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复肌宁汤治疗眼肌型重症肌无力网络药理学研究及免疫指标调控研究

复肌宁汤治疗眼肌型重症肌无力网络药理学研究及免疫指标调控研究

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作者：王娟中国中医科学院

学位级别：硕士

研究背景重症肌无力是一种神经肌肉接头疾病,主要累及神经肌肉接头处突触后膜,影响神经冲动在此处的传递,主要表现为骨骼肌的无力和易疲劳。MG患者全身骨骼肌均可受累,眼外肌各肌群的受累多见,对称或非对称性上睑下垂、复视是最常见的... 详细信息

研究背景重症肌无力是一种神经肌肉接头疾病,主要累及神经肌肉接头处突触后膜,影响神经冲动在此处的传递,主要表现为骨骼肌的无力和易疲劳。MG患者全身骨骼肌均可受累,眼外肌各肌群的受累多见,对称或非对称性上睑下垂、复视是最常见的首发症状。改良的Osserman分型中,I型眼肌型MG是指病变仅局限于眼外肌,其他肌群不受累者。眼肌型MG患者在西方国家所占比例相对较小,占MG人群的17%-25%,但在亚洲地区则明显高于西方国家,其中我国MG的住院病人中眼肌型者占58%。眼肌型MG患者发展为全身型者所占的比例很高,其中50%-60%患者可在半年内进展为全身型,1年内进展者占80%,只有10%的眼肌型MG患者始终表现为眼肌型。针对眼肌型MG患者的治疗争议较大,中医中药在MG治疗方面取得些许进展,疗效确切,不良反应小。著名中医学家尚尔寿教授认为MG病位主要在肝,病因与风（内风和外风）密切相关,提出应从肝从风论治MG,治疗以滋补肝肾、平肝熄风、搜风通络为主,拟定复肌宁汤为基本方随症加减。尚老认为眼肌型MG患者通常表现为眼睑下垂和复视,而中医学认为肝与目关系密切,目为肝之窍,肝受血而能视,只有肝脏功能正常才能保证眼睛的正常功能,因此可以通过观察眼部症状的变化推测肝脏内在所发生的变化。肝主筋,为罢极之本,筋脉需要依赖肝血的充养才能筋体柔和,运动强健有力,并且能很好的耐受疲劳,而MG患者出现骨骼肌的无力和易疲劳,与肝脏所主的功能吻合。所以MG患者病位在肝。眼肌型MG患者病变累及头面部眼外肌,其正是风邪容易侵袭的部位;MG患者还可出现交替性上睑下垂,部分患者病情变化较快,与“风者善行而数变”的特性类似。所以MG的发病与风密切相关。我国传统中药方剂在治疗疾病方面具有独特的优势,但就是因为其多成分、多靶点的作用机制,限制其开发和利用。近年来网络药理学的发展也许是中药复方发展的新途径。网络药理学主要以系统生物学为基础,打破原来重视药物分子精准对应单一靶点的治疗模式,强调对信号通路多个环节、多个方面进行调节,着重治疗药物作用于多个靶点的网络分析。我们应用网络药理学的技术,研究中药复方中所包含的多个有效成分,预测针对疾病的多个靶点及具体作用机制。研究目的1)运用网络药理学技术预测复肌宁汤治疗MG的有效化学成分可能对应的靶点及作用机制;2)通过比较复肌宁汤治疗前后眼肌型MG患者的临床绝对计分与中医证候计分,观察复肌宁汤的临床疗效;通过比较治疗前后眼肌型MG患者外周血中AChR-Ab的水平,T细胞亚群水平的变化,研究复肌宁汤治疗眼肌型MG患者的免疫调控作用。研究方法1)通过TCMDatabase@Taiwan数据库,整理去除重复数据后,获取八味中药有效化学成分,并预测有效化学成分可能对应的靶点;通过Drugbank和TTD数据库,整理获得MG相关靶点,与八味中药的预测靶点进行对接,获取复肌宁汤治疗眼肌型MG的可能有效靶点;通过Cytoscape3.6.0软件构建中药复方有效化学成分与MG相关靶点的网络图,并进行GO富集分析和KEGG通路分析。2)收集从2015年9月到2018年3月到西苑医院脑病科门诊就诊的眼肌型MG患者,登记入组眼肌型MG患者的基本信息情况,每位入组患者均给予复肌宁汤治疗,疗程为3个月,记录治疗前后入组眼肌型MG患者临床绝对计分及中医证候计分,检测治疗前及治疗后3个月眼肌型MG患者的AChR-Ab水平,CD4+T细胞百分率,CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值,并进行比较分析。采用SPASS21.0进行统计分析。研究结果1)网络药理学分析结果:通过靶点对接,构建化学成分-靶点网络图,获取可能有效靶蛋白共15 种,分别为 CYP3A4;ALDH2;NR3C1;BCHE;CYP2C19;ACHE;CHRM5;CYP2C9;CYP2E1;HSD11B1;UGT1A1;UGT2B15;ALB;CHRNA4;CHRNA7。通过查阅文献最终可能有效的靶点有糖皮质激素受体;乙醜胆碱酯酶;11β-羟类固醇脱氢酶1、胆碱能受体等;ClueGo分析结果显示复肌宁汤关键靶标的作用通路包括乙酰胆碱受体信号通路、细胞对乙酰胆碱的反应、胆碱能突触传递等。2)临床研究结果:复肌宁汤治疗眼肌型MG患者西医临床疗效的总有效率为88.89%,中医临床疗效的总有效率为92.06%。复肌宁汤治疗后临床绝对计分（1.78± 1.68）较治疗前（3.22±2.01）降低,差异有统计学意义（P＜0.01）;治疗后中医证候计分（3.49±2.09）较治疗前（6.49±2.61）降低,差异有统计学意义（P＜0.01）;复肌宁汤治疗后上睑无力临床绝对计分（1.16±0.99）较治疗前（1.91±1.03）降低、上睑疲劳试验临床绝对计分治疗后（0.73±0.67）较治疗前（1.42±0.70）降

关键词：复肌宁汤眼肌型重症肌无力网络药理学免疫指标调控

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