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菊花枯萎病病原菌的分离和鉴定及其粗毒素对切花菊‘神马’幼苗生长的影响

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南京农业大学学报 2018年第4期41卷 662-669页

作者：陈慧杰赵爽张凯凯邹忠幸倪嘉琪姜晓帆陈发棣房伟民南京农业大学园艺学院/农业农村部景观设计重点实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在通过对菊花枯萎致病菌的分离和鉴定,研究其粗毒素对切花菊‘神马’幼苗的化感作用。[方法]观察切花菊‘神马’枯萎病的田间发病症状,采用组织分离培养法从菊花病株上分离到1株致病真菌CFD-B2,提取CFD-B2粗毒素,设5个不同... 详细信息

[目的]本文旨在通过对菊花枯萎致病菌的分离和鉴定,研究其粗毒素对切花菊‘神马’幼苗的化感作用。[方法]观察切花菊‘神马’枯萎病的田间发病症状,采用组织分离培养法从菊花病株上分离到1株致病真菌CFD-B2,提取CFD-B2粗毒素,设5个不同稀释倍数的粗毒素处理:对照、粗毒素原液(168.12μg·m L-1)、粗毒素稀释5倍、粗毒素稀释10倍和粗毒素稀释25倍,测定不同处理中切花菊‘神马’幼苗株高、根长、茎粗,抗性物质含量,细胞膜相对透性以及根系过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和多酚氧化酶(PPO)活性的变化。[结果]通过ITS基因核酸序列分析,鉴定CFD-B2为镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusarium oxporum)。尖孢镰刀菌CFD-B2不同稀释倍数的粗毒素处理对切花菊‘神马’幼苗的株高、茎粗、根长均有抑制作用,抑制程度由强到弱依次为:粗毒素原液处理、粗毒素稀释5倍处理、粗毒素稀释10倍处理、粗毒素稀释25倍处理。处理7 d时,粗毒素原液对菊花幼苗株高、茎粗、根长抑制效果最显著,比对照分别减少了28.87%、7.31%和42.48%。不同稀释倍数的粗毒素处理能增加切花菊‘神马’幼苗根系组织细胞膜透性及丙二醛(MDA)、可溶性糖和脯氨酸含量。不同稀释倍数的粗毒素处理能够增加根系保护酶活性,且效果从高到低表现为:粗毒素原液处理、粗毒素稀释5倍处理、粗毒素稀释10倍处理、粗毒素稀释25倍处理。同一稀释倍数的粗毒素处理短期内能够增加根系保护酶活性。粗毒素原液处理12 d时,PAL、POD和PPO活性达到最高,比对照分别提高了44.39%、36.96%和35.38%。[结论]尖孢镰刀菌CFD-B2粗毒素对切花菊‘神马’幼苗的化感作用主要表现在可抑制切花菊幼苗根、茎的正常生长,增加切花菊幼苗根系的细胞膜透性以及根系组织中MDA、可溶性糖和脯氨酸的含量,在短期内提高根系保护酶PAL、POD和PPO活性。

关键词：菊花尖孢镰刀菌分离和鉴定粗毒素生理响应

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杨树内生真菌的分离和鉴定

南京林业大学学报（自然科学版） 2008年第2期32卷 76-78页

作者：赵桂华石立岩杨怀光孟庆兰闵祥宏江苏农林职业技术学院生物技术研发中心江苏句容212400 临沂师范学院生命科学系山东临沂276000 临沂市林业局山东临沂276000

采用组织分离法,从3种健康杨树休眠芽、叶痕、树皮、木质组织获得83个真菌菌株,其中部分菌株经形态观察、分类鉴定,归属于2亚门、3目、3科5属6种,分别是链格孢(Alternaria alternata)、细极链格孢(Alternaria tenuissima)、球黑孢(Nigro... 详细信息

采用组织分离法,从3种健康杨树休眠芽、叶痕、树皮、木质组织获得83个真菌菌株,其中部分菌株经形态观察、分类鉴定,归属于2亚门、3目、3科5属6种,分别是链格孢(Alternaria alternata)、细极链格孢(Alternaria tenuissima)、球黑孢(Nigrospora sphaerica)、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、球毛壳菌(Chaetomium globosum)和黑附球菌(Epicoccum purpurascens)。3种杨树(南林351杨(Populus deltoides harvard×***)、土耳其杨(***‘S307-26’)和天演杨(***))均是6种真菌在我国的新寄主。

关键词：杨树内生真菌分离和鉴定

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HPCE法分离和鉴定枸杞多糖中单糖

药物分析杂志 1998年第S1期18卷 323-324页

作者：周蓉齐莉王雅芬朱一川刘燕君北京新技术应用研究所 100035 北京卫生学校 100053

西藏土壤中耐辐射阿氏芽胞杆菌T61的分离和鉴定

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微生物学通报 2016年第3期43卷 488-494页

作者：冯玮张蕾宣慧娟万平李艳红杨志伟首都师范大学生命科学学院北京100048

【目的】对分离自西藏土样的菌株T61进行分离、鉴定和UV辐射抗性分析。【方法】对菌株T61进行形态和生理生化鉴定;对16S r RNA基因进行克隆和测序,构建系统进化树;测定脂肪酸成分和GC含量,将T61与最相近种进行DNA-DNA杂交;测定T61的UV... 详细信息

【目的】对分离自西藏土样的菌株T61进行分离、鉴定和UV辐射抗性分析。【方法】对菌株T61进行形态和生理生化鉴定;对16S r RNA基因进行克隆和测序,构建系统进化树;测定脂肪酸成分和GC含量,将T61与最相近种进行DNA-DNA杂交;测定T61的UV辐射抗性曲线。【结果】T61细胞杆状,长度约为2μm,直径约为1μm,革兰氏阳性,可产生内生孢子。G+C含量为38.02%。脂肪酸主要成分是C14:0 iso、C15:0 iso和C15:0 anteiso。16S r RNA基因与阿氏芽胞杆菌B8W22T和巨大芽胞杆菌IAM13418T相似度最高,分别达到99.93%和99.53%。DNA-DNA杂交分析表明,T61与阿氏芽胞杆菌B8W22T的相似度为81.4%,而与巨大芽胞杆菌IAM13418T的相似度只有50.3%。UV辐射抗性分析显示,T61 D10为100 J/m2,远高于辐射敏感的大肠杆菌K12和枯草芽孢杆菌等菌株。【结论】菌株T61是一株阿氏芽胞杆菌,命名为Bacillus aryabhattai T61,其对UV辐射具有较强的抗性。

关键词：芽胞杆菌辐射抗性分离和鉴定 DNA-DNA杂交

驴源猪链球菌2型的分离和鉴定及MLST分型

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中国兽医学报 2018年第10期38卷 1920-1925页

作者：刘朋程子龙陈萌刘思当山东农业大学动物科技学院

2017年4月,山东省济宁嘉祥县、梁山县和聊城东阿县的多个驴场从外地购买的驴相继发生体温升高、流鼻涕、咳嗽、呼吸困难等症状,病情严重的驴出现死亡。从5个驴场分别剖检5头病死驴,均表现化脓性肺炎及败血症病变,采集一典型病例的组织,... 详细信息

2017年4月,山东省济宁嘉祥县、梁山县和聊城东阿县的多个驴场从外地购买的驴相继发生体温升高、流鼻涕、咳嗽、呼吸困难等症状,病情严重的驴出现死亡。从5个驴场分别剖检5头病死驴,均表现化脓性肺炎及败血症病变,采集一典型病例的组织,进行细菌分离培养,并通过病理组织学检查、革兰染色、生化鉴定、血清学鉴定、16S基因序列分析以及MLST（aroA、cpn60、dpr、gki、mutS、recA、thrA）分型研究,此外还分析了中国目前所流行的ST型以及不同ST型之间的关系。结果显示：病原为猪链球菌2型;16SDNA序列与国内外部分地区菌株序列的同源性达到99%～100%;MLST分型为ST2型;该分离菌株对林可霉素、青霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠产生耐药性,对左氧氟沙星、氟苯尼考高度敏感。

关键词：驴猪链球菌分离和鉴定病理组织学 16S基因序列分析 MLST分型

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盐碱水体副溶血弧菌的分离和鉴定

中国兽医杂志 2023年第4期59卷 77-79页

作者：刘嘉怡王楠李月红吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为了明确副溶血弧菌在内陆淡水水体中的分布情况,本试验从查干湖水体中分离得到1株革兰阴性杆菌,命名为A201805S2,对其进行形态观察、生理生化鉴定,并利用PCR方法对其16S rDNA基因序列进行扩增和测序,将测得结果于NCBI上进行BLAST同源... 详细信息

为了明确副溶血弧菌在内陆淡水水体中的分布情况,本试验从查干湖水体中分离得到1株革兰阴性杆菌,命名为A201805S2,对其进行形态观察、生理生化鉴定,并利用PCR方法对其16S rDNA基因序列进行扩增和测序,将测得结果于NCBI上进行BLAST同源性比较。结果显示,该菌株在硫化硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS)上为绿色菌落,革兰染色呈红色,两端钝圆,为革兰阴性杆菌;生理生化鉴定结果与副溶血弧菌特性相一致;分离菌与副溶血弧菌16S rDNA基因序列同源性达99%。结果表明,本试验首次从内陆苏打盐碱型淡水水体中分离出副溶血弧菌,为淡水水体副溶血弧菌防控提供数据支持。

关键词：副溶血弧菌分离和鉴定盐碱水体 PCR

一株Nsp2蛋白自然缺失123个氨基酸的PRRSV分离和鉴定

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动物医学进展 2015年第10期36卷 34-38页

作者：韦莹洪绍锋覃艳然黄加滨林思远韦苗苗陈樱黄伟坚韦祖樟广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

通过RT-PCR方法检测到一份猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性肺组织病料。将该病料研磨、过滤后感染Marc-145细胞,连续传代都能产生明显的细胞病变。为鉴定细胞病变是否由PRRSV引起,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法成功的检测到了PRRS... 详细信息

通过RT-PCR方法检测到一份猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性肺组织病料。将该病料研磨、过滤后感染Marc-145细胞,连续传代都能产生明显的细胞病变。为鉴定细胞病变是否由PRRSV引起,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法成功的检测到了PRRSV基因。同时用间接免疫荧光方法证实了感染的细胞内有PRRSV N蛋白的表达。将成功分离的毒株命名为GXYL1403株。对分离株的ORF5基因和Nsp2高变区进行扩增、克隆和遗传进化分析,结果发现该毒株Nsp2高变区与NCBI登录的参考序列VR-2332氨基酸同源性为68.6%,JXA1的同源性为90.8%。通过ORF5遗传进化分析该分毒株为北美型PRRSV,且与高致病性PRRSV分布在同一个小分支上。Nsp2序列对比显示该分离株Nsp2蛋白含有高致病性PRRSV特异的1+29个氨基酸的缺失。特别的是,在缺失29个氨基酸区域的上游,含有连续20个氨基酸缺失,在下游更出现了连续73个氨基酸的缺失。该PRRSV毒株的分离和Nsp2蛋白部分序列的缺失鉴定,为下一步研究Nsp2部分氨基酸缺失对病毒生物学特性影响奠定了基础。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离和鉴定 Nsp2基因氨基酸缺失

骨肉瘤细胞株HOS干细胞样细胞亚群的分离和鉴定

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骨肉瘤细胞株HOS干细胞样细胞亚群的分离和鉴定

作者：孙岩桂林医学院

学位级别：硕士

目的:根据临床中骨肉瘤的高复发和易转移特征,从普通人骨肉瘤HOS细胞株中探索干细胞的分离及鉴定方法,并检测其生物学特性,为进一步研究治愈及靶向治疗骨肉瘤打下理论基础。方法:从中国科学院（上海细胞库）购买人骨肉瘤HOS细胞株,大量... 详细信息

目的:根据临床中骨肉瘤的高复发和易转移特征,从普通人骨肉瘤HOS细胞株中探索干细胞的分离及鉴定方法,并检测其生物学特性,为进一步研究治愈及靶向治疗骨肉瘤打下理论基础。方法:从中国科学院（上海细胞库）购买人骨肉瘤HOS细胞株,大量培养扩增,通过有限稀释法对人骨肉瘤HOS细胞进行干细胞的分选,对获取的细胞分别用实时荧光定量PCR和Western blot法检测Nanog,SOX-2,OCT4 m RNA的表达及蛋白的表达。同时检测干细胞的自我更新能力、增殖及侵袭迁移能力。结果:骨肉瘤HOS细胞株传代并大量增殖。通过有限稀释法单克隆出的HOS-M细胞具有较强的增殖和迁移能力,HOS-M细胞表面Nanog,SOX-2,OCT4 m RNA和蛋白的表达水平均明显高于母系HOS细胞。细胞增殖实验和划痕实验结果发现HOS-M细胞具有较强的增殖和侵袭迁移能力。结论:有限稀释法可用于骨肉瘤HOS细胞的分选,本实验所得的骨肉瘤细胞具有干细胞特性。

关键词：骨肉瘤HOS细胞分离和鉴定骨肉瘤HOS干细胞

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分离和鉴定脊髓性肌萎缩症SMA的致病基因

生物技术通报 1995年第5期11卷 26-27页

作者：孙国凤

东海大学医学部教授池田(?)卫等分离和鉴定脊髓性肌萎缩症(SMA)的致病基因在世界首次获得成功。在Cell杂志上发表了此项成果。据Cell杂志讲,法国的研究组也发表了SMA致病基因的分离、鉴定的论文。详细情况不太清楚。但是双方几乎是在... 详细信息

东海大学医学部教授池田(?)卫等分离和鉴定脊髓性肌萎缩症(SMA)的致病基因在世界首次获得成功。在Cell杂志上发表了此项成果。据Cell杂志讲,法国的研究组也发表了SMA致病基因的分离、鉴定的论文。详细情况不太清楚。但是双方几乎是在同一时期查明SMA致病基因的。 SMA是仅次于肌营养不良、肌紧直性营养不良等严重的肌神经疾病。是恶性遗传病。

关键词：脊髓性肌萎缩症致病基因分离和鉴定遗传病染色体动态肌营养不良加拿大医学生物学研究所基因治疗医学部