检索结果-南通市图书馆

REV囊膜糖蛋白的表达、纯化及单克隆抗体的制备和初步鉴定

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中国兽医学报 2010年第2期30卷 180-182,187页

作者：张文娟裴宗飞牛钟相山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变... 详细信息

以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。

关键词： REV 囊膜糖蛋白单克隆抗体

马立克氏病病毒广西株G2囊膜糖蛋白gI基因的克隆和表达

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中国兽医学报 2001年第2期21卷 109-112页

作者：丁家波崔治中韦平卢银华赵文明韩凌霞吉荣扬州大学牧医学院江苏扬州225009 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 广西大学动物科技学院广西南宁530005

根据马立克氏病病毒 ( MDV)强毒株 GA的基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,以强毒株 G2基因组DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白 g I基因阅读框 ( ORF)中 ,除去其 N-端编码疏水区 1 6 5个碱基对 ( bps)以外的部分 ;将 PCR产物... 详细信息

根据马立克氏病病毒 ( MDV)强毒株 GA的基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,以强毒株 G2基因组DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白 g I基因阅读框 ( ORF)中 ,除去其 N-端编码疏水区 1 6 5个碱基对 ( bps)以外的部分 ;将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体 p GEX-6 P-1中谷胱甘肽转移酶( GST)基因的下游 ;将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1 株 ,在 1 .0 mmol/L IPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,g I-GST基因融合蛋白获了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western-blotting试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 30 0 0。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 ( CEF)在免疫荧光试验 ( FA)中 ,呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 G2株 MDV g

关键词：马立克氏病病毒 gI基因抗原性广西株囊膜糖蛋白基因重组基因表达疫苗

马立克氏病病毒648株囊膜糖蛋白gI基因的克隆和表达的研究

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中国预防兽医学报 2001年第1期23卷 7-10页

作者：丁家波崔治中徐建生韦平卢银华赵文明韩凌霞吉荣扬州大学畜牧兽医学院扬州225009 山东农业大学动物科技学院泰安271018 广西大学动物科技学院南宁530005

根据马立克氏病病毒 (MDV)强毒株GA的基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以特超强毒 6 48株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框 (ORF)中 ,除去其N_端编码疏水区的 16 5个碱基对 (bp)以外的其余部分 ;将PCR产物按... 详细信息

根据马立克氏病病毒 (MDV)强毒株GA的基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以特超强毒 6 48株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框 (ORF)中 ,除去其N_端编码疏水区的 16 5个碱基对 (bp)以外的其余部分 ;将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化进大肠杆菌BL2 1株 ,在 1.0mMIPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,gI_GST基因融合蛋白获得了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝脉电泳 ,West ern_blot试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 3kD。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验 (FA)中呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 6

关键词：马立克氏病病毒 gI基因囊膜糖蛋白基因克隆基因表达

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鸭瘟强毒与疫苗毒的囊膜糖蛋白序列比较

中国兽医杂志 2013年第2期49卷 3-7页

作者：姜甜甜张大丙中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京海淀100193

2011年,2个免疫过鸭瘟疫苗的樱桃谷北京鸭种鸭群发生鸭瘟。为了解该病发生是否与鸭瘟病毒(Anatid herpes-virus 1,AnHV1)变异有关,从发病场采集4份病死鸭的肝脏样品,用PCR检测和病毒分离进行了鉴定,并经UL2测序和序列分析确定1株AnHV1... 详细信息

2011年,2个免疫过鸭瘟疫苗的樱桃谷北京鸭种鸭群发生鸭瘟。为了解该病发生是否与鸭瘟病毒(Anatid herpes-virus 1,AnHV1)变异有关,从发病场采集4份病死鸭的肝脏样品,用PCR检测和病毒分离进行了鉴定,并经UL2测序和序列分析确定1株AnHV1分离株(W1)具有强毒株的分子特征。在此基础上,测定并比较了W1株和3株AnHV1弱毒疫苗的囊膜糖蛋白序列。结果显示,分离株W1株与3株弱毒疫苗株之间gB、gC、gD、gG、gH、gM、gN和gL蛋白的氨基酸序列完全相同,gE、gI和gK蛋白的氨基酸序列同源性为99%。结果表明,相对于我国养鸭生产中常用的弱毒疫苗株,分离株W1株的囊膜糖蛋白序列未发生明显的变异。

关键词：鸭瘟鸭瘟病毒囊膜糖蛋白

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牛疱疹病毒1型主要囊膜糖蛋白研究进展

动物医学进展 2020年第2期41卷 88-92页

作者：翟璐张海威涂伟黄艳梅宋佰芬黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

牛疱疹病毒(BHV-1)属于α疱疹病毒亚科的DNA病毒,可引起牛高热、上呼吸道感染和母牛流产。该病毒能在牛的感觉神经节内建立潜伏感染,因此,对于该病毒感染的预防和治疗较为困难。BHV-1除了引起初始感染外,还可通过免疫抑制引起动物继发感... 详细信息

牛疱疹病毒(BHV-1)属于α疱疹病毒亚科的DNA病毒,可引起牛高热、上呼吸道感染和母牛流产。该病毒能在牛的感觉神经节内建立潜伏感染,因此,对于该病毒感染的预防和治疗较为困难。BHV-1除了引起初始感染外,还可通过免疫抑制引起动物继发感染,导致动物死亡。研究发现,病毒入侵牛机体时,病毒囊膜糖蛋白在病毒与细胞间相互作用的过程中发挥了重要作用。论文对牛疱疹病毒1型主要囊膜糖蛋白(包括gB、gD、gN)的结构特征和生物学特征加以归纳总结,为该病毒的感染特性研究和预防提供参考。

关键词：牛疱疹病毒1型囊膜糖蛋白传染性牛鼻气管炎感染性脓疱性外阴阴道炎牛呼吸道疾病复合体

猪伪狂犬病毒TA-2017的分离鉴定及其主要囊膜糖蛋白遗传变异分析

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猪伪狂犬病毒TA-2017的分离鉴定及其主要囊膜糖蛋白遗传变异分析

作者：吴开山东农业大学

学位级别：硕士

伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),能感染多种家畜及野生动物,其中以猪最为易感,发病情况也最为严重,猪是伪狂犬病毒的自然宿主。伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒引起的一种急性传染病,发病动物主要表现为发热,呼吸道症状... 详细信息

伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),能感染多种家畜及野生动物,其中以猪最为易感,发病情况也最为严重,猪是伪狂犬病毒的自然宿主。伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒引起的一种急性传染病,发病动物主要表现为发热,呼吸道症状和神经症状等。发病率和死亡率都很高,给世界范围内的养猪业造成巨大的经济损失,被我国列为2类传染病。目前,对于PR的防控主要依靠接种疫苗,疫苗的广泛使用有效地控制了猪伪狂犬病的流行。但在2011年以来,PRV疫苗免疫的规模化猪场暴发了大规模PRV变异株导致的伪狂犬疫情,并且呈现出逐步蔓延的形势,给我国养猪业带来了巨大的经济损失。此次PR的暴发说明传统的PRV疫苗的保护力不足,已经不能为宿主提供足够的保护。新型PRV变异株与经典株相比,毒力增强,对猪的致病性也明显增强,由新型PRV导致的PR将是今后危害我国养猪业最为严重的传染病之一。本课题通过2017年从山东泰安地区PR免疫猪场的伪狂犬病疑似病料中分离得到了一株伪狂犬病毒,克隆了其主要的囊膜糖蛋白基因gE,gI和gC基因,并对其序列与国内外经典毒株和国内2011年以来分离的新型变异伪狂犬毒株进行了序列比对和遗传进化分析,序列比对发现该毒株与国内2011年以来新分离的变异株存在相同的特征性变异位点,即在gE氨基酸序列的第48和496位均有1个天冬氨酸(D)的插入,具有变异毒株的典型特征,并未在gE,gC和gI基因都有与变异株相同的变异位点。除此之外本次分离毒株还有其特有的变异位点。遗传进化分析表明该变异株与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行的变异毒株位于同一分支。表示本实验成功从临床病例中分离了一株PRV变异毒株,为了解近年来PRV的变异情况,分析其主要囊膜蛋白的序列遗传变异规律,为PRV变异株致病性研究搭建平台。并对其gE和gI基因进行了真核表达载体的构建,为下一步研究gE和gI蛋白功能奠定基础。

关键词：变异株伪狂犬病毒囊膜糖蛋白分离鉴定遗传变异分析

REV分离株囊膜糖蛋白基因的克隆及序列分析

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2003年第1期24卷 23-25页

作者：吉荣赵文明钱莉李余慰崔治中扬州大学畜牧兽医学院动物医学系江苏扬州225009 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

根据网状内皮组织增生症病毒 ( REV) SNV株 env基因的序列 ,设计并合成了 2对引物 ,利用该引物 ,以中国地方分离株 SD990 1、HA990 1前病毒基因组 c DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,成功地从国内分离的 2株 REV毒株中扩增出env基因 ,并将其... 详细信息

根据网状内皮组织增生症病毒 ( REV) SNV株 env基因的序列 ,设计并合成了 2对引物 ,利用该引物 ,以中国地方分离株 SD990 1、HA990 1前病毒基因组 c DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,成功地从国内分离的 2株 REV毒株中扩增出env基因 ,并将其克隆到 p UCm-T载体中测序。将所得序列与 SNV株进行比较 ,分析其同源性。结果表明 :在核苷酸水平上 ,参考株 SNV株的 env基因与 2株中国分离株的同源性分别为 97.7%和 95 .0 % ;在氨基酸水平上 ,其同源性分别为 96.9%和 92 .7%。分析进化关系 ,HA990

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒囊膜糖蛋白基因克隆序列分析 REV

犬瘟热病毒重组囊膜糖蛋白(H/F)全长质粒的构建

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中国动物检疫 2011年第6期28卷 40-43,47页

作者：王磊冯娜李天松刘玉秀高玉伟王铁成杨松涛夏咸柱军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 吉林农业大学吉林长春130062 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062

目的开发新型疫苗和改良目前使用的犬瘟热病毒(CDV)疫苗。方法以犬瘟热弱毒株CDV/R-20/8为模板,用PmeI单酶切pBluescript-F和pBluescript-H质粒中获得完整CDV-F和CDV-H基因片段,定向克隆到pCI-c1-EGFP质粒中,构建pCI-c1-F和pCI-c1-H质粒,正反向鉴定正确后,用SalI和MluI酶分别对pCI-c1-F、pCI-c1-H、pCI-CDV-EGFP质粒进行双酶切,分别回收目的片段c1-F、c1-H片段和载体片段pCI-CDV-,将c1-F和c1-H分别插入载体pCI-CDV-中,通过PCR和酶切的方法进行筛选、鉴定阳性克隆。结果成功构建重组双囊膜糖蛋白全长质粒,分别命名为pCI-CDV-F和pCI-CDV-H,为下一步重组犬瘟热病毒的拯救及免疫原性分析奠定基础。

关键词：犬瘟热病毒囊膜糖蛋白全长质粒构建

马立克氏病病毒疫苗CVI988株囊膜糖蛋白gI基因的序列分析

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扬州大学学报（自然科学版） 2000年第2期3卷 30-33页

作者：丁家波赵文明崔治中韦平吉荣卢银华扬州大学畜牧兽医学院动物医学系江苏扬州225009 广西大学动物科技学院动物医学系广西南宁530005

根据马立克氏病病毒 ( MDV)国际标准株 GA株的基因序列设计合成了可扩增 g I基因 ( 1 0 60 bp)的引物 .用 PCR技术 ,以 CVI988基因组为模板 ,扩增得到了预期大小的 PCR产物 .将此 PCR产物和p U C1 8经同样的限制性内切酶 Kpn 和 Bam H ... 详细信息

根据马立克氏病病毒 ( MDV)国际标准株 GA株的基因序列设计合成了可扩增 g I基因 ( 1 0 60 bp)的引物 .用 PCR技术 ,以 CVI988基因组为模板 ,扩增得到了预期大小的 PCR产物 .将此 PCR产物和p U C1 8经同样的限制性内切酶 Kpn 和 Bam H 处理后 ,连接、转化、鉴定 ,得到了含有 g I基因的质粒 .将此质粒进行序列分析 ,比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性 .用 DNAstar软件对其编码的氨基酸的疏水性和抗原性进行了预测 .

关键词：立克氏病病毒囊膜糖蛋白抗原性疫苗 gI基因