变,表明GrE细胞已发生突变,为永生化细胞系。GrE细胞系细胞经液氮冻存复苏后仍保持其原有细胞形态,其贴壁生长状态和增殖速度也与冻存前无差异。2.稀有鮈鲫卵细胞的应用:(1)将特定浓度的不同水生动物病毒,包括I、II型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅰ、GCRV-Ⅱ)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、大口黑鲈虹彩病毒(LMBV),蛙虹彩病毒(FV3))等接种至稀有鮈鲫卵细胞,接种后观察细胞产生细胞病变(CPE)情况,并用PCR进行定性检测。结果显示,GrE接种这五种病毒后,除接种GCRV的细胞外,其余细胞内均出现明显的CPE,且RT-PCR/PCR均检测出特异性目的条带,说明GrE细胞可用于上述常见病毒的分离和鉴定。此外,对于未产生明显CPE的GCRV接种组,通过间接免疫荧光进一步验证GrE细胞对GCRV-Ⅰ和GCRV-Ⅱ的敏感性,两种基因型的GCRV的滴度分别为10.59.59 TCID/ml、10.47.47 TCID/ml。(2)本研究进一步比较了GrE和草鱼肾脏细胞CIK对GCRV的敏感性,将初始滴度为10 TCID/ml的GCRV-Ⅰ和GCRV-Ⅱ同时接种于GrE和CIK细胞,GCRV-Ⅰ感染实验共7d,GCRV-Ⅱ感染实验14d,计算两种不同基因型GCRV在GrE和CIK细胞中的病毒拷贝数。结果显示,在GrE和CIK两种细胞中,GCRV-Ⅰ型的最高病毒拷贝数出现在第4 d,分别为1.45×10拷贝/μL(GrE)、1.26×10拷贝/μL(CIK),而GCRV-Ⅱ病毒拷贝数分别在感染CIK 7 d(约3.37×10拷贝/μL)和GrE 12 d(约2.25×10拷贝/μL)后达到高峰。(3)将GCRV-Ⅰ、GCRV-Ⅱ分别感染GrE细胞并传代20代,第1代和20代GCRV-Ⅰ都未能使稀有鮈鲫出现任何出血病的临床症状,组织病理切片结果显示,与阴性对照组无明显区别。前后两个代次的GCRV-Ⅱ注射感染稀有鮈鲫3-5d,鱼体出现了典型的出血病临床症状。鱼体各组织出现比较明显的病理变化,其中脑和肝组织的细胞间隙变大,有的细胞出现破裂,脾脏和肾脏组织中出现明显的棕黄色噬铁血红素中心,肠道毛细血管出血严重并伴随有肠绒毛破碎、形状不完整的现象。本研究成功构建稀有鮈鲫卵细胞系GrE,确定了细胞系的较适宜生长条件,并对细胞系的生长特性、细胞形态、染色体形态及在水生动物病毒上的应用进行了初步研究,研究结果表明,GrE可用于多种常规水生动物病毒的分离和培养。GCRV-Ⅰ、GCRV-Ⅱ均可以在GrE中增殖,与草鱼肾脏细胞CIK相比,GrE更适合GCRV-Ⅱ的增殖。两种基因型GCRV感染稀有鮈鲫后,通过临床症状观察,组织病毒载量测定,组织病理分析,表明GCRV-Ⅱ在GrE细胞上传代,至少20代毒力保持稳定。本研究中建立的GrE细胞可以用于流行基因型草鱼呼肠孤病毒的流行病学、致病机理、以及疫苗研发等相关研究。

关键词：草鱼呼肠孤病毒稀有鮈鲫卵细胞系病毒敏感性回归感染

一株鳙源鲁氏耶尔森氏菌的分离鉴定及其感染的肠道病理损伤

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水产科技情报 2022年第5期49卷 296-302页

作者：刘芸娜尚信池张培军卢玉婷刘佳汪惠庆闫子豪李月红吉林农业大学动物科学技术学院教育部动物产品与质量安全重点实验室吉林长春130118 吉林省卫生监测检测中心吉林长春130000

为确定患病鳙鱼致病菌及筛选敏感药物,通过平皿划线法从患病鳙鱼血液及体表溃烂组织中分离到1株革兰氏阴性的短杆菌JL9510,该菌株在电镜下呈短杆状,在LB固体培养基上呈透明状菌落。VITEK MS全自动快速微生物质谱检测结果证明,该菌株为... 详细信息

为确定患病鳙鱼致病菌及筛选敏感药物,通过平皿划线法从患病鳙鱼血液及体表溃烂组织中分离到1株革兰氏阴性的短杆菌JL9510,该菌株在电镜下呈短杆状,在LB固体培养基上呈透明状菌落。VITEK MS全自动快速微生物质谱检测结果证明,该菌株为鲁氏耶尔森氏菌的置信度为99.9。通过16S rRNA及系统发育树构建分析,发现菌株JL9510与已知菌株JQ657818.1 Yersinia ruckeri聚为一支,确定其是一株鲁氏耶尔森菌。人工回归感染试验结果证明,该菌株为患病鳙鱼的致病菌。VITEK 2 Compact自动化细菌鉴定和药物敏感性分析系统结果显示,鲁氏耶尔森氏菌JL9510有较高的致病力,且对氟苯尼考敏感,对环丙沙星耐药。试验的抗生素表现出良好的治疗效果,为鲁氏耶尔森氏菌的防治奠定了基础。

关键词：鲁氏耶尔森氏菌分离鉴定鳙回归感染病理损伤