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基于ISSR-PCR体系鉴别樟芝单核体交配型

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中国食用菌 2024年第2期43卷 68-75页

作者：李晓晖盖舒萍汪雯翰琚建伟张守兵丁保安李燕贾薇上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所/农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室/国家食用菌工程技术研究中心/国家食用菌加工技术研发分中心上海201403 上海彤颜实业有限公司上海201417 上海国森生物科技有限公司上海201403

通过原生质体单核化技术获得樟芝单核体,基于内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列进行鉴定,采用14个引物对简单重复序列区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)进行多态性扩增,筛选条带清晰、重复性好的引物用于樟芝... 详细信息

通过原生质体单核化技术获得樟芝单核体,基于内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列进行鉴定,采用14个引物对简单重复序列区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)进行多态性扩增,筛选条带清晰、重复性好的引物用于樟芝单核体的交配型鉴定。结果表明,通过原生质体单核化技术获得31个樟芝单核体,经ITS序列分析确定获得的单核体为樟芝。以单核体S2、S10、S14、S27的DNA为模板,对14条ISSR引物进行初步筛选,得到4个条带清晰、重复性好的引物P7、P9、P21、P25用于交配型鉴定。单核体S9和S25为同一交配型,两者与S2为不同交配型,通过镜检进一步验证S9、S25可以与S2形成具有锁状联合的双核菌株。该方法可明显缩短樟芝单核体交配型的鉴定时间。

关键词：樟芝单核体交配型 ISSR ITS

木屑马铃薯培养基促进香菇单核体菌丝体生长的表达谱分析

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菌物学报 2023年第2期42卷 507-519页

作者：侯娣周陈力李燕杨瑞恒鲍大鹏上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所、农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室、国家食用菌工程技术研究中心、上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

香菇单核体菌株在传统PDA培养基上生长时具有生长缓慢、容易老化等问题,本研究以1株香菇双核体Y0040以及相对应的2株单核体(Y0040-1和Y0040-3)为研究材料,通过添加不同比例木屑粉的PDA培养基筛选适合香菇单核体生长的配比,结果表明添加... 详细信息

香菇单核体菌株在传统PDA培养基上生长时具有生长缓慢、容易老化等问题,本研究以1株香菇双核体Y0040以及相对应的2株单核体(Y0040-1和Y0040-3)为研究材料,通过添加不同比例木屑粉的PDA培养基筛选适合香菇单核体生长的配比,结果表明添加木屑能够显著促进单核体菌丝的生长,最适添加比例为2%。将Y0040-1和Y0040-3在PDA和2%木屑PDA上培养后进行转录组表达谱差异分析,结果显示Y0040-1和Y0040-3两个单核菌株在木屑-PDA培养基上生长有1066个共有的差异表达基因,进一步对其注释发现,这些差异基因在细胞结构合成以及碳水化合物代谢等途径上得到富集。同时1066个共有的差异基因中有113个共上调,富集于氧化还原反应,267个共下调主要富集于蛋白质折叠和去折叠等途径。进一步对1066个差异基因进行CAZYmes家族和木质纤维素酶分析,发现有36个家族基因差异表达,包括了4个多铜氧化酶、6个β-葡萄糖苷酶和2个内β-1,4-葡聚糖酶,其中多铜氧化酶基因表达在木屑培养基上都显著上升。木质纤维素降解酶基于氧化还原反应等将木质素降解为菌丝体生长发育所必需的小分子单糖,可能是木屑PDA培养基促进菌丝生长的原因之一。

关键词：香菇单核体培养基优化 CAZYmes家族木质纤维素酶

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平菇单核体与双核体差异的RAPD分析

福建农业学报 2022年第5期37卷 648-653页

作者：张朝辉王勋陈天航梅会元韩盼盼刘天翔王振河邱立友河南农业大学生命科学学院/农业农村部农业微生物酶工程重点实验室河南郑州450002 河南科技学院生命科技学院河南新乡453003

【目的】探究平菇单双核菌丝体间的差异,为平菇品种培育提供技术理论基础。【方法】从平菇TD300的担孢子中分离得到两个单核菌株MK13和MK3,通过交配得到优良双核菌株DK300,进行平板试验和出菇试验,测定4个菌株的菌丝生长状况和出菇产量... 详细信息

【目的】探究平菇单双核菌丝体间的差异,为平菇品种培育提供技术理论基础。【方法】从平菇TD300的担孢子中分离得到两个单核菌株MK13和MK3,通过交配得到优良双核菌株DK300,进行平板试验和出菇试验,测定4个菌株的菌丝生长状况和出菇产量,再利用随机扩增多态性DNA(Randomly Amplified Polymorphic DNA,RAPD)标记技术检测4个菌株之间的遗传差异性。【结果】DK300与亲本TD300在菌丝生长状况和产量上没有显著性差异,但MK13、MK3和交配所得的DK300与亲本TD300间存在较大的遗传差异性,而MK13、MK3和DK300间遗传差异性较小,尤其是MK3和DK300间遗传差异性最小。【结论】经过减数分裂形成担孢子时可能发生有基因重组,而通过两个单核菌株交配得到双核菌株过程则较少发生基因重组。

关键词：平菇单核体双核体产量遗传差异性

不同品种大球盖菇原生质体单核化及单核体的特性

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上海农业学报 2023年第2期39卷 33-37页

作者：周峰杨焕玲赵妍姜淑霞陈明杰李正鹏查磊李玉上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 上海国森生物科技有限公司上海201403 山东农业大学植物保护学院泰安271018

大球盖菇是我国近年来广泛栽培的一种食用菌,具有较高的食用价值和经济价值。为了获得大球盖菇原生质体单核体,主要进行了不同品种大球盖菇原生质体制备及单核化试验,用血球计数板计数原生质体总数,挑取再生原生质体的单个菌落,25℃倒... 详细信息

大球盖菇是我国近年来广泛栽培的一种食用菌,具有较高的食用价值和经济价值。为了获得大球盖菇原生质体单核体,主要进行了不同品种大球盖菇原生质体制备及单核化试验,用血球计数板计数原生质体总数,挑取再生原生质体的单个菌落,25℃倒置黑暗恒温培养,倒置显微镜观察菌丝锁状联合情况,筛选获得大球盖菇单核体。结果表明:大球盖菇原生质体再生率均较高,‘土肥’品种再生率最高,达1.37%,‘高邮’品种再生率次之为1.13%,‘大T’品种的再生率最低为0.90%;单核化率‘大T’品种高达85.2%,‘土肥’的单核化率次之为66.0%,‘高邮’的单核化率最低为59.8%。对不同大球盖菇品种的单核体表观形态特性进行观察分析表明:利用大球盖菇原生质体技术选育新品种提供单核体,可丰富食用菌原生质体单核体资源,为研究遗传及育种提供材料。

关键词：大球盖菇原生质体再生原生质体单核化单核体

胶质射脉革菌(Phlebia tremellosa)单核菌株的制备与单核体筛选

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基因组学与应用生物学 2021年第2期40卷 656-662页

作者：郭洋贾晨波张彦雄苏建宇徐春燕宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

为获得胶质射脉革菌(Phlebia tremellosa)BBEL0901的单核体,本研究首先考察了溶壁酶的浓度、菌龄、酶解时间、稳渗剂浓度等因素对原生质体产量的影响,进而采用正交试验优化影响原生质体制备的关键条件,最后基于细胞核染色的方法鉴定单... 详细信息

为获得胶质射脉革菌(Phlebia tremellosa)BBEL0901的单核体,本研究首先考察了溶壁酶的浓度、菌龄、酶解时间、稳渗剂浓度等因素对原生质体产量的影响,进而采用正交试验优化影响原生质体制备的关键条件,最后基于细胞核染色的方法鉴定单核菌株,基于ITS序列对单核体进行分子鉴定后采用二代测序技术对单核体的全基因组DNA进行检测。结果表明:采用马铃薯葡萄糖(PDB)加富培养基中静置培养4.5 d的菌丝,以0.65 mol/L氯化钠为稳渗剂,用5%的溶壁酶酶解3 h的原生质体产量最大;通过荧光染色和显微镜观察获得了三株单核菌株,对单核菌株M73的全基因组测序显示胶质射脉革菌的基因组为36.1 Mb,杂合度较低。本研究为胶质射脉革菌全基因组测序及基因功能的验证提供了可靠的实验材料。

关键词：胶质射脉革菌(Phlebia tremellosa) 原生质体单核体杂合度

基于等位基因InDel快速检测黑木耳原生质体单核体

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菌物学报 2014年第2期33卷 273-279页

作者：范秀芝周雁边银丙华中农业大学应用真菌研究所湖北武汉430070

以黑木耳Auricularia auricula‐judae栽培菌株Au916三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)两个等位基因中的InDel为基础,以原生质体再生菌株为研究材料,建立了基于InDel的黑木耳原生质体单核体检测技术,并采用荧光显微镜检和配对试验对此方法进行... 详细信息

以黑木耳Auricularia auricula‐judae栽培菌株Au916三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)两个等位基因中的InDel为基础,以原生质体再生菌株为研究材料,建立了基于InDel的黑木耳原生质体单核体检测技术,并采用荧光显微镜检和配对试验对此方法进行了验证。应用InDel能清晰地区分黑木耳双核体和两种原生质体单核体,且不同的单核体之间可以进行交配,其杂交双核体能正常出耳,结果表明基于等位基因InDel标记可以快速准确地检测黑木耳原生质体单核体。在大规模测序获得真菌基因组信息的基础上,InDel标记在原生质体单核体鉴定中的应用将更加普遍。

关键词：黑木耳等位基因 InDel 原生质体再生单核体 GAPDH 荧光显微镜检

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香菇原生质体单核体杂交方法试验

中国食用菌 2002年第6期21卷 8-10页

作者：焦海涛杨先新周伟王群张顺凯罗信昌宜昌森源食用菌有限责任公司湖北远安444200 华中农业大学植保系应用真菌室湖北武汉430070

本试验通过三种方法收集菌丝体 ,经原生质体制备与再生后得到其单核体。

关键词：香菇原生质体单核体杂交育种

真姬菇SIEF3136菌株单核体RAPD多态性分析

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安徽农业科学 2010年第6期38卷 2820-2823页

作者：许占伍陈辉冯志勇陈明杰鲍大鹏汪虹南京农业大学生命科学院江苏南京210095 上海市农业科学院食用菌研究所上海市食用菌工程技术研究中心农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201106

[目的]探讨真姬菇单核体间RAPD标记多态性,为育种材料的选择提供一定的分子水平依据。[方法]以真姬菇(Hypsizygus marmoreus)工厂化栽培白色菌株SIEF3136的原生质体单核体和不同孢子单核体为材料,进行RAPD分析。[结果]筛选到38条多态性... 详细信息

[目的]探讨真姬菇单核体间RAPD标记多态性,为育种材料的选择提供一定的分子水平依据。[方法]以真姬菇(Hypsizygus marmoreus)工厂化栽培白色菌株SIEF3136的原生质体单核体和不同孢子单核体为材料,进行RAPD分析。[结果]筛选到38条多态性引物,共扩增341条条带,其中253条表现多态性,多态率为74.2%。31个菌株的相似系数为0.34～0.90。除单核体S18-16,同一交配型的单核体间的相似系数都在0.60以上,表现出较高的相似性。在大约0.61的相似水平上,所有菌株分为2组。PM-01与T1、T3聚为第1大类,PM-02与T2、T4聚为第2大类。另外,在不到0.62的水平上S18-16聚为第3大类,显示出极大的差异,这很可能是该单核发生突变所致。[结论]真姬菇子实体上担子在减数分裂中染色体交换很高,RAPD标记可以用于真姬菇单核多态性研究,并可为交配型鉴定提供参考。

关键词：真姬菇单核体 RAPD分析交配型

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糙皮侧耳单核体和双核体同工酶谱的比较

河南农业大学学报 2013年第3期47卷 325-329页

作者：张明月刘冬忍张大飞柴冉田芳许苗苗邱立友河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室河南郑州450002

从糙皮侧耳天达300的担孢子中分离得到10株单核体,通过交配试验对这些单核体的交配型进行了鉴定,并得到9株双核体.随机选取4个双核体以及其亲本单核体进行同工酶分析,双核菌丝4×3培养液上清中过氧化物酶同工酶谱带中有2条是其亲本单核... 详细信息

从糙皮侧耳天达300的担孢子中分离得到10株单核体,通过交配试验对这些单核体的交配型进行了鉴定,并得到9株双核体.随机选取4个双核体以及其亲本单核体进行同工酶分析,双核菌丝4×3培养液上清中过氧化物酶同工酶谱带中有2条是其亲本单核体所没有的.在固体培养物中有些双核体的过氧化物酶、NADH脱氢酶和NADPH脱氢酶谱带数少于其亲本单核体,有些双核体的该3种同工酶谱带强度与亲本单核体相同Rf值的不同.结果表明,糙皮侧耳双核体及其亲本单核体的同工酶谱有明显的差异,等位基因在双核体和单核体中有着不同的表达模式.

关键词：单核体双核体同工酶糙皮侧耳