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嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究

食品科学 2007年第4期28卷 179-182页

作者：黄光荣应铁进戴德慧活泼蒋家新浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江杭州310027 浙江科技学院生物与化学工程学院浙江杭州310012 中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4．36倍,得率为5．3%,经SDS-PAG... 详细信息

从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4．36倍,得率为5．3%,经SDS-PAGE电泳测得其分子量为30．6kDa。酶的最适温度与pH实验表明,该酶最适温度为65℃、最适pH为7．5,并且该酶在50℃时表现出1h以上的稳定性。该蛋白酶的活性受到丝氨酸族蛋白酶专一性抑制PMSF和金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,Zn^(2+)能提高酶活性,因此该蛋白酶为Zn^(2+)激活的丝氨酸族蛋白酶。

关键词：中性蛋白酶纯化特性嗜热芽孢杆菌丝氨酸族蛋白酶

嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08的化学修饰研究

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食品与发酵工业 2006年第11期32卷 6-10页

作者：黄光荣应铁进戴德慧活泼蒋家新浙江大学生物系统工程与食品科学学院杭州310027 浙江科技学院生物与化学工程学院杭州310012 中国计量学院生命科学学院杭州310018

分离纯化了嗜热芽孢杆菌产生的耐高温蛋白酶HS08,以SDS-PAGE凝胶电泳和Superdax75预装柱凝胶过滤,测定蛋白酶HS08的分子质量为30.6ku,同时研究了酶专一性抑制剂对酶活性的影响。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性... 详细信息

分离纯化了嗜热芽孢杆菌产生的耐高温蛋白酶HS08,以SDS-PAGE凝胶电泳和Superdax75预装柱凝胶过滤,测定蛋白酶HS08的分子质量为30.6ku,同时研究了酶专一性抑制剂对酶活性的影响。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,而NBS、WRK、TNBS、Phenylgloxalhydrate等修饰剂对酶活性无明显抑制作用。K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+等金属离子对酶活性影响实验结果表明,Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。蛋白酶HS08的酶动力学实验表明,以BSA为底物,PMSF可使蛋白酶HS08最大反应速率Vmax下降50%,而对其米氏常数Km影响不大。

关键词：高温蛋白酶嗜热芽孢杆菌化学修饰活性中心丝氨酸蛋白酶

一株深海热液口嗜热芽孢杆菌SY27F代谢产物活性的研究

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微生物学报 2019年第2期59卷 314-325页

作者：周洪张勤何聿杨黄浩田永奇福州大学生命科学与工程学院福建福州350116 福州大学化学学院国家食品安全与生物分析科学实验室国家能源与环境光催化重点实验室福建福州350116

【目的】对一株来源于深海热液口嗜热芽孢杆菌的次生代谢产物进行抑菌活性和抗肿瘤活性的初步研究。【方法】采用纸片法和微量肉汤稀释法检测嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物的抑菌活性,采用CCK-8法测定其次生代谢产物的抗肿瘤活性。【... 详细信息

【目的】对一株来源于深海热液口嗜热芽孢杆菌的次生代谢产物进行抑菌活性和抗肿瘤活性的初步研究。【方法】采用纸片法和微量肉汤稀释法检测嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物的抑菌活性,采用CCK-8法测定其次生代谢产物的抗肿瘤活性。【结果】抑菌实验表明,嗜热芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,其最低抑菌浓度分别为1.56 mg/mL和3.13 mg/mL;细胞实验表明,其代谢产物对肿瘤细胞A549、HepG2、HeLa、MCF-7均有一定的抑制作用,其半致死浓度分别为0.390、0.451、0.704、1.105 mg/mL;与人肝肿瘤细胞(HepG2)相比,其对人正常肝细胞(L02)表现出良好的生物相容性。【结论】嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物具有一定的抑菌和抗肿瘤活性,可为寻找新型抑菌抗肿瘤活性物质提供优质资源。

关键词：深海热液口嗜热芽孢杆菌代谢产物抑菌活性抗肿瘤活性

嗜热芽孢杆菌亮氨酸氨肽酶的克隆、表达、纯化及特性研究

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嗜热芽孢杆菌亮氨酸氨肽酶的克隆、表达、纯化及特性研究

作者：沈燕菲华南理工大学

学位级别：硕士

蛋白酶作为一种高效、环保的生物催化剂已被广泛应用于食品加工行业中。蛋白经过酶解反应不仅能改变蛋白原有的特性，而且水解成的功能性多肽和游离氨基酸能进一步提高其生物学功能及营养价值，成为食品添加剂行业所关注的热点之一。然... 详细信息

蛋白酶作为一种高效、环保的生物催化剂已被广泛应用于食品加工行业中。蛋白经过酶解反应不仅能改变蛋白原有的特性，而且水解成的功能性多肽和游离氨基酸能进一步提高其生物学功能及营养价值，成为食品添加剂行业所关注的热点之一。然而，许多食物蛋白的水解液都会表现出苦味，从而直接影响了其应用价值。研究发现，这些苦味主要来源于水解产生的主要由疏水性氨基酸组成的低分子量小肽段。如何对蛋白水解液进行脱苦成为食品加工行业中所亟需解决的问题。氨肽酶是一个外切酶，可以选择性的从多肽链或蛋白上切除N-末端的氨基酸残基，并对蛋白水解液具有很好的脱苦作用，因此，开展对于氨肽酶的研究具有潜在的应用价值和科学意义。本论文运用基因合成的方法合成了来源于嗜热芽孢杆菌的一个亮氨酸氨肽酶全长基因Bk-lap，成功构建了重组表达菌株pET28a-LAP-BL21并得到大量可溶性表达。经Ni-NTA柱亲和吸附层析后得到了纯度较高的目标蛋白BkLAP。对该氨肽酶的酶学特性进行研究并进一步考察不同环境因子对BkLAP酶学特性和构象的影响。在此基础上考察了BkLAP与不同蛋白酶复配对鳀鱼蛋白的水解效果。研究结果显示：BkLAP在pH8.0的磷酸缓冲液中酶活性较高，最适反应温度为70℃。Ni对酶活性有较强的激活作用，其次是Mn和Co。圆二色谱结果表明，不同环境因子对BkLAP的构象都有不同程度的影响，推测是导致酶活性改变的原因之一。通过与商业酶以及内源蛋白酶的复合作用研究了BkLAP对鳀鱼蛋白的水解，结果表明BkLAP与其他水解酶的复合使用可以明显提高水解效果。提示BkLAP在蛋白水解工业中有很好的应用前景。本论文的研究结果不仅填补了对于该氨肽酶生物学性质研究的空白，而且对于开发适用于食品加工行业蛋白酶制剂的开发提供了较好的候选蛋白酶，对于推动该行业的健康发展具有重要意义。

关键词：亮氨酸氨肽酶嗜热芽孢杆菌酶学特性鳀鱼水解

嗜热芽孢杆菌HS08耐热中性蛋白酶的分离纯化及部分特性研究

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中国食品学报 2006年第6期6卷 30-35页

作者：黄光荣活泼蒋家新浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江科技学院生物与化学工程学院杭州310012 浙江科技学院生物与化学工程学院

从高温土壤中分离出1株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,研究了该酶的分离纯化与生化特性。蛋白酶经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和SephacrylS-100HR凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4.25倍,产率5.1%;经SDS-PAGE电泳测得其... 详细信息

从高温土壤中分离出1株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,研究了该酶的分离纯化与生化特性。蛋白酶经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和SephacrylS-100HR凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4.25倍,产率5.1%;经SDS-PAGE电泳测得其分子质量为30.9kDa。酶的最适温度与pH试验表明,其最适温度为65℃,最适pH为7.5,并在50℃时保持1h以上的稳定。该蛋白酶活性受到EDTA的抑制,Zn2+能提高酶活性,该酶为金属蛋白酶。改性酪蛋白(Azocasein)、酪蛋白、牛血清白蛋白(BSA)等3种底物专一性试验表明,改性酪蛋白是其最适底物。

关键词：中性蛋白酶纯化特性嗜热芽孢杆菌金属蛋白酶

嗜热芽孢杆菌制曲的美拉德反应与褐变产酱香研究

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贵州农学院学报 1992年第2期11卷 83-89页

作者：赵维娜谢和秦京王兴琼赖平吴龙英贵州农学院园艺系

分别用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的几株嗜热菌株制作麦曲,感官比较了30℃恒温和逐步升温到65℃等培养条件下细菌曲褐变产酱香的现象,测定了各曲料乙醇浸提液在490mm处的光密度值。结果表... 详细信息

分别用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的几株嗜热菌株制作麦曲,感官比较了30℃恒温和逐步升温到65℃等培养条件下细菌曲褐变产酱香的现象,测定了各曲料乙醇浸提液在490mm处的光密度值。结果表明,逐步升温至65℃培养的细菌曲中明显发生了美拉德反应(Maillard Reaction),引起褐变和产酱香效应,其小分子产物的褐变度(用OD值代表)为0.5252。曲料氨基酸分析表明,几株细菌均能分解麦粒培养料,突出地产生高含量的谷氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。

关键词：嗜热芽孢杆菌美拉德反应酱香

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腾冲热海嗜热芽孢杆菌的分离鉴定

科学技术与工程 2012年第15期20卷 3564-3567页

作者：晏爱芬余丽林连兵保山学院资源环境学院保山678000 昆明理工大学生物工程技术研究中心昆明650224

从云南腾冲热海温泉中分离得到26株嗜热芽孢杆菌菌株,对其中一株嗜热芽孢杆菌菌株NHH4进行电镜形态、生长特征、碳源、氮源等分析。该菌株细胞形态为杆状,产芽胞,革兰氏染色阳性,严格好氧,其最适生长温度为55℃,最适为pH7.5。能利用葡... 详细信息

从云南腾冲热海温泉中分离得到26株嗜热芽孢杆菌菌株,对其中一株嗜热芽孢杆菌菌株NHH4进行电镜形态、生长特征、碳源、氮源等分析。该菌株细胞形态为杆状,产芽胞,革兰氏染色阳性,严格好氧,其最适生长温度为55℃,最适为pH7.5。能利用葡萄糖、蔗糖、D-果糖、D-甘露糖,不能利用麦芽糖、乳糖、D-木糖、L-鼠季糖。通过对其16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,NHH4与Bacillus licheniformis strain N8的序列相似性为99%,将此菌株鉴定为嗜热地衣芽胞杆菌菌株。

关键词：嗜热菌嗜热芽孢杆菌分离鉴定

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一种嗜热芽孢杆菌所产耐高温纤维素酶的特性

江苏农业科学 2012年第9期40卷 348-350页

作者：王鹏贺芸杨军方李大力南京理工大学环境与生物工程学院江苏南京210094

筛选得到了产耐高温纤维素酶的嗜热芽孢杆菌,发酵获得了耐热纤维素酶,试验结果显示该酶最适温度为70℃,最适pH值为7.0,Km值为5.0×10-3g/mL,Fe3+对酶有强烈毒害作用,十二烷基苯磺酸钠对酶活性有促进作用。酶促降解纤维素主要产物为葡萄糖。

关键词：嗜热芽孢杆菌耐高温纤维素酶特性

培养条件对嗜热芽孢杆菌HU1合成几丁质降解酶及脱乙酰基酶的影响

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安徽农业科学 2011年第5期39卷 2543-2545,2547页

作者：戴德慧胡伟莲李巍浙江科技学院生化学院浙江杭州310023 浙江省医学科学院浙江杭州310012

[目的]研究培养条件对嗜热芽孢杆菌HU1产酶的影响,为工业化发酵生产酶及壳寡糖的制备提供依据。[方法]采用摇瓶培养方式,对嗜热芽孢杆菌HU1产几丁质降解酶及脱乙酰基酶的培养条件进行研究。[结果]最佳诱导碳源为粉末几丁质,其最适添加量... 详细信息

[目的]研究培养条件对嗜热芽孢杆菌HU1产酶的影响,为工业化发酵生产酶及壳寡糖的制备提供依据。[方法]采用摇瓶培养方式,对嗜热芽孢杆菌HU1产几丁质降解酶及脱乙酰基酶的培养条件进行研究。[结果]最佳诱导碳源为粉末几丁质,其最适添加量为3.5%;最佳氮源为酵母粉,最适添加量为1.0%;初始pH值为6.0时,有利于产酶;Cu2+对酶的合成表现出明显的抑制作用;而Ca2+则能有效增加产酶能力。Mg2+及Zn2+对嗜热芽孢杆菌HU1 2种酶的合成无显著影响;培养72 h,产酶量达到最高。以粉末几丁质为底物,对粗酶液的水解产物进行了分析,其12 h的水解产物主要集中于分子量为六糖以下的壳聚糖。[结论]利用粗酶液制备小分子壳寡糖工艺流程简单,为后期进一步开发保健品、生物农药、饲料添加剂、食品添加剂等奠定了基础。

关键词：嗜热芽孢杆菌几丁质降解酶几丁质脱乙酰基酶培养条件水解产物