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冷保存方法构建的大鼠肝移植模型

中国组织工程研究与临床康复 2010年第24期14卷 4411-4415页

作者：余强史宪杰李海林董家鸿解放军总医院肝胆外科北京市100853

背景:肝移植是终末期肝病最为有效的治疗手段,移植后胆病是制约肝移植发展的主要障碍之一。目的:建立稳定的大鼠冷保存肝移植模型,探讨冷保存对肝移植后肝脏胆管的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分为4组,按照组内随机配对的原则,体质... 详细信息

背景:肝移植是终末期肝病最为有效的治疗手段,移植后胆病是制约肝移植发展的主要障碍之一。目的:建立稳定的大鼠冷保存肝移植模型,探讨冷保存对肝移植后肝脏胆管的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分为4组,按照组内随机配对的原则,体质量相对较轻的大鼠做为供体,供肝置于4℃UW液中分别保存2,8,16h后行原位肝移植。在"两套袖法"基础上,以"支架法"建立动脉化大鼠原位肝移植模型,供受体肝总动脉采用改良"支架法"进行端端吻合,重建肝动脉血供。记录移植手术时间及移植成功率,并分别于移植后3,7d检测血清转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶水平,同时观察组织病理学改变。结果与结论:实验共完成55例次大鼠原位肝移植手术,手术成功率为93%。冷保存2,8,16h组术后7d存活率分别为100%(9/9),83%(10/12),73%(8/11)。随着冷保存时间的延长,肝功能及肝内胆管损伤加重,胆管组织病理学评分显示各组间差异有显著性意义(P冷保存16h大鼠肝移植模型既有较高的手术存活率又有严重的胆管损伤,是研究冷保存对肝移植胆管病影响的较好模型。

关键词：肝移植冷保存动物模型大鼠肝脏组织工程

冷保存-再灌注损伤对大鼠移植肝胆管上皮细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第5期13卷 857-861页

作者：陈莉萍李州利戴睿武钱叶勇石炳毅解放军总医院第二附属医院器官移植中心北京市100091 解放军成都军区总医院普通外科四川省成都市610083

背景:移植肝胆管上皮细胞凋亡是影响肝移植后胆道功能恢复的因素之一,调控基因bcl-2/bax可能对胆管上皮细胞的生存起到决定作用。目的:观察缺血-再灌注损伤后大鼠肝内胆管上皮细胞的凋亡及调控基因bcl-2/baxmRNA表达的变化。设计、时间... 详细信息

背景:移植肝胆管上皮细胞凋亡是影响肝移植后胆道功能恢复的因素之一,调控基因bcl-2/bax可能对胆管上皮细胞的生存起到决定作用。目的:观察缺血-再灌注损伤后大鼠肝内胆管上皮细胞的凋亡及调控基因bcl-2/baxmRNA表达的变化。设计、时间及地点:动物实验,细胞形态学观察,于2008-02/08在解放军第三军医大学西南医院肝胆外科研究所实验室完成。材料:健康雄性Wistar大鼠100只,随机分为3组:供肝冷保存1h组40只,冷保存12h组40只,对照组20只。方法:供肝冷保存1,12h组,组内随机配对,体质量相对较轻的大鼠做为供体,供肝置于4℃器官保存液中,分别保存1、12h后行原位肝移植,对照组只行开、关腹手术。在"两套袖法"基础上,以"支架法"建立动脉化大鼠原位肝移植模型,供受体肝总动脉采用改良"支架法"进行端端吻合,重建肝动脉血供。主要观察指标:分别于移植后1,3,7,14d检测血清总胆红素、碱性磷酸酶及肝内胆管上皮细胞的凋亡,实时荧光定量RT-PCR法检测胆管上皮细胞内bcl-2mRNA和baxmRNA的表达。结果:保存1h组移植后1,3d可见轻度胆道损伤的血清学及病理学表现,肝内胆管上皮细胞凋亡指数分别为(4.62±0.23)%,(3.42±0.22)%,(2.91±0.23)%,(2.87±0.16)%,且在移植后7d即与对照组无明显差异。在保存12h组移植后1,3,7d,胆汁郁积征象明显,伴有严重的胆管损伤病理学改变,且肝内胆管上皮细胞凋亡指数明显高于保存1h组和对照组,分别为(6.51±0.33)%,(8.52±0.36)%,(3.51±0.27)%,(2.91±0.28)%。在移植后各时相点,保存1h组肝内胆管上皮细胞内bcl-2mRNA/baxmRNA比值分别为(1.12±0.12)%,(1.34±0.13)%,(1.51±0.14)%,(1.60±0.15)%,在移植后7d即接近对照组水平,而保存12h组则为(0.90±0.08)%,(0.79±0.02)%,(1.36±0.12)%,(1.59±0.14)%,在移植后7d仍明显低于保存1h组和对照组,且与肝内胆管上皮细胞凋亡指数显著负相关(P=0.029)。结论:冷保存时间延长导致胆道功能严重损伤,导致肝内胆管上皮细胞内bcl-2mRNA/baxmRNA下调,促进移植后早期肝内胆管上皮细胞的凋亡。

关键词：原位肝移植冷保存再灌注胆管上皮细胞凋亡

冷保存的同种异体动脉移植物在活体肝移植中的应用

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中华外科杂志 2008年第15期46卷 1143-1145页

作者：马玉奎严律南赵纪春李波曾勇文天夫蒋莉莉黄斌四川大学华西医院普外科成都610041 四川大学华西医院病理科成都610041

活体肝移植（1iving donor liver transplantation，LDLTX）是目前解决供肝短缺矛盾的有效方法之一。LDLTX术中为保证移植肝有良好的静脉流出道，许多情况下需用血管移植物重建移植肝的部分肝段静脉；20世纪70至80年代就有同种异体动脉... 详细信息

活体肝移植（1iving donor liver transplantation，LDLTX）是目前解决供肝短缺矛盾的有效方法之一。LDLTX术中为保证移植肝有良好的静脉流出道，许多情况下需用血管移植物重建移植肝的部分肝段静脉；20世纪70至80年代就有同种异体动脉移植物在肝移植中使用的报道，主要用于尸体供肝的动脉重建，随后血管移植物越来越多地用于肝移植的血管重建，同时也有相应的研究报道。我中心在一部分活体肝移植的肝静脉重建中采用了冷藏保存的同种异体动脉移植物，现将临床研究结果报告如下。

关键词：活体肝移植血管移植物异体动脉同种冷保存静脉流出道尸体供肝 liver

冷保存、慢性排斥反应构建移植肝胆管病大鼠模型

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中华肝胆外科杂志 2013年第8期19卷 601-605页

作者：陆宏伟张玉君余强李崇辉西安交通大学第二附属医院普通外科 710004 解放军总医院肝胆外科北京第三军医大学西南医院肝胆外科重庆

目的建立大鼠移植肝胆管病模型并评估其意义。方法将大鼠按实验要求分为4组：（1）长时间（12h）冷保存组（n=24）：同基因系近交系大鼠♂Wistar→♂Wistar，所获供肝于4℃UW液保存12h后行两袖套法大鼠原位肝移植（rat liverorthotopict... 详细信息

目的建立大鼠移植肝胆管病模型并评估其意义。方法将大鼠按实验要求分为4组：（1）长时间（12h）冷保存组（n=24）：同基因系近交系大鼠♂Wistar→♂Wistar，所获供肝于4℃UW液保存12h后行两袖套法大鼠原位肝移植（rat liverorthotopictransplantation，ROLT）。术中利用内支架管直接对合供、受体肝总动脉及肝外胆管；（2）慢性排斥反应组（低剂量环孢素每天1mg／kg，冷缺血时间1h）（n=24）：异基因近交系大鼠♂DA→♂Lewis。供肝于4℃UE液保存1h后同法行ROLT；（3）对照组（冷保存时间1h）（n=24）：同基因系近交系大鼠♂Wistar→♂Wistar，供肝于4℃UW液保存1h后同法行ROLT；（4）假手术组（n=24）：♂Wistar大鼠，只进行开关腹手术。观察术后16周内各组大鼠并发症的发生情况和大鼠肝脏标本的病理学改变。结果在长时间冷保存组和慢性排斥反应组，术后大鼠意识恢复慢，胆道及血管并发症发生率高，肝内汇管区胆管增生及炎细胞浸润明显。16周时可见肝小叶被增生胆管分隔，正常肝小叶结构消失，增生胆管上皮细胞萎缩、坏死、胞浆消失，仅见固缩的细胞核。胆管周围有较多的炎细胞浸润，肝内小动脉闭塞或消失。结论通过供肝长时间冷保存或诱导慢性排斥反应可以建立稳定可靠的大鼠移植肝胆管病模型。该模型是研究肝移植术后移植肝胆管病的理想模型。

关键词：大鼠模型移植肝胆管病冷保存慢性排斥反应

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冷保存对肝内胆管GATA因子表达的影响

中华消化外科杂志 2015年第8期14卷 668-672页

作者：刘巍田峰江鹏王曙光第三军医大学西南医院肝胆外科研究所中国人民解放军西南肝胆外科医院重庆400038

目的探讨冷保存对大鼠肝内胆管GATA因子表达的影响。方法用酶消化辅助机械分离方法获得15只SD大鼠肝内胆管组织，将所得胆管片断培养于鼠尾胶原溶液中48h后进行实验。将SD大鼠按照随机数字表法分为冷保存1h组、冷保存12h组和对照组，每... 详细信息

目的探讨冷保存对大鼠肝内胆管GATA因子表达的影响。方法用酶消化辅助机械分离方法获得15只SD大鼠肝内胆管组织，将所得胆管片断培养于鼠尾胶原溶液中48h后进行实验。将SD大鼠按照随机数字表法分为冷保存1h组、冷保存12h组和对照组，每组5只。采用Real-nmePCR和Westernblot检测GATA因子的mRNA和蛋白表达水平。正态分布的计量资料采用x±s表示。3组比较采用方差分析，两两比较采用LSD检验。结果对照组胆管表达GATA3、GATA4、GATA6mRNA，不表达GATAl、GATA2、GATA5mRNA。冷保存1h组、冷保存12h组和对照组GATA4 mRNA的表达水平分别为0。72±0．08、0．56±0．07和0．96±0．06，3组比较，差异有统计学意义（F=38．981，P〈0．05）。冷保存12h组GATA4mRNA的表达水平显著低于冷保存1h组和对照组（P〈0．05），冷保存1h组GATA4mRNA的表达水平显著低于对照组（P〈0．05）。冷保存1h组、冷保存12h组和对照组GATA6 mRNA的表达水平分别为0．83±0．07、0．68±0．12和0．98±0．12，3组比较，差异有统计学意义（F=10．175，P〈0．05）。冷保存12h组GATA6mRNA的表达水平显著低于冷保存1h组和对照组（P〈0．05），冷保存1h组GATA6mRNA的表达水平显著低于对照组（P〈0．05）。冷保存1h组、冷保存12h组和对照组GATA3mRNA的表达水平变化不明显，分别为0．92±0．06、0．89±0．05和0．98±0．11，3组比较，差异无统计学意义（F=1．674，P〉0．05）。冷保存1h组、冷保存12h组和对照组GATA4蛋白的表达水平分别为0．78±0．07、0．64±0．06和0．99±0．10，3组比较，差异有统计学意义（F=24．211，P〈0．05）。冷保存12h组GATA4蛋白的表达水平显著低于冷保存1h组和对照组（P〈0．05），冷保存lh组GATA4蛋白的表达水平显著低于对照组（P〈0．05）。冷保存1h组、冷保存12h组和对照组GATA6蛋白的表达水平分别为0．90±0．04、0．75±0．06和0．98±0．11，3组比较，差异有统计学意义（F=11．651，P〈0．05）。冷保存12h组GATA6蛋白的表达水平显著低于冷保存1h组和对照组（P〈0．05）。结论长时间冷保存后大鼠肝内胆管GATA4和GATA6的表达显著降低，提示GATA4和GATA6参与了冷保存后胆管的病理生理改变过程。

关键词：缺血性胆道病变冷保存 GATA因子肝内胆管

脑死亡捐献供肺冷保存后应用离体常温灌注的效果分析

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中华外科杂志 2019年第6期57卷 460-462页

作者：杨振坤王伟赵晶晶卫栋李慧星黄健区焕财刘峰陈静瑜南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心 214023 南京医科大学附属无锡人民医院移植中心 214023 广东顺德工业设计研究院(广东顺德创新设计研究院) 528311

肺移植是治疗终末期肺病的有效方法之一。由于冷保存时间及边缘供肺应用等因素限制,肺移植发展远不如肝肾移植。离体肺灌注(ex vivo lung perfusion,EVLP)的应用,使供肺处于生理条件下,有利于减轻供肺冷缺血损伤,同时可评估修复肺功能... 详细信息

肺移植是治疗终末期肺病的有效方法之一。由于冷保存时间及边缘供肺应用等因素限制,肺移植发展远不如肝肾移植。离体肺灌注(ex vivo lung perfusion,EVLP)的应用,使供肺处于生理条件下,有利于减轻供肺冷缺血损伤,同时可评估修复肺功能。在国外,离体常温灌注广泛应用于肝、肺等器官移植手术前,并取得了良好的效果。在我国,EVLP还未系统开展。我们利用自行研究设计的肺离体常温灌注系统对冷保存后的供肺进行EVLP,并对其应用效果进行分析,以期为今后研究提供系统平台。

关键词：肺灌注冷保存供肺离体常温脑死亡捐献灌注系统

体外肺灌注和传统冷保存法对大鼠供肺质量的影响比较

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第2期38卷 151-154页

作者：潘旭峰李健潘雁顾畅郭震杨骏上海交通大学附属胸科医院胸外科上海200030 上海交通大学附属胸科医院体外循环室上海200030 上海交通大学附属胸科医院药剂科上海200030

目的·建立稳定的大鼠体外肺灌注(ex vivo lung perfusion,EVLP)模型,并且与传统的冷保存方法进行保存效果的对比。方法·对8只SD大鼠进行EVLP转流4 h,对另外8只进行传统冷保存3 h+EVLP 1h。比较2组肺生理指标、湿干比、伊文思蓝染色浓... 详细信息

目的·建立稳定的大鼠体外肺灌注(ex vivo lung perfusion,EVLP)模型,并且与传统的冷保存方法进行保存效果的对比。方法·对8只SD大鼠进行EVLP转流4 h,对另外8只进行传统冷保存3 h+EVLP 1h。比较2组肺生理指标、湿干比、伊文思蓝染色浓度的差异。结果·EVLP组的肺湿干比值显著低于传统冷保存组(5.08±0.88 vs 6.09±0.48,P=0.012),氧合指数显著高于传统冷保存组[(337.9±35.5)mmHg vs(300.5±21.6)mmHg,P=0.023],伊文思蓝浓度显著低于传统冷保存组[(36.5±20.3)μg/mL vs(65.0±29.9)μg/mL,P=0.043]。结论·EVLP作为传统冷保存法的一种有效替代方法,能够较好地延缓肺部损伤。

关键词：体外肺灌注冷保存肺移植大鼠

化合物BAM15减轻大鼠原代肝细胞冷保存损伤的实验研究

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器官移植 2019年第3期10卷 302-307页

作者：张毅张晓妹陈良郑俊杨卿傅斌生刘炜陈规划中山大学附属第三医院肝脏外科暨肝移植中心广州510630 广东省肝脏疾病研究重点实验室

目的探讨化合物BAM15对大鼠离体肝脏原代细胞冷保存损伤的影响。方法采用胶原酶灌注法提取大鼠肝脏原代细胞,根据细胞培养条件的不同,将细胞分为4组:A组(含250 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);B组(含500 nmol/L BAM15的Hibernate... 详细信息

目的探讨化合物BAM15对大鼠离体肝脏原代细胞冷保存损伤的影响。方法采用胶原酶灌注法提取大鼠肝脏原代细胞,根据细胞培养条件的不同,将细胞分为4组:A组(含250 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);B组(含500 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);C组(含1 000 nmol/L BAM15的Hibernate细胞培养液);对照组(Hibernate细胞培养液)。各组细胞均冷保存12 h。荧光显微镜下观察肝脏原代细胞的纯度。同时测定各组细胞的增殖能力、凋亡情况以及线粒体活性氧(ROS)变化情况。结果 B组和C组的细胞增殖能力均强于对照组(均为P冷损伤,其保护机制可能与BAM15减少冷缺血期间ROS生成有关。

关键词：化合物BAM15 冷保存肝脏原代细胞增殖凋亡氧化应激肝移植

低温机械灌注与单纯冷保存供肾对肾移植预后影响的Meta分析

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中国组织工程研究 2015年第42期19卷 6882-6888页

作者：胡晓燕王彦峰叶啟发陈治泉范晓礼郭毅李宁武汉大学中南医院武汉大学肝胆疾病研究院武汉大学移植医学中心移植医学技术湖北省重点实验室湖北省武汉市430071 中南大学湘雅三医院卫生部移植医学工程技术研究中心湖南省长沙市410013 武汉大学公共卫生学院流行病学教研室湖北省武汉市430071 武汉大学病毒学国家重点实验室湖北省武汉市430071

背景:目前,国内外低温机械灌注与冷保存对肾移植预后影响的文章比较多,但结论各异,且由于大多单个研究样本量存在局限,对低温机械灌注的优缺点缺乏客观评价。目的:比较低温机械灌注与冷保存对肾移植预后的影响。方法:计算机检索Pub Med... 详细信息

背景:目前,国内外低温机械灌注与冷保存对肾移植预后影响的文章比较多,但结论各异,且由于大多单个研究样本量存在局限,对低温机械灌注的优缺点缺乏客观评价。目的:比较低温机械灌注与冷保存对肾移植预后的影响。方法:计算机检索Pub Med、sino Med、EMbase、Web of Science、the Cochrane Central Register of Controlled Trials(CENTRAL)、万方数据库及中国知网,查找并筛选出所有比较低温机械灌注与冷保存对肾移植预后影响的随机对照试验(Randomized Controlled Trial,RCT),同时手检纳入文献的参考文献,检索时限均为建库至2015年3月4日。按纳入排除标准由2位评价者独立进行RCT的筛选、资料提取和质量评价后,采用RevM an(5.3.0版)软件进行Meta分析,并采用GRADEpro3.6软件进行证据质量评价。结果与结论:共纳入文献6篇,低温机械灌注保存供肾共619例,冷保存保存供肾共620例。结果显示:低温机械灌注组原发性移植物无功能发生率、功能性移植肾功能延迟恢复发生率、移植肾功能延迟恢复发生率均显著低于冷保存组(P0.05)。结果表明低温机械灌注保存供体只能降低肾移植后近期并发症的发生率,维护肾脏功能,但无法提高患者1年生存率和移植物1年存活率,相比较冷保存的保存方式,低温机械灌注对供体器官的保护无长期优势。

关键词：组织构建组织工程肾移植保存低温机械灌注冷保存 Meta分析国家自然科学基金