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彩鲫ran基因原核表达蛋白多克隆抗体的制备

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淡水渔业 2006年第2期36卷 3-5页

作者：李常健蒋琼凤湖南科技学院生命科学与化学工程系湖南永州425006

采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫(Carassius auratus gibelio)ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白,并以此为抗原免疫家兔,制备了相应的多克隆抗体;W estern b lotting结果表明,该抗体效价为1∶1000,具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对... 详细信息

采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫(Carassius auratus gibelio)ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白,并以此为抗原免疫家兔,制备了相应的多克隆抗体;W estern b lotting结果表明,该抗体效价为1∶1000,具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对分子质量、每次注射蛋白量、注射方式、注射途径等诸方面对该技术的要点进行了介绍。

关键词：彩鲫 ran基因原核表达蛋白多克隆抗体

登革2型病毒贵州分离株NS1部分基因原核表达蛋白及其多克隆抗体制备

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中国病原生物学杂志 2012年第6期7卷 422-425页

作者：朱海东左丽任丽娟河南省商丘医学高等专科学校河南商丘476100 贵阳医学院贵州省疾病预防控制中心

目的原核表达、纯化DENV-2贵州分离株NS1部分序列表达蛋白,并制备其多克隆抗体以研究其功能。方法合成DENV-2M株NS1部分基因序列,克隆到原核表达载体pET28(a),转化大肠埃希菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,Ni柱亲和层析纯化、回收融合蛋白;... 详细信息

目的原核表达、纯化DENV-2贵州分离株NS1部分序列表达蛋白,并制备其多克隆抗体以研究其功能。方法合成DENV-2M株NS1部分基因序列,克隆到原核表达载体pET28(a),转化大肠埃希菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,Ni柱亲和层析纯化、回收融合蛋白;用纯化融合蛋白免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价。结果原核表达了NS1部分序列融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1∶800。Western blot检测该蛋白能被His标签抗体识别。结论 DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白可诱导小鼠产生较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白的免疫原性奠定了基础。

关键词：登革2型病毒 NS1部分序列原核表达蛋白多克隆抗体

2型登革病毒NS1部分基因原核表达蛋白免疫小鼠后NK细胞和DCs的动态变化

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中国社区医师（医学专业） 2012年第26期14卷 26-27页

作者：朱海东左丽陈建设崔艳梅河南商丘医学高等专科学校微免教研室 476100 贵州贵阳医学院免疫学教研室 555004

目的:通过DENV-2NS1部分基因原核表达融合蛋白免疫BALB/c小鼠后,观察小鼠外周血及肝脏中NK细胞和DCs的动态变化。方法:用融合蛋白加弗氏佐剂经肌肉免疫BALB/c小鼠。采集各组小鼠在初次免疫及再次免疫后第12小时、24小时、72小时、7天、1... 详细信息

目的:通过DENV-2NS1部分基因原核表达融合蛋白免疫BALB/c小鼠后,观察小鼠外周血及肝脏中NK细胞和DCs的动态变化。方法:用融合蛋白加弗氏佐剂经肌肉免疫BALB/c小鼠。采集各组小鼠在初次免疫及再次免疫后第12小时、24小时、72小时、7天、14天外周血及肝标本,分别采用流式细胞术测定细胞膜表面CD3-CD49b+、CD86+CD11c+分子的表达。结果:免疫组小鼠外周血细胞的CD3-CD49+表达水平在第24小时至峰值,7天至第二峰值此后下降,肝淋巴细胞的CD3-CD49+表达水平在第72小时至峰值此后下降,CD86+CD11C+表达水平至第24小时达高峰值此后下降。与正常对照组差异有统计学意义(P表达原核表达融合蛋白免疫小鼠后,NK细胞和DCs反应较为迅速;且DCs有促进NK细胞的活化、增值的倾向。

关键词： DENV-2 原核表达蛋白流式细胞术

小球藻亲环蛋白A的酶活性及过表达拟南芥抗盐性分析

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植物研究 2017年第5期37卷 722-729页

作者：廖栩何明良张素艳马海燕王旭辉罗秋香管清杰东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心东北盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室哈尔滨150040 吉林省德惠市第九中学德惠130300

在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsC... 详细信息

在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsCyp1A原核蛋白表达载体,经IPTG诱导它的*** M15菌株表达融合蛋白,Nitra-柱纯化后获得纯化的30 kDa左右的His-CsCyp1A融合蛋白质,Western杂交检测到His CsCyp1A蛋白的杂交信号。酶活性分析显示,HisCsCyp1A融合蛋白中生色基团的产生速度明显快于对照,表明CsCyp1A蛋白可以催化底物N-succinyl-Xaa-Pro-Phe-p-nitroanilide中Xaa-Pro肽键的顺反折叠,说明纯化的CsCyp1A蛋白具有PPIase活性。典型的亲环蛋白家族成员具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性,参与折叠和转运、信号转导、免疫调节、细胞凋亡等生物学过程。真空渗入法侵染转化的拟南芥在35S启动子驱动下超表达CsCyp1A基因,耐盐性研究表明它提高了过表达株系对NaCl胁迫的耐性,揭示小球藻CsCyp1A基因的抗盐性功能,它将成为抗逆育种的基因资源。本研究也为探索小球藻亲环蛋白A的抗盐碱胁迫生物学作用和分子育种奠定了基础。

关键词：噬碳酸盐小球藻盐碱地亲环蛋白A 肽脯氨酰顺反异构酶原核表达蛋白

水稻OsUAP2基因生物信息学分析及原核表达活性鉴定

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分子植物育种 2022年第1期20卷 1-6页

作者：肖桂青陈雅婷周嘉豪文媛高敏张海文卢向阳湖南农业大学生物科学技术学院长沙410128 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

UAGPase广泛存在于生物体,是糖代谢过程中一类重要酶。我们前期发现水稻Os UAP1具有单向催化UDPG分解代谢活性,Os UAP2与Os UAP1序列相似性极高。本研究对Os UAP2进行生物信息学分析,构建并表达重组蛋白,并鉴定其酶蛋白活性。结果表明,O... 详细信息

UAGPase广泛存在于生物体,是糖代谢过程中一类重要酶。我们前期发现水稻Os UAP1具有单向催化UDPG分解代谢活性,Os UAP2与Os UAP1序列相似性极高。本研究对Os UAP2进行生物信息学分析,构建并表达重组蛋白,并鉴定其酶蛋白活性。结果表明,OsUAP2基因位于4号染色体,编码区序列长1482 bp,编码493个氨基酸;Os UAP2具有UDPGP保守结构域,无跨膜区域,N-端不含信号肽;二级结构分析显示,该蛋白含α-螺旋和无规则卷曲较多;同源性分析表明,Os UAP2与玉米UAGPase的亲缘关系最近。在16℃下经0.1 mmol/L IPTG诱导8 h,原核菌株BL21表达出分子量约55 kD可溶性重组蛋白。体外酶活性测定表明,Os UAP2能同时催化UDPG降解和合成,表现出双向可逆催化的特点。本研究结果为进一步深入研究OsUAP2基因的生物学功能提供了科学依据。

关键词：水稻 OsUAP2 原核表达蛋白酶活测定

等温滴定量热技术检测蛋白质间相互作用方法的优化

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首都师范大学学报（自然科学版） 2019年第3期40卷 38-43页

作者：贾继阳徐奭申兰兰张耀川张海娇白素兰首都师范大学生命科学学院北京100048 北京农业职业学院园艺系北京102442

利用等温滴定量热技术(ITC)检测拟南芥中控制根毛发生的关键蛋白CAPRICE(CPC)和GLABRA3(GL3)的相互作用.通过原核表达、纯化两种蛋白质并进行不同方式的透析及浓缩,利用ITC检测两种蛋白质的相互作用.实验显示对分子量相对较小的CPC蛋白... 详细信息

利用等温滴定量热技术(ITC)检测拟南芥中控制根毛发生的关键蛋白CAPRICE(CPC)和GLABRA3(GL3)的相互作用.通过原核表达、纯化两种蛋白质并进行不同方式的透析及浓缩,利用ITC检测两种蛋白质的相互作用.实验显示对分子量相对较小的CPC蛋白宜采用缓和的透析方式,而对分子量相对较大的GL3蛋白可通过磁力搅拌等方法加快透析的速度以防止短时间透析不彻底.ITC热动力学结果表明这两个蛋白质存在两个结合位点并很可能是以顺序结合的方式相互作用.第1个结合位点两个蛋白质相互作用的亲和力高于第2个结合位点.

关键词：等温滴定量热技术原核表达蛋白分离纯化相互作用

侵袭性大肠埃希菌IpaC的表达和纯化与检验学研究

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中国医药指南 2018年第6期16卷 19-20页

作者：刘庆权荣阳刘晓华辽宁省辽阳市新城医院检验科辽宁辽阳111000 辽宁省辽阳市中心医院医务处辽宁辽阳111000 辽宁省辽阳市中心医院检验科辽宁辽阳111000

目的研究分析侵袭性大肠埃希茵的发病机制,表达和纯化侵袭性大肠埃希茵毒力蛋白IpaC与临床意义。方法将含有ipaC基因的pET32a-ipaC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21(λDE3),在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,对诱导后的表达产物... 详细信息

目的研究分析侵袭性大肠埃希茵的发病机制,表达和纯化侵袭性大肠埃希茵毒力蛋白IpaC与临床意义。方法将含有ipaC基因的pET32a-ipaC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21(λDE3),在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,对诱导后的表达产物进行SDS-PAGE鉴定,并采用QIAexpressionitsTM蛋白纯化系统纯化目的蛋白。结果诱导后的表达产物经SDS-PAGE发现有一相对分子量约为63 kD的条带,其含量约占总蛋白量的13%,对目的蛋白进行纯化后发现,以400 mmol/L咪唑洗脱液洗脱时效果最为理想,纯度可达90%以上。结论 pET32a-ipaC重组表达质粒转化大肠杆菌B121(λDE3),可稳定、高效地表达目的蛋白;QIAexpressionistTM蛋白纯化系统是一种简便、高效的纯化系统,可获得高纯度的目的蛋白。

关键词：侵袭性大肠埃希菌毒力蛋白(IpaC) 原核表达蛋白纯化