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军团菌的细胞内药敏试验及医院供水系统存活军团菌的定量检测

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军团菌的细胞内药敏试验及医院供水系统存活军团菌的定量检测

作者：于玲玲复旦大学

学位级别：硕士

第一部分大环内酯类和氟喹诺酮类药物对细胞内军团菌的作用目的：评估大环内酯类和氟喹诺酮类药物对巨噬细胞内嗜肺军团菌的作用。方法：采用琼脂稀释法测量大环内酯类和氟喹诺酮类药物对20株嗜肺军团菌血清1型（L. pneumophila ser... 详细信息

第一部分大环内酯类和氟喹诺酮类药物对细胞内军团菌的作用目的：评估大环内酯类和氟喹诺酮类药物对巨噬细胞内嗜肺军团菌的作用。方法：采用琼脂稀释法测量大环内酯类和氟喹诺酮类药物对20株嗜肺军团菌血清1型（L. pneumophila serogroup 1, Lp-1）的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration, MIC）。加入佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）将人类单核细胞系THP-1诱导分化成巨噬细胞样的细胞。将Lp-1与分化的THP-1细胞共培养,细胞吞噬细菌后,加入红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星4种抗菌药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC浓度时培养24h,平板计数法双份计数细胞内存活的军团菌数。结果以细菌抑制率表示,不同抗菌药物作用的差别采用Mann-Whitney U检验分析。结果：4种抗菌药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC浓度时作用24h后细菌抑制率分别为：红霉素：1×MIC（50.18±27.29）%,4×MIC（79.48±20.08）%,8×MIC（91.46±8.70）%;阿奇霉素：1×MIC（66.77±26.18）%,4×MIC（91.73±8.72）%,8×MIC（97.10±3.37）%;左氧氟沙星：1×MIC（99.84±0.25）%,4×MIC（99.99±0.02）%,8×MIC（99.99±0.01）%;莫西沙星：1×MIC（99.90±0.10）%,4×MIC（99.99±0.03）%,8×MIC（99.99±0.03）%。氟喹诺酮类药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC时对细胞内的Lp-1的抑制率显著高于大环内酯类药物（U值分别为1.0、2.0和5.0,K0.05）,左氧氟沙星和莫西沙星在上述3个浓度时对Lp-1的抑制率无明显差别（U值分别为190、183和217,P＞0.05）,阿奇霉素对细胞内Lp-1的抑制率高于红霉素（U值分别为132、128和125,P＜0.05）。结论：氟喹诺酮类药物的细胞内抗军团菌作用优于大环内酯类药物,左氧氟沙星和莫西沙星的细胞内抗军团菌作用无显著差别,阿奇霉素的胞内抗军团菌作用优于红霉素。第二部分采用EMA-qPCR方法定量检测医院供水系统存活的军团菌目的：采用EMA （Ethidium monoazide）和Real time PCR（qPCR）结合的方法（EMA-qPCR）研究上海市医院供水系统存活军团菌的污染情况,并与qPCR和培养的结果进行比较。方法：应用不同浓度的EMA与qPCR结合定量加热处理和不加热处理的军团菌,同时采用Baclight Live/Dead细菌存活试剂盒分析作为标准,确定EMA-qPCR的最佳EMA浓度。分别采用EMA-qPCR、qPCR和培养法定量检测热处理（70℃,1h）和含氯消毒剂（自由氯浓度为10mg/L,1h）处理后的军团菌的数量。随后采用上述三种方法对上海市2家医院50个病房供水系统中的军团菌进行定量检测。结果：EMA-qPCR的最佳EMA浓度为2.5ug/mL。采用EMA-qPCR、qPCR、培养法检测消毒处理后军团菌的数量（Log（Lp-1/mL））分别为：热处理4.0、7.87、0;氯处理3.8、7.61、1.34。EMA-qPCR检测医院供水系统水样中军团菌阳性的标本数为48份,其中浓度≥103GU/L的水样为40份（80.0%）,浓度≥104Gu/L的水样为7份（14.0%）,浓度≥105GU/L的水样为1份（2.0%）。采用EMA-qPCR、qPCR和培养三种方法测定军团菌属的数量分别为（7.75±22.4）×103GU/L,（2.37±6.71）x104GU/L,（3.80±25.50）x102CFU/L;嗜肺军团菌的数量分别为（8.40±2.47）×102GU/L,（1.11±2.65）×103Gu/L,（2.15±43.87）x102CFU/L。结论：EMA-qPCR可以更快速、准确地评估消毒效果。医院供水系统中存活军团菌的浓度较高,且相当大一部分军团菌处于“活着但不能被培养”的状态,需要有效的消毒方法去除军团菌污染。

关键词：嗜肺军团菌药物敏感性氟喹诺酮类大环内酯类细胞内军团菌供水系统 Real time PCR EMA 定量

军团菌双重PCR检测方法的建立及其应用研究

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中国人兽共患病杂志 2000年第5期16卷 13-16页

作者：邱琼万超群刘双任红宇卢锡华中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所北京102206 北京市安贞医院

目的　建立一种双重PCR方法 ,用于简便 ,快速检测军团菌。方法　根据军团菌 16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物 ,可以扩增 386bp 16SrRNA基因和 2 0 6bpmip基因片段。用该方法对军团菌标准参考菌株和 47份临床标本进行了检测。结果... 详细信息

目的　建立一种双重PCR方法 ,用于简便 ,快速检测军团菌。方法　根据军团菌 16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物 ,可以扩增 386bp 16SrRNA基因和 2 0 6bpmip基因片段。用该方法对军团菌标准参考菌株和 47份临床标本进行了检测。结果　通过一次PCR反应 ,不仅能够检测嗜肺军团菌 ,而且能够检测非嗜肺的军团菌 ,从而克服了单一引物应用时的不足。 2 1株对照菌株扩增阴性 ,最小检出限为 2× 10 1 cfu/ml。 47份临床标本 (包括 12份血 ,2 0份支气管肺泡灌洗液 ,7份胸水 ,8份痰 )PCR检测的阳性标本为 2 8份 (2 8/4 7) ,在临床上均支持为军团菌感染 ,高于血清抗体检测的阳性标本数 (2 4/4 7)。结论　该方法用于军团菌的检测简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性。

关键词：军团菌双重PCR 分子流行病学早期诊断

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军团菌的污染与军团病的研究

生物学通报 2004年第3期39卷 6-8页

作者：王新风江苏省淮阴师范学院生物学系江苏淮阴223300

概述了引起人类军团病的病原菌流行病学的特点和生物学特征,介绍了军团菌和军团病研究的最新进展和军团菌的控制方法以及预防军团病的措施。旨在帮助人们提高对军团菌病的认识和控制。

关键词：污染军团病发生军团菌控制方法分布传播机制

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军团菌肺炎的诊断与治疗

山东医药 1994年第11期34卷 37-38页

作者：雷振之王衍富大连医科大学附属第一医院

军团菌肺炎由军团菌属(Legionellae)细菌所致。目前已知军团菌属34个种、53个血清型,其中至少12个种与人类疾病有关。最常见的病原体为嗜肺军团菌,与95％以上的严重军团菌肺炎有关。其次是***,再次为***。

关键词：军团菌肺炎诊断治疗

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军团菌致病性研究进展

国外医学（微生物学分册） 1992年第5期15卷 213-215,231页

作者：谢皙子张吉辉山西医学院微生物学教研室

军团菌有很多不同于一般细菌的特点,本文扼要介绍军团菌致病性和毒力模型、与致病性可能有关的菌体成分和胞外产物、毒力以及细胞内寄生性的研究进展。

关键词：军团菌致病性毒力

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军团菌聚合酶链反应检测技术的研究

中国公共卫生 2003年第3期19卷 351-353页

作者：陈悦沈健民王刚毅胡陪玉上海市疾病预防控制中心防疫科 200336

军团病由于缺乏典型的临床体征以及治疗的特殊性,其实验室确诊显得尤为重要.但军团菌人工培养条件的苛刻及其生长代谢的缓慢导致临床与环境标本检出率低下,从而造成事实上的假阴性漏检,对军团病的预防与治疗十分不利.

关键词：军团菌聚合酶链反应检测技术研究

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军团菌与儿童常见疾病关系的研究

中国公共卫生 1998年第2期14卷 65-67页

作者：王素萍张秀玲王俊升原平飞李慧芬山西医科大学山西医科大学第一医院

用ＥＬＩＳＡ法对一年间住院患儿及健康体检儿童进行９种１５型军团菌ＩｇＭ抗体检测。结果显示：住院病儿军团菌ＩｇＭ抗体阳性率１３１７％，９５％ＣＩ为９７３％～１６６１％，呼吸系统疾病患儿阳性率为１１６８％，上感、... 详细信息

用ＥＬＩＳＡ法对一年间住院患儿及健康体检儿童进行９种１５型军团菌ＩｇＭ抗体检测。结果显示：住院病儿军团菌ＩｇＭ抗体阳性率１３１７％，９５％ＣＩ为９７３％～１６６１％，呼吸系统疾病患儿阳性率为１１６８％，上感、肺炎及支气管炎组分别为４０００％、９４０％及２５０％；非呼吸系统疾病阳性率１４３９％，肾脏疾病与血液病、神经系统疾病及先心病组分别为３３３３％、２４３２％及１０３４％；发热待诊组阳性率２１０５％；其它先天性疾病及外科疾病组患儿未检出军团菌ＩｇＭ抗体。住院病儿以嗜肺军团菌、米克戴德军团菌及博杰曼军团菌感染多见。肺炎组与先心病组从嗜肺军团菌感染为多，其它病种则以非嗜肺军团菌感染多见，尤以米克戴德军团菌为众。

关键词：军团菌 IgM抗体儿童病原学感染性疾病

军团菌16SrRNA聚合酶链反应方法的建立及应用

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中国公共卫生 1999年第6期15卷 535-536页

作者：郭军巧郭醒华李月久孙立华邱琼辽宁省卫生防疫站中国医科大学中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所

建立了１６ＳｒＲＮＡ基因检测军团菌的多聚酶链反应方法。扩增参考菌株染色体ＤＮＡ（Ｌ．Ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ１～１４、Ｌ．ｂｏｚｅｍａｎｎｉ、Ｌ．ｄｕｍｏｆｉ、Ｌ．ｌｏｎｇｂｅａｃｈａｅ、Ｌ．ｍｉｃｄａｄｅｉ、Ｌ．ｊｏ... 详细信息

建立了１６ＳｒＲＮＡ基因检测军团菌的多聚酶链反应方法。扩增参考菌株染色体ＤＮＡ（Ｌ．Ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ１～１４、Ｌ．ｂｏｚｅｍａｎｎｉ、Ｌ．ｄｕｍｏｆｉ、Ｌ．ｌｏｎｇｂｅａｃｈａｅ、Ｌ．ｍｉｃｄａｄｅｉ、Ｌ．ｊｏｒｄａｎｉｓ），均可检出出３８６ｂｐ的基因片段，敏感性为１０３ｃｆｕ／ｍｌ（平均值）；而扩增９株非军团菌均为阴性。对模拟血标本的检测，其敏感性可达１０２ｃｆｕ／ｍｌ。应用本检测系统检测了２４例临床标本，包括１９份血、５份胸水，阳性率为７０．８％（１７／２４）。与血清学检测和临床诊断治疗结果相符合。上述结果表明该方法敏感、特异、快速、简便。

关键词： 16SrRNA基因军团菌聚合酶链反应军团病

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军团菌感染与2个细胞因子基因多态性关系

中国公共卫生 2012年第5期28卷 623-625页

作者：智霞萍王素萍太原市第四人民医院院感科山西030053 山西医科大学公共卫生学院

目的探索肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-308位点、白介素-1β(IL-1β)-511位点基因多态性与军团菌感染的关系。方法将32例军团菌感染者作为病例组,随机抽取100例军团菌检测阴性的肺部感染者为患者对照组,同期收集70例健康体检者为健康人对照... 详细信息

目的探索肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-308位点、白介素-1β(IL-1β)-511位点基因多态性与军团菌感染的关系。方法将32例军团菌感染者作为病例组,随机抽取100例军团菌检测阴性的肺部感染者为患者对照组,同期收集70例健康体检者为健康人对照组,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测3组TNF-α基因-308位点、IL-1β基因-511位点的单核苷酸多态性。结果病例组TNF-α-308基因型GG、GA、AA分别占75%、25%、0%,患者对照组GG、GA、AA基因型分别占87%、13%、0%,健康人对照组GG、GA、AA基因型分别占68.6%、31.4%、0%;病例组与患者对照组比较、病例组与健康人对照组比较,TNF-α-308位点基因型和等位基因频率差异无统计学意义(χ2=0.437、0.362,P=0.509、0.548;χ2=2.609、2.384,P=0.106、0.123);病例组IL-1β-511基因型CC、CT、TT分别占:0%、53.1%、46.9%,患者对照组CC、CT、TT基因型分别占3.4%、48.3%、48.3%,健康人对照组CC、CT、TT基因型分别占10%、51.4%、38.6%,3组比较,IL-1β-511位点基因型和等位基因频率差异无统计学意义(χ2=4.466,P=0.334;χ2=2.420,P=0.298)。结论 TNF-α-308位点、IL-1β-511位点的基因多态性与军团菌感染无关,TNF-α基因和IL-1β基因不是军团菌感染的易感基因。

关键词：军团菌肿瘤坏死因子-α 白介素-1β 单核苷酸多态性