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基于利什曼原虫K26重组抗原检测黑热病特异抗体的免疫层析试条方法的建立与效果评价

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中国人兽共患病学报 2023年第10期39卷 981-985页

作者：石锋丁丹高春花张璟贾孝凯王颖危芙蓉中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025 上海市浦东新区疾病预防控制中心上海200136

目的建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26,rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果。方法用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G,SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将利什曼原虫K26重... 详细信息

目的建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26,rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果。方法用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G,SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将利什曼原虫K26重组抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条。用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病、其它寄生虫病以及健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性。同时用rK39(Recombinant K39,rK39)试条进行平行检测。结果rK26试条法和rK39试条法检测内脏利什曼病患者血清的敏感性分别为91.82%(101/110)和93.64%(103/110);与10份疟疾患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、10份细粒棘球蚴病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,40份健康者血清也均为阴性,rK26试条法和rK39试条法的总特异性均为100.00%。rK26试条法和rK39试条法阳性检出率之间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.25,P=0.62),2种试条法检测黑热病患者血清的结果一致性较好(κ=0.73)。结论建立的基于利什曼原虫K26重组抗原检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

关键词：内脏利什曼病 rK26 rK39 免疫层析试条

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夹心法免疫层析试条的数学模型与仿真研究

分析化学 2017年第1期45卷 69-74页

作者：曾念寅朱盼盼李玉榕姜海燕褚芦涛杜民厦门大学仪器与电气系福州大学福建省医疗器械和医药技术重点实验室中国科学院深圳先进技术研究院

基于夹心法免疫层析试条检测原理,结合对流扩散方程和流体动力学方程,建立了夹心法免疫层析试条动态反应过程的数学模型,并通过COMSOL软件对试条动态反应过程进行仿真。分别探究了目标待测物A浓度在0;0 mol/L,标记物P浓度在1×10!2;×10... 详细信息

基于夹心法免疫层析试条检测原理,结合对流扩散方程和流体动力学方程,建立了夹心法免疫层析试条动态反应过程的数学模型,并通过COMSOL软件对试条动态反应过程进行仿真。分别探究了目标待测物A浓度在0;0 mol/L,标记物P浓度在1×10!2;×103mol/L以及硝酸纤维素膜的孔隙率在0;范围内变化时,检测线上夹心复合物浓度关于位置和时间的浓度变化情况,并分析了各物质初始浓度以及试条结构对于检测结果和检测时间的影响。结果表明,在一定浓度范围内,目标待测物A以及标记物P浓度的增加将提高试条的定量检测性能,而孔隙率通过影响混合液流速和混合液中各物质反应接触情况来影响检测结果。

关键词：免疫层析试条夹心法对流扩散数学模型生化反应过程

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竞争法免疫层析试条的数学模型与仿真研究

分析化学 2017年第9期45卷 1284-1290页

作者：曾念寅朱盼盼李玉榕姜海燕杜民厦门大学仪器与电气系福州大学福建省医疗器械和医药技术重点实验室

根据竞争法免疫层析试条的检测原理,本研究将其分为TwA和TnA两种模式,结合对流扩散方程分别建立其数学模型,并运用COMSOL软件对试条的动态反应过程进行仿真,得到检测线和质控线上各复合物浓度关于各影响因素的关系曲线。在TwA模式中,分... 详细信息

根据竞争法免疫层析试条的检测原理,本研究将其分为TwA和TnA两种模式,结合对流扩散方程分别建立其数学模型,并运用COMSOL软件对试条的动态反应过程进行仿真,得到检测线和质控线上各复合物浓度关于各影响因素的关系曲线。在TwA模式中,分析了待测物浓度[A;]=0;0 mol/L,标记物浓度[P;]=0.01;00 mol/L,检测线位于5;0 mm位置等因素对于检测结果的影响;在TnA模式中,分析了[A;]=0;0 mol/L,[P;]=0.01;00 mol/L,[A;]和[P;]两种物质浓度及孔隙率等因素对于检测结果的影响。结果表明,本研究建立的竞争法模型与仿真能探究各参数对于检测结果的影响,优化试条性能,从而提高试条检测灵敏度和实现定量检测。

关键词：免疫层析试条竞争法对流扩散数学模型生化反应过程

快速诊断多房棘球蚴病胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第2期30卷 90-94页

作者：高春花石锋汪俊云杨玥涛朱慧慧中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心.上海200025

目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法... 详细信息

目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IgG单克隆抗体;将重组Em18抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的胶体金免疫层析试条。用该试条检测多房棘球蚴病(56份)、细粒棘球蚴病(87份)、囊尾蚴病(30份)、日本血吸虫病(10份)和弓形虫病(10份)患者血清,以及健康人(50份)血清,以评价其检测的敏感性和特异性,同时用ELISA法进行平行检测,以评价该试条的诊断性能。结果以重组蛋白Em18为抗原胶体金免疫层析试条检测多房棘球蚴病患者血清,敏感性为92.9%(52/56)。与细粒棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清分别存在9.2%(8/87)和3.3%(1/30)的交叉反应,与健康人血清存在8.0%(4/50)的假阳性率,与日本血吸虫病和弓形虫病患者血清则无交叉反应,特异性为93.0%(174/187)。ELISA法检测的敏感性和特异性分别为94.6%(54/56)和92%(172/187),与试条法比较两者差异均无统计学意义(P>0.05)。kappa分析结果显示,试条法与ELISA法检测多房棘球蚴病患者血清的结果高度一致(κ=0.98)。结论以重组Em18抗原建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测多房棘球蚴病的敏感性和特异性均较高。

关键词：多房棘球蚴病重组Em18抗原免疫层析试条 ELISA 诊断

快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第5期25卷 415-418页

作者：汪俊云石峰杨玥涛高春花包意芳汤林华中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的建立一种能区分恶性疟的快速、简便诊断疟疾的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价。方法筛选基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体F4H12、G4C9和D8F7,并将... 详细信息

目的建立一种能区分恶性疟的快速、简便诊断疟疾的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价。方法筛选基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体F4H12、G4C9和D8F7,并将其吸附于样品垫;将单克隆抗体B2G10(针对恶性疟原虫与间日疟原虫)和D6A7(只针对恶性疟原虫)分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析检测试条。用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样(107份)和内脏利什曼病患者血样(17份)以评价其特异性,检测确诊的疟疾患者血样(间日疟110份,恶性疟54份)以评价其敏感性。均用单盲法检测。结果检测107份疫区非疟疾发热病人血样和17份内脏利什曼病患者血样,有119份显示为阴性,特异性约为96.0%;其中17份内脏利什曼病患者血样全部为阴性。检测164份疟疾患者血样,阳性153份,敏感性为93.3%,其中间日疟检出率为92.7%(102/110),恶性疟检出率为94.4%(51/54)。结论研制出的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

关键词：疟疾免疫层析试条诊断

三种免疫层析试条检测甘肃犬利什曼原虫感染效能的评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第6期38卷 792-795页

作者：余大为李凡冯宇杨成明杨俊克刘林林张永福甘肃省疾病预防控制中心兰州730020 文县疾病预防控制中心陇南746400 迭部县疾病预防控制中心甘南藏族自治州747400

对来自犬源型内脏利什曼病流行区甘肃省文县和迭部县的537只家犬血样和来自非流行区天祝县的37只家犬血样,分别采用人用rk39试条、犬用rk39试条和循环抗原(CA)试条进行平行测试,以PCR检测结果为标准比较3种试条的敏感性和特异性。结果显... 详细信息

对来自犬源型内脏利什曼病流行区甘肃省文县和迭部县的537只家犬血样和来自非流行区天祝县的37只家犬血样,分别采用人用rk39试条、犬用rk39试条和循环抗原(CA)试条进行平行测试,以PCR检测结果为标准比较3种试条的敏感性和特异性。结果显示,574份犬血样中,221份PCR检测结果为阳性,阳性率为38.5%(221/574)。CA试条与犬用、人用rk39试条检测221份PCR阳性血样的敏感度分别为90.0%(199/221)、65.2%(144/221)和64.3%(142/221),三者与PCR检测结果的差异具有统计学意义(χ^2=141.76、20.31、17.96,P试条与犬用、人用rk39试条检测316份流行区非内脏利什曼病感染犬血样,特异度分别为95.3%(301/316)、99.7%(315/316)和99.4%(314/316),三者与PCR检测结果的差异具有统计学意义(χ^2=258.85、312.01、308.05,P试条与犬用、人用rk39试条检测流行区有症状犬的结果与PCR检测阳性的符合率分别为88.5%(23/26)、88.5%(23/26)和84.6%(22/26),三者与PCR检测的差异有统计学意义(χ^2=23.22、23.22、20.50,P试条与PCR检测结果的差异有统计学意义(χ^2=136.25、11.33、10.39,P试条,其准确性均在0.8以上。kappa一致性检验系数为0.671~0.857,表明3种试条均适用于利什曼感染犬的初筛,CA试条优于犬用、人用rk39试条,是流行地区开展利什曼感染犬筛查较好的检测方法。

关键词：利什曼原虫免疫层析试条犬效果评价甘肃

巨片形吸虫病快速诊断胶体金免疫层析试条的研制与评价

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中国人兽共患病学报 2016年第2期32卷 114-118,132页

作者：周岩许学年程娜刘榆华孔令颖姚恺龄石峰张建国 Peter Chun 罗家军中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心上海200025 大理州血吸虫病防治研究所大理671000 益思美诠生物科技(上海)有限公司上海201206 宾川县血吸虫病防治站宾川671600

目的建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白(r FgCL1-YN);将r FgCL1-YN... 详细信息

目的建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白(r FgCL1-YN);将r FgCL1-YN和羊抗鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜的适宜位置作为检测带和质控带,以胶体金标记抗人IgG4抗体的鼠单抗作为检测试剂,制备检测特异性IgG4型抗体的免疫层析试条。用该试条检测巨片形吸虫病患者(30份)、日本血吸虫病患者(15份)以及健康人(32份)血清,评价其诊断价值,同时用ELISA法进行平行检测作为对照。结果试条检测法的敏感性为100%(30/30),特异性为97.9%(46/47),总体符合率为98.7%(76/77)。ELISA法检测的敏感性、特异性和总体符合率分别100%(30/30)、100%(47/47)和100%(77/77)。试条法与ELISA法的敏感性、特异性和总体符合率,经四格表确切概率法检验,P值分别为1、0.5和0.5,全部大于0.05。显示,试条法与ELISA法检测巨片形吸虫病患者血清的结果高度一致。另外,试条法的检测时间为10min,血清用量低于10μL,且具较高的敏感度。结论以r FgCL1-YN建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测巨片形吸虫病具有较高的诊断价值。

关键词：巨片形吸虫病组织蛋白酶L1 免疫层析试条 ELISA 诊断

快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条方法的建立与效果评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2018年第2期36卷 119-123页

作者：石锋杨益汪俊云杨玥涛高春花中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、世界卫生组织热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的建立简便、快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条方法并评价其检测效能。方法将美洲钩虫成虫置液氮中研磨,通过膜蛋白表面活性剂浸泡、再经液氮反复冻融和硫酸铵沉淀提取成虫可溶性抗原。用制备的成虫可溶性抗原作为包被抗原... 详细信息

目的建立简便、快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条方法并评价其检测效能。方法将美洲钩虫成虫置液氮中研磨,通过膜蛋白表面活性剂浸泡、再经液氮反复冻融和硫酸铵沉淀提取成虫可溶性抗原。用制备的成虫可溶性抗原作为包被抗原,以胶体金标记G蛋白为检测探针,制备检测钩虫特异抗体的免疫层析试条。用该试条检测美洲钩虫、蛔虫、鞭虫、日本血吸虫和刚地弓形虫等寄生虫感染者的血清以及健康人血清,评价该试条检测的敏感性和特异性,同时用ELISA进行平行检测,以评价该试条的检测效能。结果制备了检测钩虫特异抗体的胶体金免疫层析试条。用该试条和ELISA法分别检测美洲钩虫、蛔虫、鞭虫、血吸虫、刚地弓形虫感染者血清95、10、11、10和10份,健康人血清74份。试条和ELISA检测美洲钩虫感染者血清的敏感性分别为88.4%(84/95)和90.5%(86/95),检测74份健康人血清假阳性率分别为4.1%(3/74)和6.8%(5/74);与蛔虫感染者血清的交叉反应分别为2/10和4/10,与鞭虫感染者血清的交叉反应分别为1/11和4/11,试条法与血吸虫和弓形虫感染者血清无交叉反应,ELISA法与血吸虫感染者的交叉反应为1/10,与弓形虫感染者血清无交叉反应。试条法与ELISA法的特异性分别为94.9%(109/115)和88.7%(102/115),检测效能分别为91.9%和89.5%。试条法与ELISA法敏感性、特异性的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论以美洲钩虫成虫可溶性抗原制备的快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条检测美洲钩虫感染者血清的敏感性和特异性均较高。

关键词：钩虫病美洲钩虫可溶性抗原免疫层析试条诊断

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快速检测甲胎蛋白的免疫层析试条的研制

分析科学学报 2002年第4期18卷 273-276页

作者：陈季武范培昌华东师范大学生命科学学院上海200062

研制了可简便、快速检出原发性肝癌标志物——人血清中甲胎蛋白 ( AFP)的免疫层析试条。为此 ,研究了用国产试剂和材料制备胶体金、用此胶体金标记抗 AFP单抗的影响因素以及抗 AFP抗体固化条件、抗 AFP抗体与其 AFP结合能力等。结果表... 详细信息

研制了可简便、快速检出原发性肝癌标志物——人血清中甲胎蛋白 ( AFP)的免疫层析试条。为此 ,研究了用国产试剂和材料制备胶体金、用此胶体金标记抗 AFP单抗的影响因素以及抗 AFP抗体固化条件、抗 AFP抗体与其 AFP结合能力等。结果表明 ,自制国产胶体金质量不亚于进口商品 ;金标单抗和固化抗体活性稳定 ,能分别显示出结合 AFP分子不同表位的特异性。所得检测试条的检出速度在 5至 2 0 min内 ,检测阳性阈值定为 2 0 ng AFP/m L血清。

关键词：甲胎蛋白胶体金单克隆抗体免疫层析试条肝癌诊断人血清检测