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脂溢性皮炎患者外周血单个核细胞产生白介素-2和白介素-10研究

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临床皮肤科杂志 2002年第10期31卷 632-633页

作者：朱娇媛文海泉中南大学湘雅二医院皮肤科

为探讨脂溢性皮炎(SD)的病因与发病机理,了解脂溢性皮炎与细胞免疫的关系,分别用糠秕马拉色菌(***)抗原和PHA刺激体外培养的外周血单个核细胞(PBMC),双抗体夹心elisa法检测PBMC产生的白介素(IL)-2、IL-10的含量。结果显示:在糠秕马拉色... 详细信息

为探讨脂溢性皮炎(SD)的病因与发病机理,了解脂溢性皮炎与细胞免疫的关系,分别用糠秕马拉色菌(***)抗原和PHA刺激体外培养的外周血单个核细胞(PBMC),双抗体夹心elisa法检测PBMC产生的白介素(IL)-2、IL-10的含量。结果显示:在糠秕马拉色菌抗原诱导后,SD患者组产生的IL-2水平比健康人组明显降低(P0.05)。提示SD患者存在着细胞因子分泌程式平衡的偏移,引起一系列细胞免疫反应的抑制效应,在SD发病机理中起着重要作用。

关键词：脂溢性皮炎外周血单个核细胞白介素-2 白介素-10 SD 双抗体夹心elisa法

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围手术期胃癌患者IL-12监测及其意义

第四军医大学学报 2002年第21期23卷 1986-1988页

作者：王小军赖大年苏建安鲁建国黎成金曹义战梅乐园高德明第四军医大学唐都医院普外科陕西西安710038 西安市纺织城职工医院普外科第四军医大学唐都医院急诊科陕西西安710038

目的　探讨将胃癌患者术前、术后血清 IL - 12水平作为机体自主免疫功能状态的监测指标的可行性 .方法　收集本院 2 0 0 0 - 10 / 2 0 0 1- 12确诊为胃癌的连续住院病例 72例 ,按术后静脉支持治疗方案不同分为两组 ,分别于术前 1d、术... 详细信息

目的　探讨将胃癌患者术前、术后血清 IL - 12水平作为机体自主免疫功能状态的监测指标的可行性 .方法　收集本院 2 0 0 0 - 10 / 2 0 0 1- 12确诊为胃癌的连续住院病例 72例 ,按术后静脉支持治疗方案不同分为两组 ,分别于术前 1d、术后8d采血 .另外取同期消化性溃疡住院患者血清作为对照 .采用双抗体夹心 EL ISA法测定 IL- 12水平 ,用 DKT系列 m Ab间接荧光法由流式细胞仪测定 T淋巴细胞亚群 .结果　胃癌患者术后 8d CD4 + T淋巴细胞亚群测定 ,应用全胃肠外营养(TPN)组为 36 .81± 5 .37,较术前值 32 .11± 6 .5 2明显升高(P<0 .0 5 ) .术前血清 IL - 12水平两组分别为 (44 .8± 2 1.3)pg· m L- 1和 (43.2± 17.9) pg· m L- 1 ,较正常对照组 (10 9.5± 6 2 .9) pg· m L- 1 明显降低 (P<0 .0 1) ,术后 8d两组血清IL - 12水平不同程度升高 ,应用 TPN组为 (73.4± 18.6 ) pg·m L- 1 较术前明显升高 (P<0 .0 1) ,较非 TPN组水平 (5 2 .4±2 2 .4 ) pg· m L- 1明显升高 (P<0 .0 5 ) .结论　胃癌患者血清IL - 12水平较正常人低 ,术后随着机体免疫功能的恢复 ,血清IL - 12水平有所上升 .应用 TPN支持治疗有利于术后机体免疫功能恢复 ,IL- 12水平上升更明显 .血清 IL-

关键词：胃肿瘤白介素-12 胃肠外营养双抗体夹心elisa法

肿瘤坏死因子α在2型肥胖糖尿病患者中的作用

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天津医药 2003年第7期31卷 428-430页

作者：朱立荣刘德敏石建党于德民汤新之天津医科大学代谢病医院 300070

目的 :探讨肿瘤坏死因子α在肥胖的2型糖尿病患者中的作用。方法:用双抗体夹心elisa法检测肥胖、非肥胖的2型糖尿病患者和健康成人血清中肿瘤坏死因子α的水平。结果 :肥胖的2型糖尿病患者血清中肿瘤坏死因子α的表达水平明显高于非肥... 详细信息

目的 :探讨肿瘤坏死因子α在肥胖的2型糖尿病患者中的作用。方法:用双抗体夹心elisa法检测肥胖、非肥胖的2型糖尿病患者和健康成人血清中肿瘤坏死因子α的水平。结果 :肥胖的2型糖尿病患者血清中肿瘤坏死因子α的表达水平明显高于非肥胖组与对照组 ,且与体重指数呈明显的正相关 ,与胰岛素敏感性指数呈负相关。结论

关键词：肥胖 2型糖尿病肿瘤坏死因子α 胰岛素抗药性双抗体夹心elisa法

慢性乙型肝炎外周血sCD62E水平与肝功能的关系

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临床肝胆病杂志 2002年第4期18卷 209-210页

作者：闫明先毛海婷刘倩王芸千佛山医院消化内科山东济南250014 山东省医学科学院基础所免疫室山东济南250012

采用双抗体夹心elisa法检测 5 4例慢性乙型肝炎患者外周血可溶性选择素E(sCD6 2E)浓度变化并分析其与肝功能的关系。结果显示 :慢性乙肝患者外周血sCD6 2E水平明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。慢乙肝轻度、中度、重度三组sCD6 2E均显著... 详细信息

采用双抗体夹心elisa法检测 5 4例慢性乙型肝炎患者外周血可溶性选择素E(sCD6 2E)浓度变化并分析其与肝功能的关系。结果显示 :慢性乙肝患者外周血sCD6 2E水平明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。慢乙肝轻度、中度、重度三组sCD6 2E均显著高于对照组 (P <0 0 1)。轻度、中度、重度慢乙肝患者sCD6 2E逐渐升高且差异明显。sCD6 2E与ALT、AST、TBIL呈正相关 ,与ALB负相关。提示 :sCD6 2E水平越高 ,肝功能损害越明显。sCD6 2E水平对衡量肝脏炎症程度和判断预后有重要临床价值。CD6 2E在HBV感染后引起的淋巴细胞浸润及肝细胞损伤机理中可能有重要作用。

关键词：慢性乙型肝炎外周血 sCD62E 肝功能双抗体夹心elisa法

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人可溶性CD14检测体系的建立及应用研究

人可溶性CD14检测体系的建立及应用研究

作者：江海燕第一军医大学

学位级别：硕士

可溶性CD14检测体系的建立及其应用研究 CD14是革兰氏阴性菌内毒素脂多糖(LPS)的高亲和力受体之一。除LPS外，CD14还介导肽聚糖(PGN)、脂磷壁酸(LTA)、脂蛋白等多种病原体成分与细胞的反应，它是天然免疫中重要的模式识别分子。CD1... 详细信息

可溶性CD14检测体系的建立及其应用研究 CD14是革兰氏阴性菌内毒素脂多糖(LPS)的高亲和力受体之一。除LPS外，CD14还介导肽聚糖(PGN)、脂磷壁酸(LTA)、脂蛋白等多种病原体成分与细胞的反应，它是天然免疫中重要的模式识别分子。CD14有两种存在形式：细胞膜表面的膜型受体(mCD14)和可溶性受体(sCD14)。sCD14存在于人体血液，脑脊液等体液中，在感染、创伤、烧伤和SLE等多种疾病中，sCD14的水平会升高，且与疾病的发生、发展相关。目前sCD14已成为机体单核／巨噬细胞活化的标志，用于监测疾病的发生和发展。国内关于sCD14的研究极少，究其原因，与目前尚无国产试剂盒而国外进口试剂盒价格昂贵有关。为解决这一困难，推动该领域的研究，并为国内关于CD14的基础研究和临床研究提供技术支持，本研究建立了人sCD14单多抗双夹心elisa检测体系;同时，还从人血浆中提取了天然sCD14，并进行了人CD14基因的克隆和表达，为在后续工作能深入研究CD14的生物学功能，探讨CD14与Toll样受体的相互作用以及在抗感染免疫中发挥的作用奠定了必要的基础。一、建立人sCD14单多抗双夹心elisa检测体系首先进行了抗人CD14单克隆抗体的纯化和多克隆抗体的制备。抗人CD14单克隆抗体60bca由本实验室利用单抗细胞株HB-247按常规方法制备小鼠腹水，用HiTrap protein G亲和层析柱纯化后，获得单抗15mg。用转染人CD14基因的人单核细胞THP1-CD14免疫家兔，获得了兔抗人CD14多克隆抗体，该抗血清特异性好，能够满足本研究的需要。利用已获得的抗人CD14单抗和多抗建立人sCD14单多抗双夹心elisa检测体系。通过优化实验条件，确定了单抗60bca包被浓度，兔抗人CD14多抗和HRP-羊抗兔IgG的工作浓度;用IBL公司进口人sCD14检测试剂盒标定混合正常人血清，作为本检测体系的标准品和质控血清。经过测试证明，本研究建立的sCD14检测体系各项技术指标达到国外进口试剂盒的技术水平，具体为:敏感性可达sng/ml，测量范围 sng/m1一120ng/m1;特异性强;重复性好，批内重复测定变异系数为3.27 %.72%，批间重复测定变异系数为6.7%一13.8%;准确性高，与国外进口试剂盒同时测量相同样品，所得结果相当。本研究利用自行建立的sCD14检测体系，测定了154名正常人， 137名神经内科住院患者以及300余名心内科住院患者血清标本。经过统计分析发现:健康人群中不同年龄组血清sCD14水平有一定差异;脑梗塞患者血清sCD14水平显著高于同年龄段正常对照组;急性冠脉综合征(急性心肌梗死和不稳定性心绞痛)患者血清sCD14水平也有显著升高。以上研究为进一步探讨sCD14在心脑血管疾病发生、发展中的作用机制提供了重要依据。二、人可溶性CD14的提取与制备为获得纯化人CD14蛋白用于后续工作，我们利用免疫亲和层析技术从人血浆中提取天然sCD14蛋白。将纯化的单抗60bca与 eNBr-aetived sePharose 4B交联，制备了sCD14亲和层析柱，从20oml 人血浆中纯化获得400林9 sCD一4蛋白，经Westem Blot和商品elisa 试剂盒鉴定，其特异性较好，保持了天然蛋白的生物活性。尽管天然sCD14蛋白在构象和功能等方面都优于重组CD14蛋白，但人血浆中scD14含量较低，且来源有限，难以满足研究工作的需求。因此，我们还利用分子生物学技术进行了人CD14全长基因的克隆和表达。具体工作包括:(l)提取THPI一CD14细胞总RNA，通过RT一PCR 扩增得到人CD14全长基因，测序鉴定证明本实验所获得的人CD14基因序列与Ge丘Bank中报道的一致;(2)利用己获得的CD14基因片断成功构建了人CD14原核表达载体pET28b/cD14和酵母表达载体 ppICZaA/CD14。(3)用IPTG诱导重组人eD一4在大肠杆菌中表达，经 ***和westem blot鉴定，cD14蛋白在大肠杆菌中获得了大量表达，但全部以包涵体形式存在，虽经过变性、复性处理，仍不能恢复 CD14蛋白活性。(4)用甲醇诱导重组人CD14在Pichia酵母中表达，经SDS一AGE和westem blot鉴定，重组人cD14蛋白以可溶形式存在于酵母菌培养上清中，但双夹心elisa测定其表达水平较低，表达量仅为48ng/ml。我们的后续工作包括:(l)进一步推广SCD14检测体系在基础研究与临床中的应用;(2)继续探索获得大量表达重组人CD14蛋白的实验条件，并通过分析

关键词：可溶性CD14 双抗体夹心elisa法原核表达酵母表达

原发性肝癌患者血清SICAM-1、VEGF水平测定的临床意义

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淮海医药 2005年第3期23卷 193-194页

作者：刘忠娟时步卿江苏省赣榆县人民医院检验科 222100

目的　探讨原发性肝癌患者血清SICAM- 1、VEGF水平及临床意义。方法　应用双抗体夹心EL ISA法对33例原发性肝癌患者进行血清SICAM- 1和VEGF水平测定。并以35名正常健康人作比较。结果　原发性肝癌患者血清中SICAM- 1和VEGF水平非常显著... 详细信息

目的　探讨原发性肝癌患者血清SICAM- 1、VEGF水平及临床意义。方法　应用双抗体夹心EL ISA法对33例原发性肝癌患者进行血清SICAM- 1和VEGF水平测定。并以35名正常健康人作比较。结果　原发性肝癌患者血清中SICAM- 1和VEGF水平非常显著地升高(P<0 .0 1) ,且以转移者更为显著。结论　检测血清SICAM- 1和VEGF水平的变化对了解病情、指导临床实践均具有十分重要的临床价值。

关键词：血清SICAM-1 原发性肝癌患者 VEGF 临床意义水平测定双抗体夹心elisa法正常健康人临床价值临床实践

Aβ1-42诱导U251细胞趋化因子RANTES表达的研究

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中国药理通讯 2009年第2期26卷 47-48页

作者：杨云霞郝杰王沼丹四川大学华西基础与法医学院药理教研室成都610041

目的：探讨β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导体外U251细胞炎性反应的分子学机制。方法：采用终浓度为0．2-4μmol／LAβ1-42处理U251细胞24h，以四唑盐比色法测定细胞存活率；U251细胞经常规去血清培养，采用硝酸还原酶法检测一氧化氮... 详细信息

目的：探讨β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导体外U251细胞炎性反应的分子学机制。方法：采用终浓度为0．2-4μmol／LAβ1-42处理U251细胞24h，以四唑盐比色法测定细胞存活率；U251细胞经常规去血清培养，采用硝酸还原酶法检测一氧化氮含量；采用双抗体夹心elisa法测定细胞RANTES蛋白表达水平；以免疫细胞化学染色法检测NF—KB和STAT1的表达。

关键词： RANTES表达 U251细胞 Aβ1-42 细胞趋化因子双抗体夹心elisa法免疫细胞化学染色法比色法测定 β淀粉样蛋白

口腔鳞癌患者手术前后血清可溶性Fas的变化

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广东牙病防治 2008年第9期16卷 403-404页

作者：王玉凤夏金星南京医科大学附属南京第一医院口腔科江苏南京210006

目的研究可溶性Fas在口腔鳞癌患者手术前后血清中的浓度变化。方法选择口腔鳞癌患者25例为鳞癌组,健康志愿者11例为对照组。采用双抗体夹心elisa法检测口腔鳞癌患者术前和术后第7天以及对照组健康者血清中可溶性Fas的浓度。结果血清中... 详细信息

目的研究可溶性Fas在口腔鳞癌患者手术前后血清中的浓度变化。方法选择口腔鳞癌患者25例为鳞癌组,健康志愿者11例为对照组。采用双抗体夹心elisa法检测口腔鳞癌患者术前和术后第7天以及对照组健康者血清中可溶性Fas的浓度。结果血清中可溶性Fas的浓度鳞癌组术前为(8.20±1.17)ng/L、术后为(6.45±1.23)ng/L,对照组为(5.62±1.22)ng/L。鳞癌组术前可溶性Fas浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);鳞癌组手术前后可溶性Fas浓度差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清可溶性Fas水平测定对估计口腔癌的病情变化可能有一定的临床意义。

关键词：可溶性Fas 双抗体夹心elisa法口腔鳞癌血清

腹水中可溶性白介素Ⅱ受体与肿瘤坏死因子的表达研究

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中国基层医药 2003年第10期10卷 992-993页

作者：贾百灵尚佳楚艳君李继昌河南省人民医院消化内科郑州450003 郑州大学第一附属医院消化内科

目的　探讨良性和恶性腹水中可溶性白介素Ⅱ受体 (SIL 2R)与肿瘤坏死因子 (TNF)水平及其临床意义。方法　采用双抗体夹心elisa法检测 30例良性、2 4例恶性腹水病人的腹水中SIL 2R与INF表达。结果　良性腹水中SIL 2R与TNF含量分别为 12 1... 详细信息

目的　探讨良性和恶性腹水中可溶性白介素Ⅱ受体 (SIL 2R)与肿瘤坏死因子 (TNF)水平及其临床意义。方法　采用双抗体夹心elisa法检测 30例良性、2 4例恶性腹水病人的腹水中SIL 2R与INF表达。结果　良性腹水中SIL 2R与TNF含量分别为 12 10 2 0± 2 6 3 72U/ml、79 32± 2 2 39ng/L ;恶性腹水中SIL 2R与TNF含量分别为 6 10 36± 189 2 3U/ml、2 0 0 1± 2 2 2 5ng/L ;良性腹水组SIL 2R与TNF浓度均明显高于恶性腹水组 ,两组间差异有显著意义 (P <0 0 1) ;联合检测两者诊断恶性腹水的敏感度、特异度、准确度分别为 92 %、83%、90 %。结论　检测腹水中SIL 2R与TNF含量有助于良、恶性腹水的鉴别诊断。

关键词：腹水可溶性白细胞介素Ⅱ受体肿瘤坏死因子双抗体夹心elisa法鉴别诊断