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大鼠动粒蛋白rMis12基因的克隆和表达

江苏农业学报 2009年第4期25卷 807-813页

作者：柴连琴文祯中宋敏河南大学生命科学学院河南开封453002 平顶山学院河南平顶山467000

利用抑制性消减杂交所获得的rMis12表达序列标签(EST),采用快速扩增cDNA末端(RACE)技术,从大鼠肝脏中克隆到rMis12基因。通过原核重组表达后制备多克隆抗体,并用基因芯片和Western blot方法分别检测rMis12RNA和蛋白质水平上的表达变化... 详细信息

利用抑制性消减杂交所获得的rMis12表达序列标签(EST),采用快速扩增cDNA末端(RACE)技术,从大鼠肝脏中克隆到rMis12基因。通过原核重组表达后制备多克隆抗体,并用基因芯片和Western blot方法分别检测rMis12RNA和蛋白质水平上的表达变化。成功克隆到rMis12基因,其cDNA全长2604 bp,编码206个氨基酸,生物信息学分析结果显示该基因存在2个保守的磷酸化位点,与小鼠rMis12基因进化关系最近。基因芯片和Western blot检测结果表明,rMis12在正常大鼠肝脏中表达水平持续较低,在2/3肝切除24 h过程中rMis12出现上调表达。

关键词： rMis12 动粒蛋白肝再生

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涡鞭毛虫（甲藻）着丝粒／动粒蛋白的检查

Zoological Research 1996年第3期17卷 307-313页

作者：吴传芬李靖炎代嘉陵王永潮北京师范大学生物系中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放研究实验室

利用ＡＣＡ血清、抗人着丝粒蛋白Ｂ的单抗和多抗、抗ＣＨＯ细胞动粒蛋白的单抗，对典型涡鞭毛虫隐沟虫（隐甲藻）（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍｃｏｈｎｉｉ）和特殊涡鞭毛虫尖尾虫（尖尾藻）（Ｏｘｙｒｒｈｉｓｍａｒｉｎａ）的着... 详细信息

利用ＡＣＡ血清、抗人着丝粒蛋白Ｂ的单抗和多抗、抗ＣＨＯ细胞动粒蛋白的单抗，对典型涡鞭毛虫隐沟虫（隐甲藻）（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍｃｏｈｎｉｉ）和特殊涡鞭毛虫尖尾虫（尖尾藻）（Ｏｘｙｒｒｈｉｓｍａｒｉｎａ）的着丝粒／动粒蛋白进行了检查。用ＡＣＡ血清作的荧光观察表明，隐沟虫的这些蛋白虽结合在核骨架上，但在间期时并不形成点状的前着丝粒。免疫印迹检查表明两种涡鞭毛虫的着丝粒蛋白Ｂ彼此一致，而且与四膜虫和眼虫的也高度一致。但用ＡＣＡ血清作免疫印迹检查时，尖尾虫的蛋白虽与四膜虫和眼虫的相近，与隐沟虫的却有极大的差异。以抗动粒蛋白的单抗作此种检查时，尖尾虫与眼虫的反应带相同，而隐沟虫则与源真核生物（Ａｒｃｈｅｚｏａ）贾第虫（Ｇｉａｒｄｉａｌａｍｂｌｉａ）的相同；而且隐沟虫和贾第虫都与几种原细菌有两条相同的反应带，其中５０ｋＤ的一条是尖尾虫和眼虫都没有的。上述发现不仅从一个新的方面支持了认为应把尖尾虫从典型涡鞭毛虫分出来独立为一个门的主张（李靖炎，１９９０），而且指出典型涡鞭毛虫在后真核生物（Ｍｅｔａｋａｒｙｏｔａ）中间是非常原始的。

关键词：涡鞭毛虫着丝粒动粒蛋白

源真核生物贾第虫与原细菌着丝粒／动粒蛋白的免疫印迹检查

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Zoological Research 1996年第3期17卷 323-330页

作者：吴传芬李靖炎代嘉陵卢思奇王永潮北京师范大学生物系中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放研究实验室首都医科大学寄生虫学教研室美国Texas大学

以抗人着丝粒蛋白Ｂ的单抗和多抗以及抗ＣＨＯ细胞动粒蛋白的单抗对源真核生物（ａｒｃｈｅｚｏａ）蓝氏贾第虫（Ｇｉａｒｄｉａｌａｍｂｌｉａ）和分别代表原细菌的３个枝的３种原细菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌ... 详细信息

以抗人着丝粒蛋白Ｂ的单抗和多抗以及抗ＣＨＯ细胞动粒蛋白的单抗对源真核生物（ａｒｃｈｅｚｏａ）蓝氏贾第虫（Ｇｉａｒｄｉａｌａｍｂｌｉａ）和分别代表原细菌的３个枝的３种原细菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ、Ｓｕｌｆｏｓｐｈａｅｒｅｌｌｕｓ）作了免疫电泳检查，并以小眼虫和大肠杆菌作为对照。结果表明，３种原细菌都呈阳性反应；而且贾第虫的反应情况显然比纤毛虫、眼虫、典型涡鞭毛虫、尖尾虫（Ｏｘｙｒｒｈｉｓ）等单细胞后真核生物的更接近于原细菌的情况。这不仅从一个新的方面为真核细胞起源于古代的原细菌的学说提供了新的佐证，而且从着丝粒／动粒蛋白方面证明了源真核生物贾第虫的原始性。本工作还为认识着丝粒蛋白Ｂ和动粒蛋白的起源和演化提供了线索。

关键词：贾第虫原细菌着丝粒动粒蛋白免疫印迹

HL－60细胞分化对动粒蛋白及其基因表达的影响

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北京师范大学学报（自然科学版） 1995年第4期31卷 520-526页

作者：孙红王永潮北京师范大学细胞增殖与调控生物学开放实验室

以人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０为实验材料，用终浓度１μｍｏｌ·Ｌ－１甲酸（ＲＡ）和二甲亚砜（ＤＭＳＯ）分别连续处理细胞６ｄ后，可使ＨＬ－６０细胞按粒系途径定向成熟分化，即表现出核分叶，具有ＮＢＴ还原能力的正常粒细胞的... 详细信息

以人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０为实验材料，用终浓度１μｍｏｌ·Ｌ－１甲酸（ＲＡ）和二甲亚砜（ＤＭＳＯ）分别连续处理细胞６ｄ后，可使ＨＬ－６０细胞按粒系途径定向成熟分化，即表现出核分叶，具有ＮＢＴ还原能力的正常粒细胞的形态和功能特征。利用ＡＣＡ间接免疫荧光方法，观察到在终未分化的细胞核中荧光斑点强度要明显弱于对照细胞。用ＲＮＡＮｏｒｔｈｅｒｎ和斑点杂交方法研究发现，在ＨＬ－６０细胞诱导分化过程中，Ｉｄ，ＣｙｃｌｉｎＢ１基因表达很快受到明显抑制，在终末分化的细胞中已基本被关闭；ＣＥＮＰ－Ｂ基因表达水平也明显降低，但表达变化过程与Ｉｄ和ＣｙｃｌｉｎＢ１基因有所差异。

关键词：细胞分化动粒蛋白基因表达白血病 HL-60细胞

GFP结合蛋白（GBP）干扰带有GFP标签的动粒蛋白功能的研究

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GFP结合蛋白（GBP）干扰带有GFP标签的动粒蛋白功能的研究

作者：邓大杰厦门大学

学位级别：硕士

在真核细胞中,动粒复合物是一个庞大且保守的多亚基蛋白复合体,它在细胞分裂过程中,对于微管牵拉姐妹染色单体、确保染色体的正确均等分配、维持基因组的稳定性发挥着重要作用。由于动粒复合体亚基的编码基因大多为必需基因,传统的研究... 详细信息

在真核细胞中,动粒复合物是一个庞大且保守的多亚基蛋白复合体,它在细胞分裂过程中,对于微管牵拉姐妹染色单体、确保染色体的正确均等分配、维持基因组的稳定性发挥着重要作用。由于动粒复合体亚基的编码基因大多为必需基因,传统的研究中多采用温度敏感突变体来进行表型和相关基因的功能分析。单结构域的美洲驼抗体可以高亲和性地特异结合GFP及GFP衍生物,因而被称为nanobody 或者 GBP(GFP-binding protein)。本研究使用裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)这种模式生物,将GBP-mCheny作为一种干扰GFP标记的部分动粒蛋白功能的工具。研究结果表明,不同分子量大小的GBP-mCherry融合蛋白均可以实现与GFP标记的动粒蛋白的共定位,并且与GBP-mCherry融合蛋白结合的GFP标记的动粒蛋白的菌株,在低温、高温和微管解聚药物存在时,均表现出一定程度的生长缺陷以及较高比例的染色体错误分离。此外,增加GBP-mCherry的拷贝数则会加强其干扰GFP标记的动粒蛋白功能的效应。我们的研究结果表明,研究者未来可以把这种方法作为快速靶向地构建裂殖酵母条件性突变体的一种策略。这种策略也可能可以拓展到其它模式生物中,用于便捷、高效地干扰特定必需基因的功能,进而更好地解析这些蛋白在参与特定生理过程中的具体功能。

关键词：裂殖酵母 GBP 动粒蛋白

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动粒蛋白与人外周血淋巴细胞增殖关系的研究

川北医学院学报 1999年第2期14卷 7-9页

作者：梁素华陈家诗杨小林川北医学院生物学研究室南充637000 四川师范学院

笔者以正常人外周血淋巴细胞为实验材料，加入２ μｇ／ｍｌ的ＰＨＡ刺激，用３Ｈ—ＴｄＲ标记，通过放射自显影，测定培养不同时间后进入细胞周期的淋巴细胞数量及Ｍ期的细胞数量，探讨细胞内动粒蛋白含量变化与淋巴细胞增殖的关系... 详细信息

笔者以正常人外周血淋巴细胞为实验材料，加入２ μｇ／ｍｌ的ＰＨＡ刺激，用３Ｈ—ＴｄＲ标记，通过放射自显影，测定培养不同时间后进入细胞周期的淋巴细胞数量及Ｍ期的细胞数量，探讨细胞内动粒蛋白含量变化与淋巴细胞增殖的关系。ＡＣＡ间接免疫荧光染色显示，正常未经转化的淋巴细胞和加ＰＨＡ刺激培养至４８ｈ的淋巴细胞内动粒荧光斑点小而微弱，加ＰＨＡ刺激培养５４～７２ｈ的淋巴细胞内动粒荧光斑点亮度逐渐增强，体积逐渐增大。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ表明，１７ＫＤ和５２ＫＤ两种动粒蛋白在对照组和培养不同时间的各组淋巴细胞内均存在，且含量保持相对稳定，８０ＫＤ和５６ＫＤ两种动粒蛋白在未经培养和培养至４８ｈ的淋巴细胞内不出现，８０ＫＤ蛋白在培养５４ｈ的细胞内可见。培养６０～７２ｈ，淋巴细胞内可被ＡＣＡ特异识别的动粒蛋白共四种：８０ＫＤ、５６ＫＤ、５２ＫＤ和１７ＫＤ。

关键词：动粒蛋白淋巴细胞增殖 ACA 间接免疫荧光

Taxol对人外周血淋巴细胞微核化和动粒蛋白含量的影响研究

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川北医学院学报 1998年第4期13卷 1-3页

作者：梁素华杨春蕾陈家诗川北医学院基础医学部四川师范学院

用正常人外周血淋巴细胞为实验材料，探讨１０ｕＭｔａｘｏｌ对淋巴细胞微核化、动粒蛋白含量及核仁结构的影响。结果表明，ｔａｘｏｌ可诱导淋巴细胞微核化，ｔａｘｏｌ诱导１８ｈ，微核化细胞占１２％，ｔａｘｏｌ诱导２４ｈ，微核化... 详细信息

用正常人外周血淋巴细胞为实验材料，探讨１０ｕＭｔａｘｏｌ对淋巴细胞微核化、动粒蛋白含量及核仁结构的影响。结果表明，ｔａｘｏｌ可诱导淋巴细胞微核化，ｔａｘｏｌ诱导１８ｈ，微核化细胞占１２％，ｔａｘｏｌ诱导２４ｈ，微核化细胞上升到３６％。ＡＣＡ间接免疫荧光显示，在对照细胞中动粒荧光斑点微弱、体积小，加ｔｚｘｏｌ处理的淋巴细胞，随ｔａｘｏｌ作用时间延长，细胞内动粒荧光斑点亮度逐渐增强，体积逐渐增大。ＡＮＡ染色显示，在对照细胞中核仁荧光斑点大而明亮，在ｔａｘｏｌ作用下。

关键词：淋巴细胞动粒蛋白微核化 Taxol 抗体

海带3个着丝粒蛋白编码序列的克隆及特征分析

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水产学报 2016年第7期40卷 1028-1038页

作者：徐梅周志刚上海海洋大学水产与生命学院

本研究根据海带基因组及糖海带转录组数据库中获得的编码着丝粒相关蛋白CENH3、Nuf2和Ndc80的contig序列设计特异性引物,利用PCR技术自海带中克隆得到它们的开放阅读框(ORF)序列,分别命名为Sj CENH3、Sj Nuf2和Sj Ndc80,大小分别为432、... 详细信息

本研究根据海带基因组及糖海带转录组数据库中获得的编码着丝粒相关蛋白CENH3、Nuf2和Ndc80的contig序列设计特异性引物,利用PCR技术自海带中克隆得到它们的开放阅读框(ORF)序列,分别命名为Sj CENH3、Sj Nuf2和Sj Ndc80,大小分别为432、1365和2172 bp,相应地编码由143、454和723个氨基酸组成的蛋白。同源序列比对表明,Sj CENH3由氨基端尾巴和羧基端的组蛋白折叠域组成,后者包括4个α螺旋(αN、α1、α2和α3)和2个环(Loop1和Loop2);但与组蛋白H3相比,Sj CENH3的氨基端略长且序列不相似,同时组蛋白折叠域的α1、α2螺旋及Loop1序列更多变;Sj Nuf2主要的结构域有Nuf2 domain、Spc7和SPT2;Sj Ndc80主要的结构域除了具有与Sj Nuf2相似的SPT2和Spc7结构域以外,还有Ndc80ec、Fo Puplication和Kin17id。基于海带和其他物种的CENH3、H3、Nuf2和NCD80蛋白序列所构建的Neighbor-Joining系统进化树显示,Sj CENH3和Sj H3分别被显著地聚类在CENH3和H3两支中,H3在物种间是高度保守的,而CENH3在物种间的差异相对较大;来自不同生物的Nuf2和NCD80均可显著地分为被子植物和藻类2支,它们可能存在着共同演化的关系。本研究首次报道了海带着丝粒蛋白Sj CENH3、Sj Nuf2和Sj NCD80编码序列的特征,为制备特异抗体通过免疫荧光技术来定位海带染色体着丝粒的具体位置,通过染色质免疫共沉淀获得海带染色体着丝粒DNA序列及进行染色体核型分析打下了良好的基础。

关键词：海带 CENH3 动粒蛋白基因克隆生物信息学

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再生肝细胞中出现37ku的ACA蛋白抗原

科学通报 1995年第19期40卷 1805-1808页

作者：张焕相王永潮梁(衤弗)(衤右) 北京师范大学细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875 首都医科大学北京100054

动粒(kinetochore)位于染色体主缢痕处,是细胞有丝分裂、减数分裂时纺锤体微管附着的地方,是有丝分裂和减数分裂中对染色体的正常分离和运动所必需的.ACA(Anti-centromere/kinetochore antibody)在CREST硬皮病病人血清中的发现,大大促... 详细信息

动粒(kinetochore)位于染色体主缢痕处,是细胞有丝分裂、减数分裂时纺锤体微管附着的地方,是有丝分裂和减数分裂中对染色体的正常分离和运动所必需的.ACA(Anti-centromere/kinetochore antibody)在CREST硬皮病病人血清中的发现,大大促进了人们对动粒结构、组成及功能等的研究.ACAs不仅和有丝分裂、减数分裂细胞的动粒结合,而且和间期细胞的前动粒(prekinetochore)结合.

关键词：动粒蛋白再生肝肝细胞抗体 ACA抗原