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双黄连药物代谢的分子机制

双黄连药物代谢的分子机制

作者：贾敬亮河北农业大学

学位级别：硕士

双黄连是由金银花、黄芩、连翘组成的中药复方制剂,它们的主要成分为绿原酸、黄芩苷、连翘苷,主要用于外感风热引起的发热、咳嗽及多种上呼吸道感染等病症。本文通过体外和体内试验,分别探讨了双黄连各主要成分间相互作用的分子机理及... 详细信息

双黄连是由金银花、黄芩、连翘组成的中药复方制剂,它们的主要成分为绿原酸、黄芩苷、连翘苷,主要用于外感风热引起的发热、咳嗽及多种上呼吸道感染等病症。本文通过体外和体内试验,分别探讨了双黄连各主要成分间相互作用的分子机理及其对肝脏的保护作用。体外试验:通过胶原酶两步灌流法获取大鼠原代肝细胞,用不同浓度的双黄连及其主要成分绿原酸、黄芩苷、连翘苷处理24h～72h,Western Blot法检测肝细胞中CYP3A1的表达。结果显示:每只大鼠可获得(2～4)×10～8个肝细胞,成活率在95%左右,培养的肝细胞形态完整、生长良好,可用于药物代谢的研究。绿原酸在24h内对肝细胞CYP3A1无诱导作用,但处理48h、72h后CYP3A1的表达随药物浓度的增加而呈上升趋势。连翘苷作用24h～72h后,肝细胞CYP3A1的表达随药物浓度的增加呈递增的趋势,作用时间越长,表达越明显;10μM连翘苷作用72h对肝细胞CYP3A1的诱导作用最强。黄芩苷作用24h～72h后,肝细胞CYP3A1的表达随药物浓度的增加呈递增的趋势,10μM黄芩苷对肝细胞CYP3A1的诱导作用最强。绿原酸、黄芩苷、连翘苷两两配伍后处理肝细胞24h～48h,CYP3A1的表达与药物的浓度和作用时间呈正相关。双黄连处理肝细胞24h～48h后,CYP3A1的表达随药物浓度的增加呈上升趋势,相同浓度梯度下,48h比24h明显,且100μM的双黄连对CYP3A1的诱导作用最强。体内试验:将50只SD大鼠随机分成5组(每组10只):空白对照组(给予生理盐水)和双黄连处理组(剂量分别为100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg),每天腹腔注射一次,连用7天,处死大鼠,检测血清中ALT、AST、LDH、GSH及肝组织匀浆中MDA、SOD的含量,HE染色观察肝组织病理形态学的改变。结果显示:各组大鼠的ALT、AST、GSH、LDH、MDA、SOD的活力及肝病理形态学观察均正常。另取40只SD大鼠随机分成4组(每组10只):对照组和对乙酰氨基酚(APAP)模型组给予生理盐水,阳性药物组给予甘利欣,双黄连处理组给予200mg/kg双黄连,每天腹腔注射一次,连续7天,末次给药8h后,除空白对照组外其余各组均腹腔注射300mg/kgAPAP,对照组给予等体积生理盐水,禁食不禁水,16h后处死动物,检测血清中ALT、AST、TP的含量,HE染色观察肝组织病理形态学的变化。结果显示:与模型组相比,双黄连处理组大鼠血清中ALT、AST水平显著降低,TP的含量显著升高(P＜0.01)。模型组大鼠肝脏颜色变浅,表面略显粗糙,质脆,肉眼可见细小颗粒,肝小叶正常结构破坏,肝索解离,排列紊乱,脂肪变性较重,炎性细胞浸润明显,有充血现象。双黄连处理组与模型组相比,肝组织病理性改变较模型组明显减轻,脂肪变性减少,偶见充血,少见炎性细胞浸润。以上结果表明:双黄连及其有效成分绿原酸、黄芩苷、连翘苷均对大鼠肝细胞CYP3A1具有诱导作用。绿原酸、黄芩苷、连翘苷两两配伍后,对大鼠肝细胞CYP3A1诱导作用增强。双黄连对肝脏的毒性小,并能明显减轻APAP所致急性大鼠肝损伤,对肝损伤具有一定的保护作用。

关键词：双黄连药物代谢大鼠原代肝细胞 CYP3Al 保肝作用

双黄连冻干粉与注射用头孢拉定合用对HL-7702肝细胞毒性的初步研究

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双黄连冻干粉与注射用头孢拉定合用对HL-7702肝细胞毒性的初步研究

作者：徐大志广州中医药大学

学位级别：硕士

研究背景注射用双黄连冻干粉是由连翘、金银花、黄芩三味中药提取而成的中药复方制剂,它的主要有效成分是黄芩苷、绿原酸、连翘苷、汉黄芩素。临床上用于外感风热,邪在肺卫,热毒内盛,证见发热,咳嗽气促,咳痰色黄,咽喉肿痛;急性上呼吸... 详细信息

研究背景注射用双黄连冻干粉是由连翘、金银花、黄芩三味中药提取而成的中药复方制剂,它的主要有效成分是黄芩苷、绿原酸、连翘苷、汉黄芩素。临床上用于外感风热,邪在肺卫,热毒内盛,证见发热,咳嗽气促,咳痰色黄,咽喉肿痛;急性上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃腺炎、轻型肺炎见上述证候者。注射用头孢拉定为第一代头孢菌素,临床上用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染等。临床上在治疗细菌合并病毒感染时常联合应用,但两者合用后的安全性评价至今鲜有报道。目的本文通过HL-7702细胞培养的方式,采用检测细胞活性IC50、肝功能生化指标变化、结合细胞形态学观察,全面研究两药单用及合并用药后的肝细胞毒性,并初步探讨合并用药后肝细胞毒性的作用机制。方法与结果 1.双黄连冻干粉与头孢拉定合用对HL-7702细胞的毒性实验 1.1HL-7702细胞生物学特性的研究绘制HL-7702肝细胞生长曲线,筛选最佳的接种细胞数;用MTT法选择双黄连冻干粉及其与注射用头孢拉定合用后作用HL-7702细胞适宜的浓度。实验分为10组：溶剂对照组,头孢拉定组(0.046mg/mL),双黄连(0.25mg/mL),双黄连(0.5mg/mL),双黄连(1.0mg/mL),双黄连(2.0mg/mL),双黄连+头孢拉定(0.25mg/mL+0.046mg/mL),双黄连+头孢拉定(0.5mg/mL+0.046mg/mL),双黄连+头孢拉定(1.0mg/mL+0.046mg/mL),双黄连+头孢拉定(2.0mg/mL+0.046mg/mL)。 1.2双黄连冻干粉与头孢拉定合用对肝功能的影响检测注射用双黄连及其与注射用头孢拉定合用对HL-7702细胞培养液中LDH、AST、 ALT、SOD、MDA含量的影响。与对照组相比随着作用药物量的增加,细胞内的LDH、AST、 ALT的漏出增加,药物作用组SOD含量下降,MDA含量增加(p＜0.05)。 1.3双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞形态学的影响采用HE染色的方法观察注射用双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞的形态学影响。较低剂量时细胞间隙增大,呈不规则形状,细胞间连接逐渐消失,并有少量细胞脱落,较大剂量时细胞呈不规则或坏死形态,大量细胞坏死,胞核固缩,胞内形成空泡。与头孢拉定合用后,肝细胞形态异常改变加重。 2.双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞中ATP、ADP含量的影响采用高效液相法测定注射用双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用作用HL-7702后细胞中ATP、ADP含量的变化。结果显示随着给药量的加大HL-7702细胞中ATP、ADP的含量逐渐减少,与头孢拉定合用后,这种趋势更加明显。 3.双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞HO-1、COX2mRNA表达的影响。用RT-PCR技术检测注射用双黄连及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞中HO-1、COX2表达的影响,结果显示随着给药量的增加HO-1、COX2的表达增加,双黄连冻干粉与头孢拉定合用组尤为明显。 4.双黄连冻干粉与头孢拉定合用对HL-7702细胞作用的物质基础研究采用高效液相法变换波长测定双黄连冻干粉组中绿原酸、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩素的含量,并测定绿原酸、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩素与头孢拉定分别合用作用HL-7702细胞后,检测HL-7702细胞的AST、ALT、ATP、ADP的变化。实验结果显示：连翘苷及其与头孢拉定合用组对AST、ALT的含量影响明显高于其它组,而汉黄芩素对ATP、ADP含量的影响明显高于其他组。结论双黄连冻干粉与注射用头孢拉定合用有一定的肝细胞毒性,这种毒性的作用途径可能通过破坏细胞膜,上调HO-1、COX2的表达,破坏细胞内线粒体实现的,其中连翘苷在破坏细胞膜的完整性方面,汉黄芩素在破坏细胞内线粒体方面较其它成分更为明显。

关键词：双黄连头孢拉定合并用药肝毒性 HL-7702细胞

双黄连水制剂治疗犬急性呼吸道感染的临床观察

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黑龙江畜牧兽医 2006年第10期 102-103页

作者：王红吕燕秋北京市昌平区动物疫病预防控制中心北京102200

急性呼吸道感染大多由病毒引起,这种感染不仅具有较强的传染性,而且易引起严重的并发症.目前尚无明确的抗病毒药物,近年来采用中药制剂治疗急性呼吸道感染,已取得一定疗效.

关键词：急性呼吸道感染中药制剂临床观察治疗双黄连抗病毒药物犬水

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双黄连分散片的研制及质量评价

郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1157-1159页

作者：郭新红张楠张振中郑州大学药学院郑州450052

目的:研制双黄连分散片。方法:选用不同比例的明胶、甘露醇、甜菊苷和糖精钠对双黄连进行矫味试验,然后采用正交试验以崩解时限为指标筛选出分散片最优处方,并对其进行了溶出度测定。结果:当m(药物)m(明胶)m(甘露醇)=10.71时,... 详细信息

目的:研制双黄连分散片。方法:选用不同比例的明胶、甘露醇、甜菊苷和糖精钠对双黄连进行矫味试验,然后采用正交试验以崩解时限为指标筛选出分散片最优处方,并对其进行了溶出度测定。结果:当m(药物)m(明胶)m(甘露醇)=10.71时,双黄连味甜,且颗粒疏松。分散片的最优处方为:w(PVPP)为6.2%,w(MCC)为24%,w(硬脂酸镁)为0.5%,3min时黄芩苷的累积溶出度达85.89%。结论:本研究制得的双黄连分散片处方合理,溶出迅速,而且味甜,抗湿性能好,极大提高患者用药顺应性。

关键词：双黄连矫味分散片正交设计

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中药双黄连对单纯疱疹病毒的抑毒作用

中国现代医学杂志 2006年第3期16卷 378-380页

作者：李薇蒋丽敏郭岩王强沈阳解放军202医院儿科沈阳解放军202医院药局辽宁沈阳110003

目的探讨中药双黄连注射液对人胚脑单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的抑毒作用。方法采用人胚脑神经细胞制备HSV-Ⅰ型脑炎模型,用双黄连进行抑毒实验。检测培养液中的HSV-1的DAN拷贝数和肌酸激酶定量,作为抑毒指标。结果双黄连组对单纯疱疹病... 详细信息

目的探讨中药双黄连注射液对人胚脑单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的抑毒作用。方法采用人胚脑神经细胞制备HSV-Ⅰ型脑炎模型,用双黄连进行抑毒实验。检测培养液中的HSV-1的DAN拷贝数和肌酸激酶定量,作为抑毒指标。结果双黄连组对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的病变有明显抑制作用,HSV-1DNA拷贝数及肌酸激酶定量明显降低。结论双黄连可通过减少病毒DNA的复制,对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎模型的病变起到抑制病毒的作用。

关键词：双黄连 HSV-1 脑炎模型荧光定量PCK

双黄连后尿道灌注加“二红汤”口服治疗慢性前列腺炎46例

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上海中医药杂志 2003年第9期37卷 27-28页

作者：徐新建蒋学洲浙江省新昌县中医院浙江新昌312500 上海中医药大学附属龙华医院上海200032

采用双黄连针剂 (加地塞米松 )作后尿道灌注 ,并口服中药“二红汤”治疗 4 6例慢性前列腺炎 ,与单纯西药抗生素治疗 30例作对比观察 ,疗程 2个月。结果 :治疗组总有效率 86 .96 % ,对照组总有效率 5 0 0 0 % (P <0 0 5 )。

关键词：双黄连后尿道灌注 “二红汤” 口服治疗慢性前列腺炎