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免疫球蛋白a在人肾小球系膜细胞中的合成与分泌

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北京大学学报（医学版） 2017年第6期49卷 948-953页

作者：邓会马骏凡景子洋梁耀先阿拉塔刘洋邱晓彦王悦北京大学第三医院肾内科北京100191 北京大学基础医学院免疫学系北京100191

目的:探讨人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)中是否表达免疫球蛋白a(immunoglobulin A,Ig A)。方法:培养人HMCs细胞系,以免疫荧光染色检测Igα、Igκ、Igλ在系膜细胞中的表达;以反转录聚合酶链式反应(reverse transcriptio... 详细信息

目的:探讨人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)中是否表达免疫球蛋白a(immunoglobulin A,Ig A)。方法:培养人HMCs细胞系,以免疫荧光染色检测Igα、Igκ、Igλ在系膜细胞中的表达;以反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和DNA测序检测HMCs中Igα、Igκ、Igλ恒定区转录本表达;以Western blot方法检测细胞裂解液及培养上清液中Igα、Igκ、Igλ蛋白水平表达;以jacalin为配体的亲和层析纯化上清液蛋白质,以蛋白质谱检测纯化的蛋白氨基酸序列。结果:免疫荧光染色检测到HMCs细胞浆Igα、Igκ、Igλ的阳性表达;RT-PCR检测到细胞内Igα1、Igα2重链、Igκ轻链、Igλ轻链恒定区转录本表达,且其核苷酸序列与美国国立生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)数据库相应的mRNA序列比对,同源性分别达到99%、97%、98%和97%;Western blot检测到细胞内Igα1、Igα2和Igλ蛋白水平的表达,Igκ目前检测为阴性;细胞上清液中可见完整Ig A分子表达;以jacallin为配体亲和层析纯化的培养上清液中的Ig A,蛋白质谱测序所得的氨基酸片段序列与NCBI数据库比对,显示HMCs分泌的蛋白质与B细胞表达的Igα1恒定区52~104之间53个氨基酸、154~221之间68个氨基酸、以及276~327之间52个氨基酸的序列完全相同,与Igα2重链恒定区52~113之间62个氨基酸、151~204之间54个氨基酸、以及251~314之间64个氨基酸的序列完全相同,提示系膜细胞可以将合成的Ig A分泌到胞外。结论:HMCs可能合成并分泌Ig A。

关键词：人肾小球系膜细胞免疫球蛋白a 蛋白质谱 DNA测序

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流动注射免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白a

分析化学 2004年第6期32卷 724-728页

作者：汪敬武王兆喜杨伟平南昌大学化学系南昌大学医院南昌330047 温州325027 温州师范学院

基于可溶性抗原和抗体在液相中特异性结合 ,形成一定大小的抗原抗体免疫复合物 ,使反应液出现浊度。采用流动注射光度分析法联用单片机 ,优化了实验条件 ;采用合并带技术节省试剂与试样 ,寻找到了抗原抗体反应的最佳浓度比与最佳反应... 详细信息

基于可溶性抗原和抗体在液相中特异性结合 ,形成一定大小的抗原抗体免疫复合物 ,使反应液出现浊度。采用流动注射光度分析法联用单片机 ,优化了实验条件 ;采用合并带技术节省试剂与试样 ,寻找到了抗原抗体反应的最佳浓度比与最佳反应时机 ,从而建立了流动注射免疫比浊测定人体血清免疫球蛋白a(IgA)的新方法。整个测试系统联用单片机 ,使测试过程实现程序操作。本法简便、快速 ,节省试剂和试样 ,进样频率高 ,每小时进样 4 0次

关键词：流动注射免疫比浊免疫球蛋白a

免疫纳米金共振散射光谱探针检测痕量免疫球蛋白a

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化学学报 2008年第9期66卷 1047-1052页

作者：蒋治良王娜梁爱惠广西师范大学环境与资源学院桂林541004 桂林工学院材料与化学工程系桂林541004

将纳米金的共振散射效应和纳米金标记免疫反应结合起来建立了一种测定免疫球蛋白a的新方法.采用柠檬酸三钠改良法制备了粒径约为10nm的纳米金,用于标记羊抗人免疫球蛋白a获得了免疫球蛋白a(IgA)的免疫共振散射光谱探针.在pH5.6的Na2HPO4... 详细信息

将纳米金的共振散射效应和纳米金标记免疫反应结合起来建立了一种测定免疫球蛋白a的新方法.采用柠檬酸三钠改良法制备了粒径约为10nm的纳米金,用于标记羊抗人免疫球蛋白a获得了免疫球蛋白a(IgA)的免疫共振散射光谱探针.在pH5.6的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液和PEG6000存在下,金标羊抗人免疫球蛋白a与IgA产生特异性结合,引起金纳米粒子聚集,导致金纳米粒子580nm处的共振散射峰增强.对免疫分析的条件进行了优化,IgA浓度在0.0054～1.35μg·mL-1范围内与580nm处的共振散射强度呈线性关系,方法的检测限(3σ)为2.0ng·mL-1,相关系数为0.9983.用于定量分析人血清中的免疫球蛋白a,结果满意.

关键词：免疫球蛋白a 纳米金标记共振散射光谱探针

不孕母猪子宫黏膜组织结构及其分泌物中免疫球蛋白a水平的研究

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中国兽医科技 2002年第1期32卷 22-23页

作者：杨倩张标顿继凤南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用组织学及双抗夹心ELISA方法分别检测不孕母猪的子宫、阴道黏膜组织学变化及阴道分泌物中的分泌型免疫球蛋白a(SIgA)的水平。结果表明 ,多数不孕母猪的子宫黏膜组织上皮细胞发生变性、坏死、崩解及脱落 ;子宫黏膜固有层中腺体较少 ,... 详细信息

应用组织学及双抗夹心ELISA方法分别检测不孕母猪的子宫、阴道黏膜组织学变化及阴道分泌物中的分泌型免疫球蛋白a(SIgA)的水平。结果表明 ,多数不孕母猪的子宫黏膜组织上皮细胞发生变性、坏死、崩解及脱落 ;子宫黏膜固有层中腺体较少 ,淋巴样细胞减少 ,上皮下淋巴细胞排列不整齐 ;阴道分泌物中SIgA水平低于正常母猪 ,但差异不显著。

关键词：子宫黏膜不孕母猪分泌型免疫球蛋白a 组织结构分泌物

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免疫球蛋白a等的免疫共振散射光谱分析

免疫球蛋白A等的免疫共振散射光谱分析

作者：王娜广西师范大学

学位级别：硕士

第一部分:绪论综述了近年来共振散射技术在分析化学和液相金纳米微粒研究中的应用;介绍了金纳米微粒的制备、金标记在免疫分析中的应用以及免疫球蛋白a与转铁蛋白的分析进展。引用文献212篇。第二部分:IgA免疫复合物微粒的共振散射光谱... 详细信息

第一部分:绪论综述了近年来共振散射技术在分析化学和液相金纳米微粒研究中的应用;介绍了金纳米微粒的制备、金标记在免疫分析中的应用以及免疫球蛋白a与转铁蛋白的分析进展。引用文献212篇。第二部分:IgA免疫复合物微粒的共振散射光谱研究及其分析应用在pH6.2的Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液中,及聚乙二醇4000存在下,免疫球蛋白a(IgA)与羊抗人免疫球蛋白a血清发生特异性结合,形成了粒径约为1100nm的抗原-抗体免疫复合物微粒;它在340nm,390nm,420nm,450nm,470nm,520nm附近有6个共振散射峰。考察了pH值、不同分子量聚乙二醇、羊抗人IgA血清用量、温度及反应时间对共振散射光谱测定IgA的影响。在选定条件下,IgA浓度在0.133-4.67μg? mL-1范围内均与340nm和470nm处的共振散射强度呈线性关系,其回归方程分别为ΔI340 nm =18.61CIgA+3.19、ΔI470nm=18.57CIgA+6.51,检出限分别为0.068μg?mL-1、0.072μg?mL-1。该法已用于人血清中IgA的测定,并与免疫比浊法测定结果作线性回归分析,其斜率、截距和相关系数分别为1.064、-0.213和0.9299,结果满意。第三部分:金标记免疫共振散射光谱法检测痕量免疫球蛋白a采用柠檬酸三钠改良法制备了粒径约为10.0nm的纳米金,并用于标记羊抗人免疫球蛋白a。在pH 5.6的Na2HPO4- C6H8O7缓冲溶液和PEG存在下,金标羊抗人免疫球蛋白a与免疫球蛋白a(IgA)产生特异性结合生成免疫金复合物,导致580nm处金纳米粒子的共振散射峰增强。免疫球蛋白a浓度在0.0054-1.35μg·mL-1范围内与580nm处的共振散射强度成线性关系,方法的检出限为4.18ng·mL-1,用于定量分析人血清中的免疫球蛋白a,结果满意。第四部分:免疫共振散射光谱分析法测定转铁蛋白在pH 5.0的Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液及聚乙二醇6000存在下,羊抗人转铁蛋白与相应的抗原转铁蛋白发生特异性结合,生成抗体抗原免疫复合物,导致体系在340nm与470nm处的共振散射峰增强,当转铁蛋白(Tf)浓度在0.10-2.50μg/mL范围内,随着转铁蛋白浓度的增加,340nm和470nm处的共振散射强度线性增强,其检出限分别为0.049μg/mL、0.042μg/mL,用于定量分析人血清中的转铁蛋白,结果满意。第五部分:免疫球蛋白M的共振散射光谱分析法在聚乙二醇存在下IgM与IgM抗体在pH5.0的柠檬酸-Na2HPO4缓冲溶液中特异性反应生成免疫抗体抗原复合物,导致体系在340nm处的共振散射峰增强,建立了一个新的测定IgM的免疫共振散射光谱法。IgM的浓度在0.15-9.33μg/mL的范围内,与340nm处的共振散射强度呈线性关系。该方法具有试样用量少、简单快速的特点,用于定量分析人血清中的免疫球蛋白M,结果较为满意。

关键词：免疫球蛋白a 转铁蛋白共振散射金标记免振共振散射光谱分析

类风湿关节炎中二胺氧化酶及分泌型免疫球蛋白a与外周血淋巴细胞亚群相关性研究

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中华风湿病学杂志 2022年第10期26卷 666-672页

作者：苏芮吴瑞荷丁婷婷穆艳飞李娜闫欢欢李小峰王彩虹山西医科大学第二医院风湿免疫科太原030001

目的分析RA患者外周血肠道黏膜屏障功能相关指标二胺氧化酶(DAO)及分泌型免疫球蛋白a(sIgA)的表达及其与外周血淋巴细胞表型及CD4^(+)T细胞亚群的相关性及临床意义。方法收集2021年1月至10月于山西医科大学第二医院风湿免疫科住院的40... 详细信息

目的分析RA患者外周血肠道黏膜屏障功能相关指标二胺氧化酶(DAO)及分泌型免疫球蛋白a(sIgA)的表达及其与外周血淋巴细胞表型及CD4^(+)T细胞亚群的相关性及临床意义。方法收集2021年1月至10月于山西医科大学第二医院风湿免疫科住院的40例初发RA患者,并选取性别、年龄匹配的20名健康志愿者作为对照。采用ELISA检测外周血DAO及sIgA的表达,流式细胞术检测其外周血淋巴细胞表型及CD4^(+)T亚群的绝对计数,同时收集RA患者及对照组的临床资料和实验室检查结果。采用t检验、非参数检验及相关性分析对数据进行统计学分析。结果①与健康对照组比较,RA患者血清DAO水平明显升高[205(164,251)ng/ml与364(276,483)ng/ml,Z=-4.48,P蛋白抗体(MCV)、APF及AKA阳性组RA患者血清sIgA水平均高于阴性组[3.99(2.99,5.58)×10^(5)ng/ml与2.73(2.29,3.05)×10^(5)ng/ml,Z=-2.55,P=0.011;5.49(3.26,5.70)×10^(5)ng/ml与3.12(2.29,4.04)×10^(5)ng/ml,Z=-2.28,P=0.023;4.07(3.19,5.65)×10^(5)ng/ml与2.88(2.24,3.86)×10^(5)ng/ml,Z=-2.42,P=0.017],而各组之间DAO水平差异无统计学意义。⑤合并肺间质纤维化组较未合并者DAO水平明显升高[421(216,528)ng/ml与191(150,223)ng/ml,Z=-2.81,P=0.005],其他各组之间DAO及sIgA水平差异无统计学意义。结论RA患者DAO升高,sIgA降低提示存在肠道黏膜屏障受损,同时外周血Th17升高可能参与肠道黏膜屏障受损过程。

关键词：关节炎,类风湿 T淋巴细胞,辅助诱导 T淋巴细胞,调节性二胺氧化酶免疫球蛋白a

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上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白a

中华肿瘤杂志 2001年第6期23卷 451-453页

作者：黎明唐敏邓锡云曹亚湖南医科大学肿瘤研究所长沙410078

目的　证实上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白 ,确定所表达的免疫球蛋白的类别。方法　采用免疫组化、Westernblot及ELISA等方法检测MCF 7(人乳腺癌细胞系 )、SW480 (人结肠癌细胞系 )、MGC(人胃癌细胞系 )、HeLa(人宫颈癌细胞系 )、CNE... 详细信息

目的　证实上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白 ,确定所表达的免疫球蛋白的类别。方法　采用免疫组化、Westernblot及ELISA等方法检测MCF 7(人乳腺癌细胞系 )、SW480 (人结肠癌细胞系 )、MGC(人胃癌细胞系 )、HeLa(人宫颈癌细胞系 )、CNE1 LMP1(稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系 )、HNE2 (鼻咽癌细胞系 )和Tet on LMP1 HNE2 (受四环素诱导可调控的鼻咽癌细胞系 )等 7种上皮来源的细胞系的细胞蛋白提取液及培养上清中的免疫球蛋白。结果　在 7种上皮来源的瘤细胞系的蛋白提取液及培养上清中均检测到了人免疫球蛋白a。结论　上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白a。

关键词：肿瘤肿瘤细胞表达免疫球蛋白a 上皮癌细胞系 ELISA

抗糖基化异常免疫球蛋白a1抗体免疫球蛋白G在儿童IgA肾病临床的应用价值

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中华儿科杂志 2017年第9期55卷 663-667页

作者：周楠张红刘小荣孙嫱孟群陈植沈颖国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院肾病科儿童慢性肾脏病与血液净化北京市重点实验室儿科重大疾病研究教育部重点实验室 100045 北京儿童医院顺义妇儿医院

目的探讨儿童IgA肾病中血糖基化异常免疫球蛋白a1（GdIgA1）、抗GdIgA1抗体IgG（GdIgA1-IgG）水平及其在IgA肾病临床应用中的价值.方法选取首都医科大学附属北京儿童医院肾病科2013年8月至2015年12月确诊原发IgA肾病儿童33例作为研究... 详细信息

目的探讨儿童IgA肾病中血糖基化异常免疫球蛋白a1（GdIgA1）、抗GdIgA1抗体IgG（GdIgA1-IgG）水平及其在IgA肾病临床应用中的价值.方法选取首都医科大学附属北京儿童医院肾病科2013年8月至2015年12月确诊原发IgA肾病儿童33例作为研究组,男∶女=2∶1,年龄（9.7±2.9）岁,选取本院同期病理诊断非IgA肾病儿童38例（包括局灶性节段性肾小球肾炎、微小病变性肾病、Alport综合征、薄基底膜肾病）为疾病对照组,选取正常儿童35例作为正常对照组.采用酶联免疫吸附法测定三组血GdIgA1、GdIgA1-IgG水平,应用方差分析分析各组间GdIgA1、GdIgA1-IgG水平的差异,并进一步做ROC曲线分析两项指标在疾病诊断中的特异度和敏感度;收集IgA肾病患者临床蛋白尿水平及病理Lee氏分级,通过相关性分析,分析GdIgA1、GdIgA1-IgG水平与蛋白尿及肾脏病理分级间的相关性.统计软件采用SPSS 18.0,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果（1）GdIgA1 （mg/L）在IgA肾病组、疾病对照组和正常对照组中分别为1.728±0.456、1.123±0.461、1.410 ±0.905（F=15.04,P＜ 0.001）;GdIgA1-IgC （g/L）在三组中分别为1.299±0.499、1.111±0.549、0.628±0.142（F=76.96,P＜0.001）;（2）IgA肾病组与正常对照组间,CdIgA1的ROC曲线下面积为0.765,其特异度为0.943,敏感度为0.697;GdIgA1-IgG的ROC曲线下面积为0.969,其特异度为0.971,敏感度为0.939.但在IgA肾病组与疾病对照组间两指标的诊断特异度和敏感度下降.血GdIgA1-IgG水平与尿蛋白定量（r=0.364）及病理Lee氏分级（r=0.392）呈低度相关.结论 IgA肾病儿童血GdIgA1、GdIgA1-IgG水平较正常对照组升高,IgA肾病与正常对照组间,GdIgA1、GdIgA1-IgG均有较高诊断特异度,而敏感度GdIgA1-IgG更高.血GdIgA1-IgG水平与尿蛋白定量及肾脏病理Lee氏分级呈低度相关.

关键词：肾小球肾炎 IGA 糖基化免疫球蛋白a 免疫球蛋白G 儿童

β-胡萝卜素对妊娠母猪粪便、血清和乳汁中免疫球蛋白a浓度的影响

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动物营养学报 2016年第2期28卷 572-578页

作者：张晓音吉昱斌李雁强吴旻马思慧郑鑫吉林农业大学动物科学技术学院长春130118

本试验旨在研究妊娠母猪后期饲粮中添加β-胡萝卜素对妊娠母猪粪便中β-胡萝卜素含量及粪便、血清和乳汁中免疫球蛋白a(Ig A)浓度的影响。将体况相近、胎次相同的妊娠母猪30头随机分成3组,每组10头猪,饲养60 d。对照组饲喂基础饲粮,半... 详细信息

本试验旨在研究妊娠母猪后期饲粮中添加β-胡萝卜素对妊娠母猪粪便中β-胡萝卜素含量及粪便、血清和乳汁中免疫球蛋白a(Ig A)浓度的影响。将体况相近、胎次相同的妊娠母猪30头随机分成3组,每组10头猪,饲养60 d。对照组饲喂基础饲粮,半月组和一月组分别在预产期前半个月和1个月的基础饲粮中添加200 mg/kgβ-胡萝卜素。用高效液相色谱法测定各组粪便中β-胡萝卜素含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定粪便、血清和乳汁中Ig A浓度。结果表明:半月组和一月组粪便中β-胡萝卜素含量高于对照组,大部分差异显著(P0.05)。由此可见,饲粮添加β-胡萝卜素可以增加妊娠母猪粪便中β-胡萝卜素含量,提高血清和乳汁中Ig A浓度,从而增强妊娠母猪的免疫功能。

关键词： β-胡萝卜素妊娠母猪高效液相色谱免疫球蛋白a