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绣球菌多糖对免疫受体TLR4和TLR2的作用及信号转导通路的研究

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绣球菌多糖对免疫受体TLR4和TLR2的作用及信号转导通路的研究

作者：王萌皓山西农业大学

学位级别：硕士

[目的]对绣球菌中性多糖进行分离纯化,研究其与分子量6456 Da的绣球菌酸性多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫受体TLR4和TLR2的作用,并探究受体介导的信号转导通路,为进一步探讨绣球菌多糖的免疫调节机制以及作为免疫功能原料的开发提供理论依... 详细信息

[目的]对绣球菌中性多糖进行分离纯化,研究其与分子量6456 Da的绣球菌酸性多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫受体TLR4和TLR2的作用,并探究受体介导的信号转导通路,为进一步探讨绣球菌多糖的免疫调节机制以及作为免疫功能原料的开发提供理论依据。[方法](1)采用传统水提法提取绣球菌粗多糖,经过HZ-830大孔树脂脱色除杂、DEAE-52分离绣球菌多糖,用超纯水洗脱,收集水相洗脱组分。然后用Sepharose CL-6B对水相洗脱出的中性多糖组分进行后续纯化,根据吸收峰收集对应的中性多糖样品。通过傅里叶红外色谱法(FT-IR)、离子色谱法(IC)、高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)等方法分析绣球菌中性多糖组分。(2)研究绣球菌中性多糖和酸性多糖对免疫受体TLR4和TLR2的作用。用MTT法测定在0～4000μg/m L范围内,两种多糖组分的浓度对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,选择最能促进巨噬细胞增值的浓度。用选定浓度的两种多糖组分分别处理巨噬细胞RAW264.7;TLR4抗体和TLR2抗体分别作用巨噬细胞RAW264.7 1 h,然后分别用含有两种多糖组分的细胞培养液培养细胞。收集细胞培养上清和细胞,并检测上清液中NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的分泌量;采用逆转录-聚合酶链反应RT-PCR测定巨噬细胞免疫调节作用受体的mRNA表达量;提取细胞的总蛋白,通过蛋白免疫印迹法WB测定免疫调节作用受体的蛋白表达量,确定绣球菌两种多糖组分的免疫受体。(3)对确定的免疫受体,研究两种多糖组分对其介导的信号转导通路的影响,用两种多糖组分处理巨噬细胞RAW264.7后,采用逆转录-聚合酶链反应RT-PCR测定巨噬细胞TRAF6、IRF3、MAPKs(JNK、ERK、p38)的mRNA相对表达量。[结果](1)绣球菌多糖经过HZ-830大孔树脂脱色除杂和DEAE-52分离后得到的绣球菌中性多糖,然后通过Sepharose CL-6B纯化得到SLP1和SLP2两个中性组分多糖。SLP1和SLP2均具有多糖特征性结构。SLP1由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖构成,摩尔比为4:10:12:3:2;SLP2由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖构成,摩尔比为6:12:63:10:5。SLP1从高效凝胶渗透色谱图谱看,有两个峰,主峰成分相对分子量为6.9×10 Da,但量都非常少;而SLP2相对分子质量为3.2×10 Da,高效凝胶渗透色谱图谱显示出单一对称峰,说明该多糖组分具有良好的分离效果和较高的纯度,为均一多糖,因此选择SLP2用于后续免疫受体及信号转导通路的研究。(2)绣球菌中性多糖SLP2和绣球菌酸性多糖均能促进RAW264.7巨噬细胞增殖,提高NO、TNF-α、IL-6、IFN-β的分泌量,浓度分别为250μg/m L和31.25μg/m L时促进细胞增值能力最强。加入TLR4抗体作用后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的分泌量明显降低,差异极显著(p受体的mRNA基因表达和蛋白表达量明显增加,差异极显著(p受体,而TLR2可能不是它们的受体。(3)绣球菌中性多糖SLP2和绣球菌酸性多糖两种多糖组分均能提高巨噬细胞RAW264.7表面免疫调节作用受体TLR4介导的信号转导通路相关基因TRAF6、IRF3、JNK、ERK、p38 mRNA的相对表达量。当绣球菌中性多糖SLP2浓度为250μg/m L和绣球菌酸性多糖浓度为31.25μg/m L时,各个基因的相对表达量最大。说明TRAF6、IRF3、JNK、ERK、p38是这两种绣球菌多糖作用的下游通路分子作用靶点。[结论]绣球菌中性多糖SLP2和绣球菌酸性多糖均具有免疫调节作用,TLR4是绣球菌中性多糖SLP2和绣球菌酸性多糖的免疫识别受体,并可通过TLR4受体介导的信号转导通路调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能。

关键词：绣球菌多糖分离纯化免疫受体 TLR4 TLR2 信号转导通路

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免疫受体在肝癌组织中的表达及其临床意义

河北医学 2011年第1期17卷 88-90页

作者：郭晓东张敏曲建慧齐瑞兆王春平陆荫颖中国人民解放军第302医院北京100039

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-IR)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平和甲胎蛋白(AFP)在原发性肝癌组织中的临床病理意义。方法:应用免疫组化方法检测84例肝细胞癌患者手术切除石蜡包埋标本的IGF-IR、VEGF的蛋白表达以及AF... 详细信息

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-IR)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平和甲胎蛋白(AFP)在原发性肝癌组织中的临床病理意义。方法:应用免疫组化方法检测84例肝细胞癌患者手术切除石蜡包埋标本的IGF-IR、VEGF的蛋白表达以及AFP的水平。结果:随着肝癌病理分级由高分化到低分化,AFP浓度逐渐增加,IGF-IR与VEGF的表达阳性率也逐渐升高,高分化肝癌与低分化肝癌的表达阳性率的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:检测患者血清AFP的同时,可以联合检测IGF-IR、VEGF的表达情况,不仅可提高诊断的阳性率,还可成为一个早期发现肿瘤的重要手段。

关键词：原发性肝癌免疫受体 IGF-IR VEGF

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免疫受体的力传导

医用生物力学 2021年第S1期36卷 73-73页

作者：娄继忠中国科学院生物物理研究所北京100101

免疫受体识别细胞外的信号并将该信号传递到细胞内部,引起免疫响应。通过结合分子动力模拟、单分子力学以及生物化学表征等方法,本文发现,力在信号跨膜转导过程中起到重要的调控作用。同时,这种力的调控作用不但对免疫受体,对其他跨膜... 详细信息

免疫受体识别细胞外的信号并将该信号传递到细胞内部,引起免疫响应。通过结合分子动力模拟、单分子力学以及生物化学表征等方法,本文发现,力在信号跨膜转导过程中起到重要的调控作用。同时,这种力的调控作用不但对免疫受体,对其他跨膜受体。

关键词：免疫受体化学表征分子力学信号传递分子动力模拟免疫响应受体识别跨膜受体

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NKG2D免疫受体及其配体的作用

生物技术 2005年第2期15卷 95-97页

作者：陈佳洪水声刘兰英吉林大学生命科学学院吉林长春130023

受到感染或损伤的细胞通过中间受体将信号传导至机体的免疫系统,NKG2D即是这样一种典型的具有较高免疫原性的免疫受体,它的主要作用是传导受损伤细胞产生的信号,诱导机体产生免疫应答。该文总结了近期关于NKG2D和其配体的多样性,以及NK... 详细信息

受到感染或损伤的细胞通过中间受体将信号传导至机体的免疫系统,NKG2D即是这样一种典型的具有较高免疫原性的免疫受体,它的主要作用是传导受损伤细胞产生的信号,诱导机体产生免疫应答。该文总结了近期关于NKG2D和其配体的多样性,以及NKG2D和其配体在信号传导,刺激免疫细胞产生,肿瘤细胞的监督和疾病预防方面的新发现。

关键词： NKG2D 免疫受体配体

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NK细胞天然免疫受体与肿瘤免疫治疗

中国药理通讯 2013年第2期30卷 47-48页

作者：田志刚中国科学技术大学

靶向负相共刺激因子CTLA-4和PD-1的单抗在肿瘤免疫治疗中展现了诱人前景，也成为Science推荐的2013年六大关注热点之一。目前国际上靶向负相分子的对策主要针对T细胞（尤其是cTL）的耗竭（Exhaustion），而有关专职抗癌的天然杀伤细胞（... 详细信息

靶向负相共刺激因子CTLA-4和PD-1的单抗在肿瘤免疫治疗中展现了诱人前景，也成为Science推荐的2013年六大关注热点之一。目前国际上靶向负相分子的对策主要针对T细胞（尤其是cTL）的耗竭（Exhaustion），而有关专职抗癌的天然杀伤细胞（NaturalKillerCells，NKCells）的功能逆转的研究却鲜有报道。我们研究小组开展了二方面的研究：（1）针对新型负相共刺激因子TIGI和LARG3的研究；（2）针对NK细胞抑制性受体NKG2A的研究。

关键词： NK细胞抑制性受体肿瘤免疫治疗天然杀伤细胞免疫受体共刺激因子 CTLA-4 NKG2A PD-1

生命学院柴继杰课题组合作揭示动物先天免疫受体NLRP1抑制的分子机制 003

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中科院遗传发育所揭示植物免疫受体调控G蛋白激活机制

新清华

作者：生命学院

本报讯先天性免疫系统是宿主防御感染机制中一种普遍而古老的形式,它对于病原体的感知主要是通过一系列胚系基因编码的模式识别受体来实现。其中NOD样受体(NLR)家族是模式识别受体中数量最大、功能最复杂的一类,其通过不同成员来感应... 详细信息

本报讯先天性免疫系统是宿主防御感染机制中一种普遍而古老的形式,它对于病原体的感知主要是通过一系列胚系基因编码的模式识别受体来实现。其中NOD样受体(NLR)家族是模式识别受体中数量最大、功能最复杂的一类,其通过不同成员来感应多样的病原信号,进而形成炎症小体来活化机?

关键词：生命学院 NLRP1 炎症小体课题组 DPP 免疫受体分子机制

来源： cnki报纸评论

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农药市场信息 2018年第9期 51-51页

作者：郑庆伟

异源三聚体G蛋白广泛存在于真核细胞中,对细胞生命活动具有重要调控作用。在动物细胞中,G蛋白α亚基与G蛋白偶联受体(G protein-cou-pled receptor,GPCR)结合,GPCR感受胞外信号后,发挥鸟苷酸交换因子作用,促使Gα亚基结合的GDP被GTP替换... 详细信息

异源三聚体G蛋白广泛存在于真核细胞中,对细胞生命活动具有重要调控作用。在动物细胞中,G蛋白α亚基与G蛋白偶联受体(G protein-cou-pled receptor,GPCR)结合,GPCR感受胞外信号后,发挥鸟苷酸交换因子作用,促使Gα亚基结合的GDP被GTP替换,从而导致G蛋白激活,Gα亚基与Gβγ二聚体发生解离,激活后的G蛋白通过作用于下游靶标实现信号

关键词：免疫受体拟南芥 RGS

番茄免疫蛋白受体Sw-5b的亚细胞定位与抗性功能研究

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番茄免疫蛋白受体Sw-5b的亚细胞定位与抗性功能研究

免疫抑制受体igsf 9基因敲除鼠的构建以及对肿瘤生长的影响

中国植物病理学会2016年学术年会

作者：陈小姣陈虹宇陶小荣南京农业大学植物保护学院

番茄斑萎病毒属病毒是一类对农业生产造成严重危害的植物多分体负义链RNA病毒,而Sw-5b是番茄上进化出的一个针对番茄斑萎病毒属病毒具有广谱抗性的免疫受体蛋白。近年来的研究表明免疫受体蛋白的亚细胞定位在抗病信号通路中发挥着重要作... 详细信息

番茄斑萎病毒属病毒是一类对农业生产造成严重危害的植物多分体负义链RNA病毒,而Sw-5b是番茄上进化出的一个针对番茄斑萎病毒属病毒具有广谱抗性的免疫受体蛋白。近年来的研究表明免疫受体蛋白的亚细胞定位在抗病信号通路中发挥着重要作用,番茄Sw-5b是一个含有额外的N端结构域（NTD）的CC-NB-LRR类型的免疫受体蛋白,该蛋白的亚细胞定位以及在抗病中的作用还并不清楚。本研究将Sw-5b与YFP融合后发现YFP-Sw-5b既定位在细胞质同时也定位在细胞核,融合的YFP-Sw-5b依然对番茄斑萎病毒具有抗性。在YFP-Sw-5b的N端融合核输出信号（NES）将Sw-5b拉到细胞质,瞬时表达发现细胞质定位导致细胞死亡活性显著增强,但是转基因NES-YFP-Sw-5b植株接毒测试表明细胞质定位的Sw-5b丧失了对TSWV的抗性;在YFP-Sw-5b的N端融合核定位信号（NLS）将Sw-5b拉到细胞核内,发现其诱导的细胞死亡明显减弱,但是却足以抵抗病毒,表明细胞核定位对于Sw-5b的抗性具有重要作用。将Sw-5b的激发子NSm融合NES,发现定位在细胞质的NSm能够诱导细胞死亡,而将NSm融合NLS定位至细胞核则不再诱导HR,表明Sw-5b与NSm的识别发生在细胞质。此外,我们发现Sw-5b,将Sw-5b P-loop保守基序突变Sw-5b不再能够被激活,突变体YFP-Sw-5b也不再能够诱导细胞死亡,但是该突变体依然可以定位于细胞核,同样将SGT1沉默,YFP-Sw-5b也不能诱导细胞死亡,但在SGT1沉默植株中,YFP-Sw-5b依然能够进核,表明该抗性蛋白有没有激活都可以定位于细胞核。我们进一步发现Sw-5b的细胞核定位信号是由额外的NTD结构域决定的,并且发现NTD结构域的进核对于Sw-5b的抗性是必需的。

关键词：免疫受体细胞定位抗性

来源： cnki会议评论

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滨州医学院学报 2021年第5期44卷 321-326页

作者：孙爽刘祎璠李尊岭滨州医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室山东省肿瘤免疫治疗研究创新团队山东烟台264003

目的构建免疫抑制受体igsf 9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响。方法将Cas 9 mRNA和igsf 9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf 9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和... 详细信息

目的构建免疫抑制受体igsf 9基因敲除小鼠模型,并探究该小鼠模型对肺癌细胞生长的影响。方法将Cas 9 mRNA和igsf 9-sg RNA显微注射到C57BL/6小鼠受精卵中,利用非同源重组修复引入突变,造成igsf 9基因蛋白移码突变、功能缺失;应用PCR和测序技术进行基因型鉴定。将2×10^(6)个Lewis肺癌细胞(LL/2)皮下接种到C57BL/6-igsf 9^(+/+)和C57BL/6-igsf 9^(-/-)小鼠皮下,每3天检测肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;当肿瘤体积大于2 cm^(3)时,在麻醉状态下处死小鼠,称肿瘤质量、流式细胞仪检测肿瘤组织各免疫细胞水平。结果igsf 9基因4-9外显子区域出现了2892 bp缺失,igsf 9基因发生移码突变,提前出现终止密码子,成功构建igsf 9基因敲除小鼠模型,而且该小鼠的体质量以及外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞的比例未见明显差异。与C57BL/6-igsf 9^(+/+)小鼠相比,C57BL/6-igsf 9^(-/-)小鼠显著抑制肿瘤细胞的生长,肿瘤组织浸润,CD3^(+)T细胞、CD3^(+)/CD4^(+)T细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T细胞水平显著升高,B细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数量未见明显变化。结论C57BL/6小鼠敲除igsf 9基因表达能够促进肿瘤组织中T细胞的浸润或激活,从而抑制肿瘤生长。

关键词：免疫抑制受体 IGSF 9 基因敲除肺癌细胞免疫受体酪氨酸抑制序列