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PPARγ通路激活可增强细胞抗氧化能力和保护长程培养原代神经细胞

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南方医科大学学报 2019年第1期39卷 23-29页

作者：王虎清樊嘉欣陈婉莹高震张桂莲吴海琴俞小瑞西安交通大学医学院第二附属医院神经内科陕西西安710004 西安交通大学医学院医学中心生物化学和分子生物学系陕西西安710004

目的研究PPARγ通路增强对长程培养原代神经细胞凋亡的保护作用。方法以长程培养22 d的原代神经细胞建立自然衰老模型。根据不同干预方法分为衰老对照组(C组)、GW9662干预组(G组)和吡格列酮(Pioglitazone)干预组(P组)。其中GW9662干预... 详细信息

目的研究PPARγ通路增强对长程培养原代神经细胞凋亡的保护作用。方法以长程培养22 d的原代神经细胞建立自然衰老模型。根据不同干预方法分为衰老对照组(C组)、GW9662干预组(G组)和吡格列酮(Pioglitazone)干预组(P组)。其中GW9662干预组(G组)根据GW9662干预终浓度分为4个亚组:G(0.1):0.1μmol/Lol/L,G(1):1μmol/L,G(5)5μmol/L,G(10):10μmol/L。吡格列酮干预组(P组):根据吡格列酮干预终浓度分为4个亚组:P(0.1):0.1μmol/L,P(1):1μmol/L,P(5)5μmol/L,P(10):10μmol/L。首先应用MTT法观察各组细胞活力,应用倒置显微镜观察各组神经细胞形态,确定下一步实验的G组和P组的最终干预浓度。其次应用免疫荧光双标染色、流式细胞仪观察各组神经细胞计数、凋亡细胞比率的变化,明确PPARγ通路增强对长程培养原代神经细胞凋亡的保护作用。最后应用免疫化学法观察各组细胞抗氧化能力的变化,探讨PPARγ通路增强保护原代神经细胞的机制。结果随着GW9662干预浓度的增加,细胞活力进行性下降,其中G(1)、G(5)和G(10)组细胞活力均较C组显著降低(P神经细胞形态尚完整,部分突触交织成网,最终确定后续实验G组的GW9662干预浓度为1μmol/L。加用吡格列酮干预后细胞活力较C组提高,其中P(1)、P(5)和P(10)组细胞活力较C组显著提高,差异具有统计学意义(P0.05),最终确定后续实验P组的吡格列酮干预浓度为1μmol/L。G组细胞总数及神经细胞计数均较C组显著下降(P细胞总数及神经细胞计数均高于C组(P神经细胞比率均维持在80%左右,差异无统计学意义(P>0.05)。G组凋亡细胞比率明显高于C组(P细胞比率显著低于C组(P原代神经细胞的保护性通路,该通路的激活可以增强细胞抗氧化能力减少细胞凋亡保护长程培养原代神经细胞,提示针对PPARγ通路进行的药物干预有可能是临床抗神经系统衰老治疗的有效途径之一。

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体原代神经细胞凋亡抗氧化

葛根素对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用

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中国药理学通报 2006年第5期22卷 607-611页

作者：陈立敏吕秋军温利青陈媛媛陈振花谢洁琼张敏曹颖林军事医学科学院放射和辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850 沈阳药科大学辽宁沈阳110016

目的从膜脂流动性等观察葛根素对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用。方法建立大鼠原代神经细胞谷氨酸损伤模型,以1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)为探针,用荧光偏振法测定荧光偏振度(P)值和微粘度(η),研究细胞膜脂流动性的改变;... 详细信息

目的从膜脂流动性等观察葛根素对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用。方法建立大鼠原代神经细胞谷氨酸损伤模型,以1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)为探针,用荧光偏振法测定荧光偏振度(P)值和微粘度(η),研究细胞膜脂流动性的改变;MTT(四甲基偶氮唑盐)法、培养介质乳酸脱氢酶(LDH)活力测定观察葛根素的保护作用。结果葛根素组荧光偏振度和微粘度低于谷氨酸损伤组,与尼莫地平作用相当,且呈现剂量依赖关系。葛根素组原代神经细胞LDH的释放减少,吸光度增加,但葛根素对正常细胞增殖无影响。结论葛根素对谷氨酸所致的大鼠原代神经细胞损伤具有保护作用,其保护作用可能与葛根素改善神经细胞膜脂流动性有关。

关键词：葛根素原代神经细胞膜脂流动性荧光偏振度 DPH

枳壳醇提物及其单体对小鼠原代神经细胞增殖作用的影响

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黑龙江畜牧兽医 2016年第5期 194-196,287,288页

作者：罗小泉伍庆华郭权罗涛李中炼杨武亮江西中医药大学南昌330006

为了探讨枳壳醇提有效部位及其所含部分单体成分对小鼠原代神经细胞增殖作用的影响,试验采用四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞活力的方法,比较了枳壳醇提有效部位及其所含的川陈皮素、红橘素、伞形酮和葡萄内酯对小鼠原代神经细胞增殖作用... 详细信息

为了探讨枳壳醇提有效部位及其所含部分单体成分对小鼠原代神经细胞增殖作用的影响,试验采用四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞活力的方法,比较了枳壳醇提有效部位及其所含的川陈皮素、红橘素、伞形酮和葡萄内酯对小鼠原代神经细胞增殖作用的影响。结果表明:红橘素和伞形酮在试验浓度下对小鼠原代细胞增殖作用无显著影响;枳壳醇提有效部位(浸膏)、川陈皮素和葡萄内酯在试验浓度下对小鼠原代细胞生长有显著影响。说明枳壳醇提有效部位、葡萄内酯和川陈皮素对神经细胞生长有保护作用。

关键词：枳壳醇提物川陈皮素红橘素葡萄内酯伞形酮原代神经细胞增殖作用

狂犬病病毒SRV9株在小鼠原代神经细胞中的形态发生学研究

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狂犬病病毒SRV9株在小鼠原代神经细胞中的形态发生学研究

作者：胡乐鹏吉林农业大学

学位级别：硕士

为更好的了解狂犬病病毒（Rabies virus, RV）在小鼠原代神经细胞内的复制、增殖等感染特性,以及狂犬病病毒感染小鼠原代神经细胞时的形态发生学,本研究对分离培养的原代小鼠脑神经细胞进行了狂犬病病毒SRV9毒株的感染,利用直接免疫荧... 详细信息

为更好的了解狂犬病病毒（Rabies virus, RV）在小鼠原代神经细胞内的复制、增殖等感染特性,以及狂犬病病毒感染小鼠原代神经细胞时的形态发生学,本研究对分离培养的原代小鼠脑神经细胞进行了狂犬病病毒SRV9毒株的感染,利用直接免疫荧光、免疫组织化学、透射电子显微镜和激光共聚焦显微镜等手段观察RV感染导致的在神经细胞内的形态发生学变化。该研究结果表明,可使用小鼠原代培养脑神经细胞作为狂犬病病毒在体外感染的细胞模型提供试验依据。试验首先采用胰酶消化法将小鼠脑组织制成单细胞悬液,用含10%马血清的DMEM培养小鼠原代脑神经细胞并对分离的原代脑神经细胞进行形态学观察。感染RVSRV9毒株,进而利用直接免疫荧光、免疫组织化学法检测病毒对原代神经细胞的感染性。在此基础上,将RV SRV9株按100TCID50接种培养至原代神经细胞,分别取感染后第3天、第4天、第5天的细胞,利用直接免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术检测病毒及其在细胞内生长增殖状态。同样条件下,制备感染RV的原代神经细胞的超薄切片,在透射电子显微镜下观察病毒在神经细胞内的形态发生。结果表明：小鼠脑神经细胞可在体外培养,分化成多极神经细胞,并与其他相邻神经细胞之间形成网络。小鼠脑神经细胞原代培养至第5天时,神经突起之间的突触连接发育逐渐完成。原代神经细胞培养至第6～12天时细胞状态最佳,并可在体外培养25～35天,随着时间的延长,神经细胞逐渐发生退变并死亡。按100TCID50对神经细胞接种RV SRV9株,直接免疫荧光、免疫组织化学试验表明狂犬病病毒SRV9株可感染原代神经细胞,在感染神经细胞后第2天可检测到病毒抗原。随着感染时间的延续,阳性感染细胞不断增加,至第5～7天达到增殖高峰。同样的条件下,直接免疫荧光、激光共聚焦显微镜定位检测感染3～5天的原代神经细胞内的RV,结果显示病毒抗原定位分布在神经细胞胞体的胞浆、突起中,细胞核中未见病毒粒子。超薄切片经透射电子显微镜观察,结果表明病毒感染细胞后,在细胞质中复制,合成蛋白,然后向空泡膜或细胞膜出芽获得囊膜,待细胞破碎,病毒释放出来或直接从细胞膜出芽离开细胞。研究结论：可在特定条件下分离培养小鼠原代脑神经细胞;狂犬病病毒SRV9株可感染小鼠原代脑神经细胞,并在原代神经细胞中复制。因此,可利用小鼠原代脑神经细胞作为RV在体外感染的细胞模型,为狂犬病病毒致病机制的研究奠定基础。

关键词：狂犬病病毒原代神经细胞形态发生

自噬在原代神经细胞中对腺病毒介导表达的Htt-552aa片段代谢的影响

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自噬在原代神经细胞中对腺病毒介导表达的Htt-552aa片段代谢的影响

作者：董雁苏州大学

学位级别：硕士

目的:在原代神经细胞中观察自噬对腺病毒介导表达的Htt-552aa片段代谢的影响,以及不同日龄原代神经细胞中自噬水平的改变及其对Htt代谢的影响。方法:用携带Htt-552aa片段的腺病毒载体感染小鼠大脑皮层原代神经细胞建立亨廷顿舞蹈病细胞... 详细信息

目的:在原代神经细胞中观察自噬对腺病毒介导表达的Htt-552aa片段代谢的影响,以及不同日龄原代神经细胞中自噬水平的改变及其对Htt代谢的影响。方法:用携带Htt-552aa片段的腺病毒载体感染小鼠大脑皮层原代神经细胞建立亨廷顿舞蹈病细胞模型,采用Western blot法和免疫组化法检测3-MA与雷帕霉素对原代神经细胞Beclin1和LC3表达水平及其对Htt代谢水平的影响;免疫组化观察表达htt的模型神经细胞Beclin1、LC3、Cathepsin B、Cathepsin L水平及分布的变化;以Western blot法观察不同日龄神经细胞自噬水平的改变及其对htt代谢的影响。结果:1.腺病毒介导的野生型htt-552aa (htt-552aa)和突变htt-552aa (mhtt-552aa)在原代神经细胞能成功表达,有聚集体形成。2.自噬抑制剂3-MA能抑制自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平,增加Htt在胞内蓄积;自噬激活剂雷帕霉素增强自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平,减少胞内Htt蓄积。3.在Htt-552aa表达的神经细胞中,自噬/溶酶体系统相关蛋白表达发生改变:htt-552aa和mhtt-552aa都使得Beclin1与LC3分布有改变。htt-552aa明显改变了cathepsin B的分布,但mhtt-552aa似乎抑制了cathepsin B的表达。cathepsin L的表达水平在htt-552aa表达的神经细胞中高于mhtt-552aa表达的神经细胞。提示mhtt-552aa可能抑制了溶酶体酶的表达。4.随日龄的不同,自噬先增强,在第7天达到峰值,之后降低;7日龄神经细胞内Htt水平低于13日龄神经细胞Htt水平。结论:1.与PC12细胞不同,htt-552aa能在原代神经细胞中形成聚合体,mhtt-552aa尤其明显。聚集体主要出现在突起末端。2.自噬可能是Htt代谢的主要方式之一。***蛋白抑制了溶酶体酶的表达。4.自噬水平较高日龄的原代神经细胞较自身自噬水平较低的神经细胞对htt代谢能力较强,说明神经细胞对htt代谢的能力与细胞自身自噬水平相关。进一步证明了自噬可能是Htt代谢的主要方式之一。

关键词：亨廷顿舞蹈病原代神经细胞 Htt 自噬蛋白代谢

川芎嗪对原代神经细胞缺血再灌注后核因子-κB表达的影响及其意义

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疑难病杂志 2007年第11期6卷 644-645页

作者：秦爱菊狄政莉田晔李安泰张格娟王勇陕西省西安市中心医院神经内科 710003

目的观察川芎嗪对神经细胞缺血再灌注后核因子κB(NF-κB)表达的影响及其意义。方法制备大鼠原代神经细胞,而后随机分为3组:未缺血组、缺血再灌注组(经类缺血处理后再复氧30min)和治疗组(类缺血处理后加入川芎嗪预治疗10min)。用流式细... 详细信息

目的观察川芎嗪对神经细胞缺血再灌注后核因子κB(NF-κB)表达的影响及其意义。方法制备大鼠原代神经细胞,而后随机分为3组:未缺血组、缺血再灌注组(经类缺血处理后再复氧30min)和治疗组(类缺血处理后加入川芎嗪预治疗10min)。用流式细胞仪检测NF-κB的表达并进行比较。结果缺血再灌注组和川芎嗪治疗组NF-κB的表达分别为(58.07±11.83)%和(30.29±7.58)%。2组比较差异有统计学意义(P原代神经细胞缺血再灌注后NF-κB具有显著的抑制作用。

关键词：川芎嗪原代神经细胞缺血再灌注核因子-κB 大鼠

极低频脉冲电场刺激对原代培养神经细胞的生化和生理功能的影响

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极低频脉冲电场刺激对原代培养神经细胞的生化和生理功能的影响

作者：朱华清华东师范大学

学位级别：硕士

极低频电磁场(Extremely Low Frequency Electromagnetic Field简称ELF EMF)是指0—300Hz的电磁场，按其波长和能量范围，属于非电离辐射。自从1831年法拉第发现电磁感应至今，人工电磁环境已大大超过自然电磁环境，家用电器(如计算机... 详细信息

极低频电磁场(Extremely Low Frequency Electromagnetic Field简称ELF EMF)是指0—300Hz的电磁场，按其波长和能量范围，属于非电离辐射。自从1831年法拉第发现电磁感应至今，人工电磁环境已大大超过自然电磁环境，家用电器(如计算机显示器、电视机、电热毯、微波炉等)及日常生活接触的工频电磁场(50Hz或60Hz电力传输线或电力设施如配电所、点灯、电线、高压输电线路等)是ELF EMF的来源之一。ELF EMF是否对人类健康有不良影响?这已成为当今生物电磁学的研究热点。神经组织具有高度的电兴奋性，因此它对于极低频电磁场的作用是最灵敏的。EMF能改变神经的可激发性，使神经化学物质发生改变，激素分泌发生改变和对EMF场响应行为发生改变。研究还发现50Hz电磁场可加剧脑组织的脂质过氧化，表明组织的氧化和抗氧化平衡失调，低频电磁场还影响机体内神经内分泌和神经递质的功能，影响自由基代谢等生化反应。可见，进一步研究电磁场对人神经系统的生物效应机制具有重要意义。本论文以体外原代培养和大鼠胚胎神经为材料，分别通过噻唑蓝(MTT)比色分析法、酶活性测定法、倒置相差显微镜观察法和高效液相色谱分离法等技术，研究脉冲电场(脉冲频率f=50Hz，脉宽t=20μs，培养液中场强峰值Epp=1V／cm)对细胞存活、抗氧化能力、神经细胞形态、神经递质分泌的影响。一极低频脉冲电场对细胞存活和抗氧化能力的影响 (一) 极低频脉冲电场对神经细胞存活率的影响采用MTT比色分析法，研究了极低频脉冲电场对原代培养神经细胞存活率的影响。结果发现短时间(t=5min)脉冲电场作用促进神经细胞的体外存活，在脉冲电场对细胞直接处理方式中，促进率达12.3％，作用极显著(p＜0.001)：华东师范大学2004届硕士学位论文长时间(t)10min)脉冲电场作用呈现为抑制细胞存活的趋势，在间接作用培养基和共作用于培养基和神经细胞的处理方式中，抑制作用极为显著，抑制率达10一20%(P神经细胞的存活起着促进和抑制的双向调节作用，这种调节作用与电场处理时间有关;二、脉冲电场对细胞存活的作用，存在着直接作用和间接作用两种机制，是直接作用和间接作用的综合表现。(二)极低频脉冲电场对神经细胞抗氧化能力的影响采用试剂盒生化检测的方法，研究极低频脉冲对神经细胞内MDA含量、SOD含量、NO含量的影响。结果表明，短时间(t=smin)脉冲电场作用可以增加细胞的抗氧化能力，表现为胞内SOD活性增强，NO含量增加，MDA含量降低，t检测作用明显(p细胞的抗氧化能力，表现为SOD活性、NO含量受到明显的抑制作用，SOD活性抑制率达18.38%(p细胞。二极低频脉冲电场对神经细胞生理功能的影响 (一)极低频脉冲电场对神经细胞形态的影响原代培养神经细胞，利用倒置相差显微镜，研究极低频脉冲电场对神经细胞形态的影响。结果发现，短时间(t二smin)脉冲电场作用，有利于神经的生长，表现为细胞胞体丰满，折光性好，集落明显，集落间突触的联系丰富，游离细胞较少。电场处理10分钟时，细胞形态与正常组细胞差异不明显，而电场处理15、30分钟时，细胞生长明显的受到了抑制，表现在集落间界限不明显，集落联系变少，突触有断裂回缩的现象，胞体的折光性变差，集落间游离的细胞增多。结果提示，脉冲电场影响神经细胞的生长分化，并表现出“窗”特性，即“频率窗”、“功率窗”和“时间窗”，即对频率、功率和时间的选择性。(二)极低频脉冲电场

关键词：极低频脉冲电场原代神经细胞细胞存活抗氧化能力神经递质细胞形态高效液相色谱

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风疹病毒在原代兔脑神经细胞中的增殖

预防医学论坛 1996年第3期10卷 257-258页

作者：王志玉姚苹宋艳艳王桂亭许洪芝王芃山东医科大学 250012 山东省医学科学院

利用原代兔脑神经细胞培养、免疫荧光技术等对风疹病毒（RV）济南地方株JR23和标准野毒株Gos—10的增殖特点、抗原定位、致病性等进行了研究。结果表明,两株RV均能在神经细胞培养上增殖,但滴度不高,最高滴度为103TCID50/ml,二者生长曲... 详细信息

利用原代兔脑神经细胞培养、免疫荧光技术等对风疹病毒（RV）济南地方株JR23和标准野毒株Gos—10的增殖特点、抗原定位、致病性等进行了研究。结果表明,两株RV均能在神经细胞培养上增殖,但滴度不高,最高滴度为103TCID50/ml,二者生长曲线无差异。用间接免疫荧光法进行动态观察表明,两株RV均在感染12h后于细胞浆中出现荧光,144h时强度达到最高峰。荧光主要分布于细胞浆,以核周围最为明显。胶质细胞中的荧光强度比神经元中的强,感染范围也较大。神经元中病毒抗原主要分布于胞浆的核周围,树突和轴突均未见明显的荧光。两株病毒均未引起神经细胞出现明显的细胞病变。

关键词：风疹病毒原代神经细胞增殖致病性荧光技术

神经生长因子及其受体在原代培养神经上皮细胞中的生物学作用研究

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神经解剖学杂志 1999年第1期15卷 36-40页

作者：郝晶高英茂管英俊刘凯山东医科大学组织学与胚胎学教研室济南250012

本实验利用神经细胞培养技术，用加入NGF的正调法和加入NGF抗体、NGF受体抗体的负调法、观察了NGF及其受体在胚胎神经细胞发育和存活中的作用。结果显示：NGF可明显促进神经细胞突起生长和细胞存活．加入NGF抗体和NGF受体抗体则引起神... 详细信息

本实验利用神经细胞培养技术，用加入NGF的正调法和加入NGF抗体、NGF受体抗体的负调法、观察了NGF及其受体在胚胎神经细胞发育和存活中的作用。结果显示：NGF可明显促进神经细胞突起生长和细胞存活．加入NGF抗体和NGF受体抗体则引起神经细胞死亡。在培养的第***受体开始表达．7d后达到高峰，而后逐渐减少，结果表明：NGF及其受体在胚胎神经细胞发育中有着非常重要的作用。

关键词：神经生长因子受体原代神经细胞培养免疫组化