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四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

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中国中药杂志 2004年第8期29卷 792-795页

作者：夏蕾沈朋浙江大学药学院中药科学与工程学系浙江杭州310027 浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫... 详细信息

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K5 6 2 /ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P 0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K5 6 2 /ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

关键词：四物合剂 K562/ADM 逆转作用人红白血病细胞株K562 细胞内多药耐药性表达浓度细胞膜剂量

四物合剂提取纯化过程中不同中间产物补血调经作用研究

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中药材 2016年第3期39卷 645-648页

作者：何瑶周莉江刘婷婷傅超美杨欢蒋燕萍成都中医药大学药学院/中药材标准化教育部重点实验室/中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地四川成都611137

目的:探讨四物合剂提取纯化过程中不同中间产物补血及调经止痛的功效,以期为其生产工艺研究提供科学、合理的药效学评价基础。方法:按照现行版中国药典收载四物合剂项下制备当归-川芎蒸馏液、四物水煎液、四物醇沉上清液、四物醇沉淀样... 详细信息

目的:探讨四物合剂提取纯化过程中不同中间产物补血及调经止痛的功效,以期为其生产工艺研究提供科学、合理的药效学评价基础。方法:按照现行版中国药典收载四物合剂项下制备当归-川芎蒸馏液、四物水煎液、四物醇沉上清液、四物醇沉淀样品液,采用乙酰苯肼(APH)-环磷酰胺(CTX)联用构建大鼠血虚模型,观察对其外周血象、脏器指数的影响;采用雌二醇-缩宫素联用构建小鼠痛经模型,观察其对血浆前列腺素2α(PGF_(2α))、前列腺素E2(PGE_2)及子宫组织丙二醛(MDA)、钙离子(Ca^(2+))的影响。结果:当归-川芎蒸馏液、四物水煎液、四物醇沉上清液、四物醇沉淀样品液均能显著升高血虚模型大鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)及肝脏、胸腺指数,四物醇沉上清液能提高血虚大鼠PLT水平,当归-川芎蒸馏液、四物水煎液能显著升高血虚大鼠脾脏指数。当归-川芎蒸馏液、四物水煎液、四物醇沉上清液、四物醇沉淀样品液均能显著升高痛经模型小鼠血浆PGE_2,降低血浆PGF_(2α)及子宫组织MDA含量;当归-川芎蒸馏液、四物水煎液、四物醇沉上清液均可显著降低痛经模型小鼠子宫组织Ca^(2+)含量。结论:四物合剂提取纯化工艺能较好的保留方中药效成分,发挥补血、调经止痛功效;同时发现被醇沉除去的物质仍具有一定的药效。

关键词：四物合剂提取纯化血虚痛经

四物合剂对缩宫素所致原发性痛经模型小鼠的影响研究

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中国比较医学杂志 2022年第4期32卷 1-6页

作者：刘子馨贾飞凡孟红旭韩笑李玲美尤越王奥奥王紫艳杨斌李磊付建华刘建勋中国中医科学院西苑医院基础医学研究所北京100091 国家中医心血管病临床医学中心北京100091 中药药理北京市重点实验室北京100091 解放军总医院第六医学中心北京100048 中国中医科学院西苑医院病理科北京100091

目的研究四物合剂对原发性痛经小鼠模型的影响,探讨其可能的作用机制。方法健康SPF级KM雌性小鼠60只,随机分为4组,分别为正常组、模型组、痛经宝颗粒组、四物合剂组。采用雌激素联合缩宫素诱导的原发性痛经小鼠模型,适应性喂养3 d后,小... 详细信息

目的研究四物合剂对原发性痛经小鼠模型的影响,探讨其可能的作用机制。方法健康SPF级KM雌性小鼠60只,随机分为4组,分别为正常组、模型组、痛经宝颗粒组、四物合剂组。采用雌激素联合缩宫素诱导的原发性痛经小鼠模型,适应性喂养3 d后,小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇2 mg/kg,连续给药10 d。第4天开始,正常组和模型组给予等剂量蒸馏水,阳性药痛经宝颗粒组按4 g/kg给药,四物合剂组按8 mL/kg给药,连续给药7 d。以注射缩宫素后30 min内扭体次数和扭体潜伏期为主要观测指标,考察四物合剂的镇痛作用,测定血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测子宫组织前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;制备子宫病理切片观察腺体增生、炎性细胞浸润情况,免疫组化检测环氧化酶2(COX-2)表达。结果与正常组相比,模型组30 min内扭体次数明显增加、扭体潜伏期显著缩短(P四物合剂组30 min内扭体次数降低(P四物合剂组扭体潜伏期增加(P四物合剂组血清MDA水平降低(P四物合剂能显著减少原发性痛经小鼠30 min扭体次数,延长扭体潜伏期,其作用机制可能与降低血清MDA含量、子宫组织中PGF_(2α)、IL-6、TNF-α水平以及COX-2表达,改善组织病理学变化有关,值得进一步深入研究。

关键词：四物合剂原发性痛经中药

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逆转肿瘤细胞多药耐药性的四物合剂有效组分

中国中药杂志 2005年第7期30卷 520-523页

作者：沈朋夏蕾张海江浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003 浙江大学药学院中药科学与工程学系浙江杭州310027

目的:研究四物合剂逆转人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药作用的药效活性组分。方法:用大孔吸附树脂分离四物合剂,并用体外细胞模型作药效评价,寻找发现活性部位,再用HPLCMS方法研究活性部位的化学组成,进而确定其主要活性组分。结果:... 详细信息

目的:研究四物合剂逆转人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药作用的药效活性组分。方法:用大孔吸附树脂分离四物合剂,并用体外细胞模型作药效评价,寻找发现活性部位,再用HPLCMS方法研究活性部位的化学组成,进而确定其主要活性组分。结果:熟地黄粗多糖对K562/ADM的耐药性有明显的逆转作用,其逆转倍数与对照组(无逆转剂)相比有显著差异(P0.05)。结论:熟地黄粗多糖能逆转K562/ADM细胞的多药耐药性,是四物合剂逆转K562/ADM多药耐药性的主要活性组分之一。

关键词：四物合剂细胞多药耐药性有效组分逆转肿瘤 K562/ADM细胞人红白血病细胞株 HPLC-MS 活性组分大孔吸附树脂体外细胞模型活性部位逆转作用耐药作用药效评价化学组成粗多糖熟地黄逆转剂对照组

四物合剂对马利兰诱导HL-60细胞凋亡的影响

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肿瘤防治研究 2011年第3期38卷 261-264页

作者：任亮张志国张延新马菲杜钢军漯河医学高等专科学校药学系河南漯河462002 漯河市源汇区妇幼保健院儿科河南大学药学院

目的观察不同剂量四物合剂对马利兰诱导HL-60细胞凋亡作用的影响。方法 MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞p53/bcl-2表达,ELISA法检测细胞色素C释放,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8和谷胱甘... 详细信息

目的观察不同剂量四物合剂对马利兰诱导HL-60细胞凋亡作用的影响。方法 MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞p53/bcl-2表达,ELISA法检测细胞色素C释放,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8和谷胱甘肽(GSH)。结果四物合剂可激活细胞Caspase-3和Caspase-8,上调细胞p53/bcl-2表达比率、升高细胞色素C释放、降低GSH(P四物合剂可抑制HL-60细胞生长,对马利兰诱导HL-60细胞凋亡具有增效作用,其增效作用机制可能与激活肿瘤细胞凋亡PKC通路有关。

关键词：四物合剂马利兰 HL-60细胞凋亡通路

四物合剂提取纯化过程中“质”与“效”的研究

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四物合剂提取纯化过程中“质”与“效”的研究

作者：周莉江成都中医药大学

学位级别：硕士

四物汤被誉为“补血之专方,调经之良剂”,四物合剂是在其传统汤剂剂型基础上经改进而成。片面的“唯成分论”质量控制法难以准确反映制剂的功能主治与制备过程,本研究拟通过将四物合剂提取纯化过程中的中间体的指纹图谱与药效结合建立... 详细信息

四物汤被誉为“补血之专方,调经之良剂”,四物合剂是在其传统汤剂剂型基础上经改进而成。片面的“唯成分论”质量控制法难以准确反映制剂的功能主治与制备过程,本研究拟通过将四物合剂提取纯化过程中的中间体的指纹图谱与药效结合建立谱效关系,实现对其制备过程的有效控制。目的本研究通过构建四物合剂提取纯化过程中的中间体谱效关系,表征其化学信息与药效作用的相关性,揭示其药效物质基础,为四物合剂过程制备控制评价体系提供可靠的客观依据。方法与结果第一部分：采用HPLC建立四物合剂提取纯化过程中的中间体(蒸馏液、水煎液、醇沉上清液、醇沉淀物)的指纹图谱,以其指纹特征峰为变量进行系统聚类分析。结果表明,在欧氏距离为5时,四物合剂提取纯化过程中的中间体可明显区分。第二部分：测定体现四物合剂提取纯化过程中的中间体功能主治相关的药效学参数。在肾上腺素联用冰水浴致大鼠急性血瘀模型实验中,与模型组比较,除四物醇沉淀物组外,各给药组均能降低血瘀大鼠血浆粘度、不同切变率条件下的全血粘度水平,四物水煎液组和四物醇沉上清液较其他组药效强;在APH联用CTX致大鼠血虚模型实验中,与模型组比较,各给药组均能一定程度升高WBC、HGB、RBC、HCT水平,且可升高肝脏、胸腺指数,其中四物醇沉上清液组药效最显著;在苯甲酸雌二醇联用缩宫素致小鼠痛经模型实验中,与模型组相比,各给药组均能升高血浆中PGE水平,降低PGF水平,四物水煎液和四物醇沉淀物药效较其他组显著。第三部分：运用PCA评价血瘀、血虚、痛经模型实验中药效学指标,并对30个特征峰进行了简化,采用灰色关联度对其指纹图谱特征峰和药效学宏观综合参数进行研究。发现四物合剂提取纯化过程中的中间体对药效作用贡献较大的指纹特征峰为2、5、7、8、11、12、13、21号峰,通过比对“解码”,得到2号峰为梓醇,7号峰为没食子酸,21号峰为芍药苷。结论本论文对体现四物合剂蒸馏、水提、醇沉工艺生产中蒸馏液、水煎液、醇沉上清夜、醇沉淀物进行谱效研究。综合结果分析,发挥四物合剂活血药效作用的物质主要集中于水提工艺生产中极性较大的成分,而发挥四物合剂补血调经药效作用的物质主要集中于醇沉工艺生产中极性较小的成分。同时发现对药效作用贡献较大的指纹特征峰并不是常被用来作为质量评价指标的阿魏酸,而是梓醇、没食子酸、芍药苷及其他未知化合物。为实现中药复方制剂工艺过程“质”与“效”的科学评价,中药复方制剂制备工艺过程评价体系建立提供新思路。

关键词：四物合剂提取纯化过程中的中间体指纹图谱药效研究灰色关联度

四物合剂对化疗后大鼠卵巢功能的影响及机理研究

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四物合剂对化疗后大鼠卵巢功能的影响及机理研究

作者：孙海芸北京中医药大学

学位级别：硕士

目的利用原位细胞死亡检测法检测颗粒细胞凋亡情况,研究四物合剂对腹腔注射化疗药物顺铂后的大鼠血激素、卵巢颗粒细胞层厚度及凋亡指数的影响,探讨四物合剂对化疗所致卵巢储备功能下降的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。材料和方法1.动物... 详细信息

目的利用原位细胞死亡检测法检测颗粒细胞凋亡情况,研究四物合剂对腹腔注射化疗药物顺铂后的大鼠血激素、卵巢颗粒细胞层厚度及凋亡指数的影响,探讨四物合剂对化疗所致卵巢储备功能下降的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。材料和方法1.动物分组与模型制备：雌性SD大鼠,清洁级,体重(190±10)g,分为正常组、顺铂组、四物组和倍美力组。除正常组外其他三组均腹腔注射顺铂后,顺铂组灌胃纯净水;四物组灌胃四物合剂;倍美力灌胃倍美力溶液。2.四物合剂对化疗后大鼠血激素水平的影响：自实验第1日起,各组大鼠每日取阴道分泌物,制作阴道涂片以观察其动情周期的变化。灌胃给药7d后,于第8日晨,麻醉后取血清,采用化学发光法测定雌二醇(E：)、卵泡刺激素(FSH)、孕酮(Pro)和黄体生成激素(LH)。3.四物合剂对化疗后大鼠卵巢颗粒细胞层厚度的影响：灌胃7d后,于第8日晨,麻醉后,取双侧卵巢,放入10%中性甲醛固定,脱水,包埋,切片,HE染色,图像分析仪下显微测量颗粒细胞层最大厚度。4.四物合剂对化疗后大鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数的影响：卵巢切片常规脱蜡至水,TUNEL法检测颗粒细胞凋亡,具体操作按说明书。苏木精复染,流水冲洗返蓝,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。图像分析仪下计算颗粒细胞细胞凋亡指数。结果1.四组大鼠血中FSH值差异有统计学意义,模型组FSH值升高明显且与正常组之间有统计学意义,卵泡对FSH敏感性降低是卵巢功能衰退的早期征象,此结果说明造模成功;各组LH值无统计学意义;Pro值模型组与正常组之间有统计学意义;E2值倍美力组与模型组之间有统计学意义。2.粒细胞层厚度值中模型组与正常组之间有统计学意义,倍美力组与模型组之间有统计学意义。凋亡指数值中模型组与正常组之间有统计学意义,四物合剂组和倍美力组与模型组之间均有统计学意义。结论1.四物合剂可提高化疗后大鼠血中雌激素的水平,四物合剂可改善化疗导致的低雌激素血症。有改善作用,这有利于化疗后大鼠卵巢功能的恢复。2.四物合剂可增加卵巢颗粒细胞层厚度,颗粒细胞参与多种性激素的分泌和调节,颗粒细胞层厚度的增加能有利于其更好的发挥作用,对卵巢功能的恢复有重要意义。3.四物合剂可降低卵巢颗粒细胞的凋亡指数,可降低顺铂引起的细胞的异常凋亡,表明四物合剂有可能是通过抑制颗粒细胞的异常凋亡而保护卵巢的正常功能。但四物合剂是因为其植物雌激素样作用而发挥的作用,还是通过抑制颗粒细胞的异常凋亡而发挥作用是值得探讨的。

关键词：卵巢颗粒细胞四物合剂细胞凋亡

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四物合剂质量标准研究

四物合剂质量标准研究

作者：孟令丹沈阳药科大学

学位级别：硕士

四物合剂来源于补血调血的经典名方“四物汤”，由熟地黄、当归、白芍和川芎四味药在传统处方基础上结合现代制药技术研制而成的口服液，收载于《中国药典》2005年版一部，具有良好的养血调经之功效，目前国内已有多家制药企业正式生产... 详细信息

四物合剂来源于补血调血的经典名方“四物汤”，由熟地黄、当归、白芍和川芎四味药在传统处方基础上结合现代制药技术研制而成的口服液，收载于《中国药典》2005年版一部，具有良好的养血调经之功效，目前国内已有多家制药企业正式生产。现行四物合剂的质量标准不够完善，含量测定指标单一，已不能满足中药现代化质量控制的要求。本研究建立了四物合剂与其组成药材中指标性成分含量的HPLC测定方法，对四物合剂口服液的质量评价方法进行了研究。 (1)本研究建立了熟地黄中5-羟甲基糠醛、白芍中芍药苷、当归中阿魏酸和川芎中阿魏酸含量测定的高效液相色谱法。建立了熟地黄中5-羟甲基糠醛含量测定的反相高效液相色谱法。测定了10批不同产地熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量，色谱柱为Kromasil C(250mm×4.6mm i.d，5μm)，流动相为乙腈-水(5：95)，检测波长为284nm。其线性范围为0.91～18.2μg·mL(r=0.9997，n=5)，方法平均回收率为98.6％(RSD=2.4％)。本方法简便、准确、重复性好，为熟地黄的质量评价提供了定量分析方法。建立了白芍中芍药苷含量测定的反相高效液相色谱法。测定10批不同产地白芍中芍药苷的含量，色谱柱为Kromasil C(250mm×4.6mm i.d，5μm)，流动相为乙腈-甲醇-水-磷酸(10：20：70：0.035)，检测波长为230nm。其线性范围为7.704～77.04μg·mL(r=0.9997，n=5)，方法平均回收率为101.8％(RSD=1.5％)。本方法简便、准确、重复性好，为白芍的质量评价提供了定量分析方法。建立了当归和川芎中阿魏酸含量测定的反相高效液相色谱法。测定10批不同产地当归和10批不同产地川芎中阿魏酸的含量，色谱柱为Kromasil C(250mm×4.6mm i.d，5μm)，流动相为乙腈-甲醇-水-磷酸(10：20：70：0.035)，检测波长为316nm。其线性范围为4.025～80.50μg·mL(r=0.9996，n=5)，方法平均回收率为98.7％(当归，RSD=2.0％)和97.9％(川芎，RSD=2.3％)。本方法简便、准确、重复性好，为当归和川芎的质量评价提供了定量分析方法。 (2)本研究建立了四物合剂中几种指标性成分的同时含量测定的高效液相色谱法。

关键词：四物合剂熟地黄当归白芍川芎

SPE-HPLC测定四物合剂中藁本内酯的含量

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中成药 2005年第6期27卷 737-738页

作者：苗爱东梁乾德王升启军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的:建立四物合剂中藁本内酯的含量测定方法。方法:应用HPLC-DAD检测法,采用固相萃取(SPE)技术对样品进行预处理,PhenomenexLunaC18柱(5μm,4.6mm×150mm),流动相为甲醇水(65∶35),流速1mL·min-1。测定了四物合剂中藁本内酯的含量。结... 详细信息

目的:建立四物合剂中藁本内酯的含量测定方法。方法:应用HPLC-DAD检测法,采用固相萃取(SPE)技术对样品进行预处理,PhenomenexLunaC18柱(5μm,4.6mm×150mm),流动相为甲醇水(65∶35),流速1mL·min-1。测定了四物合剂中藁本内酯的含量。结果:藁本内酯在0.175～0.7μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率100.2,RSD为1.6(n=6)。结论:该方法简便、快速准确,可用于该制剂的质量控制。

关键词：四物合剂蒿本内酯 SPE-HPLC