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副鸡嗜血杆菌基因文库的构建与筛选

中国兽医科学 2012年第4期42卷 368-372页

作者：王雪敏梁玉荣吕学泽张培君龚玉梅王宏俊河北工程大学农学院河北邯郸056021 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097

为了筛选副鸡嗜血杆菌的体内表达基因,提取了副鸡嗜血杆菌的全基因组,构建了副鸡嗜血杆菌基因组的pET系统表达文库。运用PCR及核酸内切酶(SalⅠ+NdeⅠ)鉴定基因文库,并以病原菌吸附后的康复血清作为探针,采用菌落原位杂交的方法对基因... 详细信息

为了筛选副鸡嗜血杆菌的体内表达基因,提取了副鸡嗜血杆菌的全基因组,构建了副鸡嗜血杆菌基因组的pET系统表达文库。运用PCR及核酸内切酶(SalⅠ+NdeⅠ)鉴定基因文库,并以病原菌吸附后的康复血清作为探针,采用菌落原位杂交的方法对基因文库进行筛选。结果显示,重组质粒中有0.5～2kb的片段插入,99%的基因包含在基因文库中;重复筛选后得到的阳性克隆再经过PCR与SalⅠ+NdeⅠ酶切鉴定后定向测序,并对测序结果在NCBI上进行分析后发现筛选获得的基因中,有1个表达为转运谷氨酰还原酶、1个表达为转录终止因子,1个表达为荚膜合成域2,还有2个表达为保守假想蛋白。结果表明,本研究应用体内诱导抗原技术(IVIAT)筛选到了一些副鸡嗜血杆菌体内诱导表达基因,并对基因的功能做了初步探讨,在找寻副鸡嗜血杆菌在体内生存以及致病关键基因的道路上前进了一步,为传染性鼻炎的预防和治疗积累了有价值的资料。

关键词：副鸡嗜血杆菌基因文库构建基因文库筛选菌落原位杂交

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副鸡嗜血杆菌人工感染鸡抗体动态的研究

畜牧兽医学报 2001年第5期32卷 463-467页

作者：苗得园张培君龚玉梅佟瑞平张立昌北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100089 美国富道动物保健公司技术服务部广州510075

:本研究采用阻断ELISA(B -ELISA)和血凝抑制试验 (HI)方法 ,检测了鸡体分别人工感染副鸡嗜血杆菌Hp8株 (A型 )和H668株 (C型 )后 0～ 9周的血清抗体消长情况 ,并绘制了示意抗体曲线。结果表明 ,Hp8人工感染后 ,从第 2周到第 9周 ,B -EL... 详细信息

:本研究采用阻断ELISA(B -ELISA)和血凝抑制试验 (HI)方法 ,检测了鸡体分别人工感染副鸡嗜血杆菌Hp8株 (A型 )和H668株 (C型 )后 0～ 9周的血清抗体消长情况 ,并绘制了示意抗体曲线。结果表明 ,Hp8人工感染后 ,从第 2周到第 9周 ,B -ELISA阳性检出率一直保持 10 0 % ,其中抗体效价在感染后第 4周达到效价高峰 ,平均约为 15 2。而H668人工感染鸡则在感染后第 7周检出率最高 ,此后急剧下降。HI方法对A型抗体的阳性检出率亦在第 4～ 5周达到高峰 ,而对C型抗体的检出率一直较低。结果进一步显示了B -ELISA良好的特异性和敏感性 ,为本方法及其试剂盒产品的进一步应用提供了参考。

关键词：阻断ELIS 血凝抑制试验副鸡嗜血杆菌人工感染鸡传染性鼻炎抗体动态诊断

副鸡嗜血杆菌B型分离株免疫原性的比较和疫苗株的筛选

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中国兽医科技 2005年第9期35卷 703-706页

作者：卢冷轶陈晓峰苗得园赵德明中国农业大学动物医学院北京100094 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100089

利用分离自我国不同地区的3株B型副鸡嗜血杆菌菌株及0222标准株分别制作油乳剂灭活疫苗免疫无鸡传染性鼻炎病史的鸡群,通过攻毒保护试验和HI抗体测定,分析比较了其免疫原性,以筛选适用于制备疫苗的菌株。结果表明:不同地区的分离株在致... 详细信息

利用分离自我国不同地区的3株B型副鸡嗜血杆菌菌株及0222标准株分别制作油乳剂灭活疫苗免疫无鸡传染性鼻炎病史的鸡群,通过攻毒保护试验和HI抗体测定,分析比较了其免疫原性,以筛选适用于制备疫苗的菌株。结果表明:不同地区的分离株在致病性和免疫原性上存在一定的差异,TJ-1株疫苗免疫鸡对TJ-1和DL-1株的保护作用可达90%和91.7%,对BJ-1株的保护率为63.6%,具有相对较好的保护作用,目前可以作为疫苗株使用。在各免疫组试验鸡中,0222株和BJ-1株免疫鸡群的血清抗体水平较高,但这可能与血凝抑制试验所采用的抗原是由0222株制备的及BJ-1株在抗原性上可能更接近于0222株有关。DL-1和TJ-1株疫苗免疫鸡的抗体水平都很低,但其免疫保护却要强于0222和BJ-1株疫苗免疫鸡。由此说明B型株因菌株之间免疫原性的差异使得HI抗原的选择难度增加。

关键词：副鸡嗜血杆菌免疫原性 HI抗体攻毒

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副鸡嗜血杆菌的初步分离与鉴定

中国家禽 2003年第20期25卷 10-11页

作者：杨灵芝张兴晓刘美丽王秀云山东滨州博莱威生物技术研究所

从某鸡场发病鸡中分离出一株细菌,经过病原的分离培养、生化鉴定试验、动物回归试验等实验室方法,初步鉴定为副鸡嗜血杆菌。通过药敏试验筛选敏感药物,对该病的防治起到了积极的效果。

关键词：鸡副鸡嗜血杆菌分离鉴定药敏试验

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副鸡嗜血杆菌种特异性的核酸探针

中国兽药杂志 1995年第4期29卷 12-13页

作者：陈小玲张培君北京市农业科学院畜牧兽医研究所

副鸡嗜血杆菌种特异性的核酸探针陈小玲Ｊ．Ｋ，Ｍｉｆｌｉｎ张培君Ｐ．Ｊ．Ｂｌｅｃｋａｌｌ（北京市农业科学院畜牧兽医研究所北京，１０００８１）鸡传染性鼻炎（ＩＣ）是由副鸡嗜血杆菌（Ｈｐｇ）引起的呼吸道传染病。其危害主要在... 详细信息

副鸡嗜血杆菌种特异性的核酸探针陈小玲Ｊ．Ｋ，Ｍｉｆｌｉｎ张培君Ｐ．Ｊ．Ｂｌｅｃｋａｌｌ（北京市农业科学院畜牧兽医研究所北京，１０００８１）鸡传染性鼻炎（ＩＣ）是由副鸡嗜血杆菌（Ｈｐｇ）引起的呼吸道传染病。其危害主要在于影响鸡的生长和使鸡产蛋率下降。诊...

关键词：鸡病传染性鼻炎副鸡嗜血杆菌核酸探针

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副鸡嗜血杆菌PCR试验及应用

中国兽药杂志 1996年第1期30卷 4-6页

作者：陈小玲张培君北京市农林科学院畜牧所

在Ｈｐｇ核酸探针试验基础上设计ＰＣＲ引物和ＰＣＲ试验方法。检测４１株Ｈｐｇ和２６株非Ｈｐｇ证明ＰＣＲ试验特异性好，敏感性比Ｈｐｇ核酸探针高１０００～１０，０００倍。用ＰＣＲ检验直接临床棉拭子样品，与Ｈｐｇ细菌分离结果... 详细信息

在Ｈｐｇ核酸探针试验基础上设计ＰＣＲ引物和ＰＣＲ试验方法。检测４１株Ｈｐｇ和２６株非Ｈｐｇ证明ＰＣＲ试验特异性好，敏感性比Ｈｐｇ核酸探针高１０００～１０，０００倍。用ＰＣＲ检验直接临床棉拭子样品，与Ｈｐｇ细菌分离结果完全一致。ＰＣＲ试验简便敏感快速，有可能作为一种新方法用于临床Ｈｐｇ诊断。

关键词：鸡病副鸡嗜血杆菌病原检测

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副鸡嗜血杆菌研究热点及存在问题

中国兽药杂志 1991年第2期25卷 52-54页

作者：陈小玲张培君北京市农林科学院畜牧兽医研究所

副鸡嗜血杆菌(Hpg)是引起鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌。从第一次分离到该病原至今的半个多世纪来,人们对 Hpg 认识得越来越多,但仍有许多问题需要研究。例如,我们还缺少适用于现代化鸡场感染群的血清学诊断方法和对免疫程序的血清学监测方... 详细信息

副鸡嗜血杆菌(Hpg)是引起鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌。从第一次分离到该病原至今的半个多世纪来,人们对 Hpg 认识得越来越多,但仍有许多问题需要研究。例如,我们还缺少适用于现代化鸡场感染群的血清学诊断方法和对免疫程序的血清学监测方法,对 Hpg 的病理和毒理机制还缺乏明确的认识。

关键词：鸡副鸡嗜血杆菌研究

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副鸡嗜血杆菌分离株致病性和生长特性试验

动物医学进展 2009年第4期30卷 54-57页

作者：李杰峰谢春伏刘虹李庆锁梁占军高维芳河北省畜牧兽医研究所河北保定071000 河北省无极县畜牧局河北无极052460 河北省文安县畜牧局河北文安065800

为研究副鸡嗜血杆菌河北省分离株W菌株致病性及生长特性,以不同剂量对80日龄公鸡进行致病性试验。对W菌株16 h培养物进行100倍稀释,采用微量点板计数法在不同培养时间进行细菌计数以绘制生长曲线。结果表明,试验鸡接菌量在1.11×104cfu... 详细信息

为研究副鸡嗜血杆菌河北省分离株W菌株致病性及生长特性,以不同剂量对80日龄公鸡进行致病性试验。对W菌株16 h培养物进行100倍稀释,采用微量点板计数法在不同培养时间进行细菌计数以绘制生长曲线。结果表明,试验鸡接菌量在1.11×104cfu/只时发病率可以达到100%,由生长曲线计算W菌株的世代时间为25.33 min。W菌株可能成为研制优良鸡传染性鼻炎疫苗的候选菌株。

关键词：副鸡嗜血杆菌致病性生长特性鸡

副鸡嗜血杆菌免疫鸡阻断ELlSA抗体曲线的观察

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中国兽医杂志 2000年第1期26卷 18-19页

作者：苗得园张培君北京市农林科学院畜牧兽医研究所海淀100081

副鸡嗜血杆菌(Hpg)是引起鸡传染性鼻炎(IC)的病原体.本菌通常分为A、B、C 3个血清型,由于各型均能致病且现有疫苗无型间交叉保护,因此在诊断时确定感染菌的血清分型对于节约成本和更好的防制本病有重要意义.作者在A、C型特异性单抗的基... 详细信息

副鸡嗜血杆菌(Hpg)是引起鸡传染性鼻炎(IC)的病原体.本菌通常分为A、B、C 3个血清型,由于各型均能致病且现有疫苗无型间交叉保护,因此在诊断时确定感染菌的血清分型对于节约成本和更好的防制本病有重要意义.作者在A、C型特异性单抗的基础上建立了可检测A型和C型副鸡嗜血杆菌特异性抗体阻断ELISA方法(B-ELISA)[1,2]及其试剂盒产品[3],并在临床上进行了初步应用[4].为给本方法和产品在IC诊断上的应用提供参考,作者又进行了免疫鸡Hpg阻断A型ELISA抗体曲线的研究,现将研究情况报告如下.

关键词：鸡副鸡嗜血杆菌 ELISA 抗体曲线