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南京农业大学学报 2018年第5期41卷 867-872页

作者：郑赛古芸曲峰龙陈雅玲余光辉冉炜沈其荣南京农业大学资源与环境科学学院/江苏省固体有机废弃物资源化利用高技术研究重点实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在通过解淀粉芽胞杆菌XZ-173固液混合发酵工艺生产出抗菌和抗氧化水解产物并研究其抗氧化特征。[方法]以大豆粉和稻壳等农副产品为原料30℃发酵60 h后,离心获得发酵液,再分别经过抽滤法和酸沉降法得到发酵粗提物(FCE)和表... 详细信息

[目的]本文旨在通过解淀粉芽胞杆菌XZ-173固液混合发酵工艺生产出抗菌和抗氧化水解产物并研究其抗氧化特征。[方法]以大豆粉和稻壳等农副产品为原料30℃发酵60 h后,离心获得发酵液,再分别经过抽滤法和酸沉降法得到发酵粗提物(FCE)和表面活性剂粗品(SCP)。采用自由基清除和还原性测定研究FCE和SCP的各项抗氧化能力指标。[结果]SCP比FCE具有更好的表面活性和抗菌性,但FCE比SCP具有更好的抗氧化性。当质量浓度为2.0 mg·m L-1时,FCE对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二胺盐(ABTS+)自由基、1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除率分别达到33.88%、40.07%、29.19%和88.50%;而SCP对这些自由基的清除率相对较低。与SCP相比,FCE还表现出较高的还原能力和总抗氧化能力。[结论]以大豆粉和稻壳为主要原料的微生物发酵产物能够抗多种过氧化物自由基,可作为天然活性添加剂用于食品和饲料新产品开发之中。

关键词：表面活性剂粗品发酵粗提物抗氧化性超氧阴离子自由基 DPPH自由基解淀粉芽胞杆菌XZ-173

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香蕉镰刀菌枯萎病拮抗细菌的筛选及其抗菌物质的初步研究

香蕉镰刀菌枯萎病拮抗细菌的筛选及其抗菌物质的初步研究

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作者：江林海南大学

学位级别：硕士

香蕉镰刀菌枯萎病,又称香蕉黄叶病、巴拿马病,是由尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporum ***. cubense, FOC）引起香蕉枯萎的毁灭性病害,给香蕉种植者带来了相当大的损失,严重制约了香蕉的产业的发展。目前通过栽培管理、抗病育种... 详细信息

香蕉镰刀菌枯萎病,又称香蕉黄叶病、巴拿马病,是由尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporum ***. cubense, FOC）引起香蕉枯萎的毁灭性病害,给香蕉种植者带来了相当大的损失,严重制约了香蕉的产业的发展。目前通过栽培管理、抗病育种、化学药剂等虽对控制该病取得了一定效果;但是栽培管理实施难度大,抗病品种农艺性状欠佳,化学防治导致病菌产生抗药性,而且对环境污染严重,迄今为止对该病还没有找到绝对有效的防治方法。因此,筛选FOC拮抗菌株,通过生物防治的方法,开发新型抗菌生物制剂对香蕉镰刀菌枯萎病进行综合防治具有重要的意义。此研究从海南省乐东县发病香蕉园区的土壤中平板稀释法分离到7株对香蕉镰刀菌枯萎病有拮抗效果的菌株。以FOC4作为指示菌对其进行抑菌效果测定,其在PDA平板对峙试验中对FOC4拮抗效果最好的抑菌圈直径达到了21.0mmm。通过复筛得到1株对FOC4强拮抗活性且遗传稳定的菌株。通过对该拮抗菌株进行形态、培养和生理生化特征的研究,加上16S rDNA序列的测定对该菌进行系统发育上的分析,最后鉴定该菌株为多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）,命名为JB01。探明了碳源、氮源、pH值、接种量等对菌株JB01生长及其产生的抗菌活性物质的影响。通过正交实验对培养基中的碳源和氮源进行了优化。最后确定JB01液体发酵培养基的碳源、氮源组成为：蔗糖1.5%,葡萄糖1.5%,酵母膏0.5%,胰蛋白胨1.5%。当JB01接种量为10%,初始pH值为8.0,200rpm摇床35℃震荡培养48小时后其发酵液抑菌圈最大,优化后对FOC4的抑菌直径达到22.4mm。同时,对菌株JB01发酵液的活性拮抗物质进行了初步研究。经过薄层层析法未得到预期的小分子化合物。通过45%饱和度的硫酸铵对其进行沉淀后,检测到沉淀对FOC4有很强抑制活性,经茚三酮反应阴性,推断可能是环肽。通过乙酸乙酯萃取发酵产物,得到的粗提物经过FOC4孢子抑制试验证明其抑菌活性很强。推断该化合物不止一种,可能有多种拮抗化合物共同作用。将拮抗菌JB01接种到巴西蕉（Musa AAA Cavendish subgroup ***）上进行大棚盆栽试验,验证了其对香蕉镰刀菌枯萎病的防效。在108天时,对照全部死亡,JB01处理过的香蕉抗病效率达70.7%,证明该菌对香蕉镰刀菌枯萎病有很强的防治效果。

关键词：尖孢镰刀菌古巴专化型生物防治多粘芽孢杆菌发酵粗提物大棚试验

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六种中药材内生真菌的分离纯化及其发酵产物活性研究

六种中药材内生真菌的分离纯化及其发酵产物活性研究

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作者：王帆兰州理工大学

学位级别：硕士

内生真菌以其种群多样性和发酵产物活性物质多样性,越来越受到研究者的青睐。本课题以6种传统中药材(白毛蛇、毛姜、三叶青、泽泻、木香、茯苓)为研究对象,应用组织块分离法和平板划线法对其内生真菌进行分离、纯化,结合菌落形态、显微... 详细信息

内生真菌以其种群多样性和发酵产物活性物质多样性,越来越受到研究者的青睐。本课题以6种传统中药材(白毛蛇、毛姜、三叶青、泽泻、木香、茯苓)为研究对象,应用组织块分离法和平板划线法对其内生真菌进行分离、纯化,结合菌落形态、显微形态和生理生化特性对其种属进行了鉴定。分别研究了40株内生真菌菌体乙醇提取物和发酵液乙酸乙酯萃取物共计80个样品的抑菌活性、抗氧化活性和α-糖苷酶抑制活性。在此基础上,主要从细胞膜通透性、完整性和DNA凝胶阻滞等方面研究了B06次级代谢产物乙酸乙酯萃取物(B06e)对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑制机理。主要研究结果如下:(1)从6种中药材中分离纯化得到137株内生真菌,分别属于曲霉属(Aspergillus)、根霉属(Rhizopus)、青霉属(Penicillium)、镰孢霉属(Fusarium)、毛霉属(Mucor)、头孢霉属(Cephalosporium)和粘帚霉属(Gliocladium)。(2)80个样品均表现出一定的抑菌活性、抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。抑菌试验结果表明,B06e对大肠埃希氏菌(***)、金黄色葡萄球菌(S.s aureus)、肺炎链球菌(***)和铜绿假单胞杆菌(***)四种供试菌株具有较强的抑制活性,抑菌圈直径均大于17mm,最小抑菌浓度(MIC)小于50μg/m L。抗氧化活性结果表明,Z05次级代谢产物乙酸乙酯萃取物总还原力最强(吸光值为1.354±0.051),半数效应浓度0.5664 mg/m L。F12的菌丝体提取物和S24次级代谢产物乙酸乙酯萃取物对羟基自由基(?OH)的清除率分别为75.29%±4.00%和94.37%±1.26%,其中S24乙酸乙酯萃取物的IC50(0.2405mg/m L)低于阳性对照Vc(0.2648 mg/m L),表现为极强的?OH的清除能力。DPPH自由基清除试验结果显示,8个样品的清除率高达90%以上,其中S05的菌丝体乙醇提取物的DPPH清除率为98.70%±0.45%(0.5mg/m L)IC50值为0.0554,低于阳性对照Vc的IC50值0.0845,表现出较强的DPPH自由基清除活性。而各样品对超氧阴离子自由基的清除活性均低于80%。α-葡萄糖苷酶抑制实验结果表明,37个样品对α-葡萄糖苷酶抑制率大于70%,其中Z003的菌丝体乙醇提取物的抑制率最高为96.11%±0.57%,IC50值为0.1928 mg/m L。(3)B06e抑菌试验表明,B06e的抑菌机制主要是通过诱导细菌细胞膜通透性发生改变,內溶物渗漏,B06e进入细胞与核酸物质发生作用,从而引起细胞稳态破坏,抑制微生物的生长繁殖。

关键词：中药材内生真菌发酵粗提物生物活性抑菌机理

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