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作者：王林林天津医科大学

学位级别：硕士

目的本实验以SD大鼠为研究对象建立非致命性创伤失血性休克模型,观察各组大鼠肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液中蛋白质含量、受体交互作用蛋白1(RIP1)及RIP3含量、程序性坏死细胞比例,并观察Nec-1对以上指标的影响,以观察Nec-1对创... 详细信息

目的本实验以SD大鼠为研究对象建立非致命性创伤失血性休克模型,观察各组大鼠肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液中蛋白质含量、受体交互作用蛋白1(RIP1)及RIP3含量、程序性坏死细胞比例,并观察Nec-1对以上指标的影响,以观察Nec-1对创伤失血性休克所致肺损伤是否有保护作用,并探讨其可能机制,为MODS发生发展机制的完善提供理论依据。方法随机分配96只SD雄性大鼠,创伤组、假创伤组、干预组、溶媒对照组各3个时间点(复苏开始后2h、6h、12h)均为8只。创伤组.大鼠采用非致命性的创伤/失血性休克模型,即腹部切口加失血后复苏,假创伤组大鼠同样采用此模型但只给予血管插管但不进行放血与复苏,干预组大鼠于复苏前5min尾静脉注射Nec-11mg/kg,溶媒对照组大鼠于复苏前5min尾静脉注射同体积Nec-1溶媒二甲基亚砜(DMSO)。分别于复苏开始后2、6、12h取大鼠肺组织进行HE染色病理检查并评分、支气管肺泡灌洗液蛋白质含量检测、应用Western blot法检测程序性坏死的特异性蛋白受体交互作用蛋白1(RIP1)及RIP3、流式细胞术检测程序性坏死细胞比例。结果 1.假创伤组大鼠各时间点肺组织HE染色病理切片显微镜检查无明显变化,组织病理学评分无差异(p>0.05);创伤组大鼠各时间点肺组织镜检均较假创伤组有明显变化,并有在明显评分上有明显差异(p均0.05);干预组大鼠各时间点肺组织病理变化较假创伤组仍有明显变化,但较创伤组对应时间点病理表现明显较轻(p蛋白质含量在各时间点无明显差异(p>0.05);创伤组大鼠各时间点BALF中蛋白质含量均较假创伤组明显增高(p均0.05);干预组大鼠6h内BALF中蛋白质含量较创伤组有无明显减少(p>0.05),12h时较创伤组减少(p蛋白质含量仍明显高于假创伤组(p均0.05);各时间点溶媒对照组大鼠肺RIP1和RIP3表达量与创伤组大鼠均无明显差异(p>0.05);干预组大鼠肺组织RIP1和RIP3表达量在6h至12h均明显低于创伤组。 4.创伤组大鼠肺组织程序性坏死细胞比例随时间延长而增高(p0.05);干预组大鼠肺组织程序性坏死细胞比例在各时间点均明显低于创伤组大鼠(p均0.05),但在6h及12h时间点仍高于假创伤组(p均蛋白质液体渗出及大量炎症细胞浸润,并且在12h内随时间延长有逐渐加重趋势。而Nec-1能够部分抑制这种现象的发生 2.大鼠创伤失血性休克所致肺损伤中存在细胞程序性坏死现象,且在复苏后12h内随时间延长而增多。Nec-1能够部分抑制创伤失血性休克所致大鼠肺损伤的细胞程序性坏死的发生,并在复苏后12h内这种抑制作用持续存在。 3.短时间内Nec-1能够部分抑制创伤失血性休克所致大鼠肺损伤的细胞程序性坏死的发生,较长时间Nec-1的抑制作用及在不同实验对象及模型的效果尚需进一步研究。

关键词： Necrositatin-1 创伤失血性休克多器官功能障碍综合征急性呼吸窘迫综合征程序性坏死受体交互作用蛋白1 受体交互作用蛋白3

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c-FLIP在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及意义

c-FLIP在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及意义

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作者：雷光艳遵义医学院

学位级别：硕士

目的:使用链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,探讨细胞型Fas相关死亡域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达以及c-FLIP介导坏死性凋亡通路在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:雄性成年SD大鼠,标准... 详细信息

目的:使用链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,探讨细胞型Fas相关死亡域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达以及c-FLIP介导坏死性凋亡通路在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:雄性成年SD大鼠,标准化喂养。实验分为糖尿病肾病模型组(DN)和正常对照组(NC),DN组采用链脲菌素(STZ)55mg/Kg腹腔注射造模,每组2、4、8、12、16周5个观察点,每个时点6只大鼠。处死前采取血液、尿液标本,检测血糖、血清肌酐、血清尿素氮和24小时尿蛋白定量;肾脏石蜡切片作普通病理;免疫组化、免疫印迹(WB)测定肾组织中c-FLIP、受体交互作用蛋白1(RIP1)和受体交互作用蛋白3(RIP3)表达,RT-PCR测定肾组织的c-FLIP、RIP1及RIP3 mRNA相对表达量。并分析各指标之间的相关性。结果:1.血、尿指标:1)血糖:DN组不同时间点血糖比NC组明显增加(P1)。2)24小时尿蛋白:(1)DN组不同时间点尿蛋白比NC组明显增加(P1)。(2)DN组尿蛋白(P1)随时间不断增加,差异有统计学意义(P1)。3)肾功能:(1)DN组不同时间点血清肌酐及尿素氮比NC组明显增加(P1)。(2)DN组血清肌酐及尿素氮差异均无统计学意义(P>0.05)。2.肾脏病理:(1)DN组大鼠肾脏发白、肿大,可见不同程度的肾小球肥大、细胞数增多、系膜基质增多、部分肾小管扩张及空泡样变性。(2)DN组不同时间点肾重指数比NC组明显增加(P1)。(3)DN组肾重指数随时间不断增加,差异有统计学意义(P1)c-FLIP主要表达于肾小球和肾小管细胞中;DN组不同时间点c-FLIP的表达量比NC组明显减少,差异有统计学意义(P1);DN组c-FLIP表达量不同时间点比较,均为2W与4W相比差异无统计学意义,8W、12W、16W显著低于2W和4W,差异有统计学意义(P1),8W与12W相比差异无统计学意义,16W显著低于8W和12W,(P1)。(2)RIP1和RIP3也是主要表达于肾小球细胞中;DN组RIP1和RIP3不同时间点比NC组明显增加(P1);DN组以上两个指标表达量不同时间点比较,均为2W与4W相比差异无统计学意义,8W、12W、16W显著高2W和4W,差异有统计学意义(p1),8w与12w相比差异无统计学意义,16w显著高于8w和12w,差异有统计学意义(p1或p蛋白表达量与rip1、rip3呈显著负相关(r=-0.933,p1;r=-0.954,p1),与尿蛋白、肾重指数、血清肌酐及尿素氮均也呈负相关(r=-0.945,p1;r=-0.922,p1;r=-0.543,p1;r=-0.494,p1)。4.免疫印迹:(1)dn组不同时间点c-flip的表达量比nc组明显减少,差异有统计学意义(p1);dn组c-flip表达量不同时间点比较,均为2w与4w相比差异无统计学意义,8w、12w、16w显著低于2w和4w,差异有统计学意义(p1),8w与12w相比差异无统计学意义,16w显著低于8w、12w,(p1)。(2)dn组rip1和rip3不同时间点比nc组明显增加(p1);dn组以上两个指标表达量不同时间点比较,均为2w与4w相比差异无统计学意义,8w、12w、16w显著高2w和4w,差异有统计学意义(p1),8w与12w相比差异无统计学意义,16w显著高于8w和12w,差异有统计学意义(p1)。(3)dn组c-flip蛋白表达量与rip1、rip3呈显著负相关(r=-0.985,p1;r=-0.986,p1),与尿蛋白、肾重指数、血清肌酐及尿素氮也呈负相关(r=-0.930,p1;r=-0.907,p1;r=-0.575,p1;r=-0.558,p1)。***-timepcr:(1)dn组不同时间点c-flipmrna相对表达量比nc组明显减少,差异有统计学意义(p1);dn组c-flip表达量不同时间点比较,均为2w与4w相比差异无统计学意义,8w、12w、16w显著低2w、4w,差异有统计学意义(p1),8w与12w相比差异无统计学意义,16w显著低于8w和12w(p1)。(2)dn组rip1和rip3不同时间点比nc组明显增加(p1);dn组以上两个指标表达量不同时间点比较,均为2w与4w相比差异无统计学意义,8w、12w、16w显著高2w和4w,差

关键词：糖尿病肾病坏死性凋亡细胞型Fas相关死亡域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白受体交互作用蛋白1 受体交互作用蛋白3

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创伤失血性休克大鼠肠系膜淋巴液对血管内皮细胞程序性坏死的影响

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山东医药 2014年第8期54卷 5-8页

作者：王林林王兵于金宝张立亚王玉亮崔尧丽王勇强天津医科大学一中心临床学院天津300070 天津市第一中心医院重症医学科天津市急救医学研究所卫生部危重病急救医学重点实验室

目的观察创伤失血性休克(THS)大鼠肠系膜淋巴液对血管内皮细胞程序性坏死的影响。方法建立THS大鼠模型,收集THS手术(T/HS)及假手术(T/SS)大鼠肠系膜淋巴液;将传代的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为3组,T/HS、T/SS组分别加入1∶1稀释的T/HS... 详细信息

目的观察创伤失血性休克(THS)大鼠肠系膜淋巴液对血管内皮细胞程序性坏死的影响。方法建立THS大鼠模型,收集THS手术(T/HS)及假手术(T/SS)大鼠肠系膜淋巴液;将传代的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为3组,T/HS、T/SS组分别加入1∶1稀释的T/HS、T/SS大鼠肠系膜淋巴液,对照组加PBS;培养3 h后,MTT法检测细胞活性,Western blot法检测程序性坏死的特异性蛋白受体交互作用蛋白1(RIP1)、RIP3。将HUVECS分为6组,A(D)、B(E)、C(F)组分别加入PBS、细胞程序性坏死阻滞剂Nec-1、溶媒DMSO预处理1 h,D、E、F组分别加入1∶1稀释的T/HS大鼠肠淋巴液。孵育3 h后,观察细胞活性及细胞程序性坏死情况。结果与T/SS组、对照组比较,T/HS组细胞活性降低、RIP1及RIP3表达量增加(P均作用能被Nec-1部分抑制。

关键词：创伤失血性休克程序性坏死阻滞剂受体交互作用蛋白1 人脐静脉内皮细胞多器官功能障碍综合征急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征大鼠

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