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免疫斑点法检测登革热病毒抗体

中华医学检验杂志 1992年第6期15卷 351-352页

作者：罗瑞仙徐立群 510180，广州市医药卫生研究所广州市卫生防疫站中山医科大学

介绍免疫斑点酶法在登革热血清诊断上的应用。经探索多种实验条件,建立了快速、简便、敏感检测登革热抗体的斑点法,其中一步法将温度提高到43℃2小时便出结果,抗原膜可在室温保存4个月以上,并且该法对登革热检测具有较好的特异性和敏感... 详细信息

介绍免疫斑点酶法在登革热血清诊断上的应用。经探索多种实验条件,建立了快速、简便、敏感检测登革热抗体的斑点法,其中一步法将温度提高到43℃2小时便出结果,抗原膜可在室温保存4个月以上,并且该法对登革热检测具有较好的特异性和敏感性。本法操作简单,结果易判断,不受主观因素影响,不需特殊设备,是目前登革热实验诊断及流行病学调查的一种比较理想的方法。

关键词：免疫斑点法登革热病毒抗体

免疫斑点法快速诊断视神经脊髓炎谱系疾病的临床应用研究

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免疫斑点法快速诊断视神经脊髓炎谱系疾病的临床应用研究

作者：毕锦福建医科大学

学位级别：硕士

背景及目的视神经脊髓炎谱系疾病(Neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)是一种主要累及视神经和脊髓、以高复发率和高致残性为特点的中枢炎性脱髓鞘性疾病。NMOSD患者自然病史通常为多相病程,且随着发病次数的增加,残疾系数... 详细信息

背景及目的视神经脊髓炎谱系疾病(Neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)是一种主要累及视神经和脊髓、以高复发率和高致残性为特点的中枢炎性脱髓鞘性疾病。NMOSD患者自然病史通常为多相病程,且随着发病次数的增加,残疾系数则越高,而早期诊断,尽早干预可提高NMOSD患者生活质量。NMOSD的诊断有赖于患者的临床表现、实验室检查、影像学检查等,其中针对水通道蛋白(Aquaporin-4,AQP4)自身抗体检测至关重要。2005年,AQP4被证明是视神经脊髓炎免疫球蛋白G(NMO-Ig G,或AQP4-Ig G)的抗原靶点,这一发现促进了视神经脊髓炎疾病扩展为视神经脊髓炎谱系疾病,并与MS等其他脱髓鞘疾病分开来。2015年IPND小组NMOSD诊断标准将基于细胞的免疫荧光法(cell-based assay,CBA)作为检测AQP4抗体的金标准;也有一些实验室利用高表达该抗原的神经组织(如猴神经)切片,即间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IIFA)以检测AQP4抗体。但上述2种检测方法对实验室条件以及检测人员的要求较高,无法应用于基层医院;同时检测的周期较长,无法辅助急症患者的快速诊断。部分实验室使用重组AQP4蛋白作为抗原,利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测AQP4抗体,但AQP4是一种四聚体的跨膜蛋白,正确的空间构象结构对自身抗体的识别至关重要,而在重组蛋白的表达过程中往往因为翻译折叠不正确,形成错误的构象,影响检测的特异性及灵敏性。本研究所采用的免疫斑点法是利用纯化AQP4-细胞膜蛋白复合物作为抗原以检测患者样本中的特异性AQP4抗体,该方法保留了AQP4空间构象,且检测耗时短,过程不需依赖特殊的仪器设备,只需肉眼判读,对操作人员要求低,适合基层医院推广使用,同时能够实现疾病的快速诊断。本研究旨在验证这种快速、简便的新型AQP4抗体检测方法的敏感性及特异性,推进临床应用。方法选取2019年2月-2020年11月福建医科大学附属第一医院中枢炎性脱髓鞘疾病队列中诊断为NMOSD(AQP4抗体阳性)患者及健康对照受试者233例。所有受试者均经过CBA法对AQP4抗体进行检测,选取阳性组100例,阴性对照组100例随机编盲后进行免疫斑点法检测。本临床试验经过福建医科大学附属第一医院伦理委员会伦理审查,并在Clincial Trail注册(NCT04388072)。结果1、盲法通过免疫斑点法进行AQP4抗体检测,100例阳性组中99例免疫斑点法检测为阳性(99%),1例阴性(1%),100例阴性对照组中99例免疫斑点法检测为阴性(99%)、1例抗体检测阳性(1%)。与CBA法检测相比,免疫斑点法敏感性99%(95%CI 0.94～1),特异性99%(95%CI 0.94～1),阳性似然比99(95%CI 14～696),阴性似然比0.01(95%CI 0.001～0.71),ROC曲线AUC=0.99(95%CI 0.97～1),kappa系数98%(95%CI 0.953～1),>75%,认为两种检测方法检测效能一致。2、对免疫斑点法抗体检测结果根据颜色深浅评分,采用Spearman检测血清AQP4抗体滴度进行相关性分析(r=0.523,p免疫斑点法在检测AQP4抗体的效能与CBA法具有一致性,是有潜力的向基层医院推广的AQP4抗体检测试剂盒,有望对NMOSD进行快速精准诊断,以尽快开展干预治疗,防止疾病进一步恶化。免疫斑点法试纸条颜色深浅与血清AQP4抗体滴度存在相关性,可预测患者血清AQP4抗体滴度。

关键词：视神经脊髓炎谱系疾病 AQP4抗体免疫斑点法 CBA法临床应用

单抗免疫斑点法和组织印迹法检测侵染蝴蝶兰的建兰花叶病毒

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微生物学通报 2009年第10期36卷 1614-1617页

作者：董晓辉孟春梅黎军英吴建祥荣松张超洪健浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029 浙江传化生物技术有限公司浙江杭州311231

应用抗建兰花叶病毒（CymMV）的单克隆抗体，建立了快速检测蝴蝶兰病样的免疫斑点法（Dot—ELISA）和组织印迹法（Tissueblot—ELISA）。CymMV单抗稀释8000倍时．Dot—ELISA可检出病毒粗汁液的最大稀释度为1：10240；Tissueblot—ELISA... 详细信息

应用抗建兰花叶病毒（CymMV）的单克隆抗体，建立了快速检测蝴蝶兰病样的免疫斑点法（Dot—ELISA）和组织印迹法（Tissueblot—ELISA）。CymMV单抗稀释8000倍时．Dot—ELISA可检出病毒粗汁液的最大稀释度为1：10240；Tissueblot—ELISA中样品1次平切后1～5次印迹与Dot—ELISA样品1：80稀释结果相当，6-8次印迹与Dot—ELISA1：320稀释结果相当，前8次印迹均可以得到满意的检测效果。Tissueblot—ELISA的灵敏度略低于Dot—ELISA，使用单抗的结果比多抗特异性强，操作更为简便，适合大量兰花样品的快速检测。

关键词：建兰花叶病毒免疫斑点法组织印迹法单克隆抗体

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碱性磷酸酶免疫斑点法的应用

中国免疫学杂志 1989年第3期5卷 51-52页

作者：张克郑珊珊吴安然中国医学科学院基础医学研究所免疫学研究室世界卫生组织免疫合作中心中国医学科学院基础医学研究所免疫学研究室世界卫生组织免疫合作中心北京

免疫斑点法(Dot Immunobinding As-say,DIBA)近年来已广泛用于免疫学上的各种测定。其原理是利用硝酸纤维膜(NC)为固相支持物,进行抗原抗体反应。结合在NC上的抗体——酶结合物通过将底物分解成不溶性产物而沉积,形成斑点。待测抗体(或... 详细信息

免疫斑点法(Dot Immunobinding As-say,DIBA)近年来已广泛用于免疫学上的各种测定。其原理是利用硝酸纤维膜(NC)为固相支持物,进行抗原抗体反应。结合在NC上的抗体——酶结合物通过将底物分解成不溶性产物而沉积,形成斑点。待测抗体(或抗原)含量的高低可通过斑点颜色的深浅判断。近年来常用的是辣根过氧

关键词：碱性磷酸酶 AP 抗体 NC 特异性免疫斑点法小鼠小家鼠对倍稀释

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

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临床检验杂志 2002年第6期20卷 358-359页

作者：吕贯廷郭晏海卢冰陈蕤李丁阎小君中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断应用研究所西安710032 九江市卫生防疫站

目的　建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒 (HCMV)抗 pp15 0抗体的胶体金免疫斑点法。方法　采用Frens法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将本所利用基因工程技术生产的 pp15 0抗原固定于 0 45 μm孔径的硝酸纤维... 详细信息

目的　建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒 (HCMV)抗 pp15 0抗体的胶体金免疫斑点法。方法　采用Frens法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将本所利用基因工程技术生产的 pp15 0抗原固定于 0 45 μm孔径的硝酸纤维素膜上 ,制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp15 0IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合 ,然后滴加胶体金标记的SPA ,在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果　胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了 2 0 0份临床确诊血清标本中抗 pp15 0IgG抗体 ,胶体金法的特异性和敏感性分别为 92 %和 90 %。结论　胶体金免疫斑点法检测血清中的抗 pp15 0抗体特异性、灵敏度较高 ,简便快速。

关键词：胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒 pp150抗体

单抗免疫斑点法和组织印迹法检测百合无症病毒

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微生物学通报 2006年第2期33卷 25-29页

作者：李燕宏吴建祥洪健周雪平叶美琴浙江大学生物技术研究所杭州310029 浙江丽水市农业局丽水323000

应用抗百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)的单克隆抗体,建立了快速检测田间样品的免疫斑点法(Dot-ELISA)和组织印迹法(Tissueblot-ELISA)体系。LSV单抗稀释2,000倍时,Dot-ELISA中病叶粗汁液可被检出的最大稀释度为1∶640。Tissueblot-ELISA中样品一次平切后第1次印迹与Dot-ELISA样品1∶40稀释的结果相当,前4次印迹均可获得满意的显色效果。常规Tissueblot-ELISA的灵敏度低于Dot-ELISA,但用丙酮处理点过样的硝酸纤维素膜后,二者的灵敏度相当,且Tissueblot-ELISA操作更简便,适合田间大量样品的快速检测。

关键词：百合无症病毒单克隆抗体免疫斑点法组织印迹法

一种敏感的用于诊断沙眼衣原体感染的免疫斑点法

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地方病译丛 1990年第1期11卷 46-49页

作者：吴笃卿

在沙眼衣原体感染的诊断中,免疫学技术与传统的培养法相比,更具有吸引力,因其具有快速。

关键词：免疫斑点法沙眼衣原体感染诊断

检测甲型肝炎IgM抗体的生物素亲合素增强免疫斑点法

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上海免疫学杂志 1992年第4期12卷 233-235页

作者：裴英陈淑清王在贵林依春空军兰州医院检验科兰州730070

用ABC-DIBT(亲合素—生物素—辣根过氧化物酶免疫斑点结合技术)方法检测抗HAV-IgM在国内尚未见同类报道。用本方法、ELISA法和IFA法共检测标本650例,在甲肝患者血清组、非甲肝患者血清组三种方法间的x^2=57.87p0.05。阻断试验和重复性... 详细信息

用ABC-DIBT(亲合素—生物素—辣根过氧化物酶免疫斑点结合技术)方法检测抗HAV-IgM在国内尚未见同类报道。用本方法、ELISA法和IFA法共检测标本650例,在甲肝患者血清组、非甲肝患者血清组三种方法间的x^2=57.87p0.05。阻断试验和重复性试验等,表明本方法的特异性好,结果可靠。本法操作简便,不需特殊仪器,结果容易判定,如能生产出统一的标准试剂,则对甲型肝炎的快速诊断具有很大的实际意义。

关键词：甲型肝炎抗体 IgM 免疫斑点法

应用免疫斑点法检测不同工艺灭活的乙肝血源疫苗中的前S_1和S_2蛋白

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中国生物制品学杂志 1991年第2期4卷 57-59页

作者：赖建平何德娟胡宗汉卫生部武汉生物制品研究所武昌430060 中国药品生物制品检定所

作者应用前 S_1、前 S_2和 HBsAg/a 单克隆抗体,用免疫斑点法(Immuno-spot)检测同一批的乙肝表面抗原分别经加热灭活和三步化学灭活后的前 S_1和前 S_2蛋白保留情况,比较了两种工艺对前 S_1和前 S_2蛋白的影响。结果表明;加热灭活可保留... 详细信息

作者应用前 S_1、前 S_2和 HBsAg/a 单克隆抗体,用免疫斑点法(Immuno-spot)检测同一批的乙肝表面抗原分别经加热灭活和三步化学灭活后的前 S_1和前 S_2蛋白保留情况,比较了两种工艺对前 S_1和前 S_2蛋白的影响。结果表明;加热灭活可保留前 S_1和前 S_2蛋白,三步化学灭活使前 S_1和前 S_2蛋白丢失,从抗原组成上看,加热灭活后的抗原更接近自然抗原。首次报告了含有前 S_1蛋白的乙肝疫苗,并对前 S_1和前 S_2蛋白在乙肝血源疫苗中的可能作用进行了讨论。

关键词：乙肝血源疫苗前 S1蛋白前 S2蛋白免疫斑点法