检索结果-南通市图书馆

牦牛TBC1D7基因克隆、生物信息学及表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国草食动物科学 2024年第2期44卷 10-17页

作者：张娟香欧杰次仁喇永富马晓明吴晓云郭宪褚敏阎萍梁春年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育重点实验室农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室兰州730050 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 西藏娘亚牦牛养殖产业发展有限责任公司嘉黎852400

为探究西藏牦牛Tre2-Bub2-CDC16结构域家族成员7(TBC1D7)基因的特征及结构,利用RT-PCR克隆了TBC1D7基因的CDS区序列,并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测了TBC1D7基因在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉... 详细信息

为探究西藏牦牛Tre2-Bub2-CDC16结构域家族成员7(TBC1D7)基因的特征及结构,利用RT-PCR克隆了TBC1D7基因的CDS区序列,并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测了TBC1D7基因在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉及脂肪组织的表达水平。结果表明,牦牛TBC1D7基因的CDS区全长为882 bp,共编码293个氨基酸;系统进化树分析结果表明,西藏牦牛与野牦牛的亲缘关系最近,与兔的最远;生物信息学分析结果表明,牦牛TBC1D7蛋白不存在信号肽和跨膜结构,属于亲水性蛋白,主要存在细胞核中,且该蛋白具有24个潜在的磷酸化位点,蛋白的高级结构由α-螺旋(65.53%)、延伸连(3.75%)、β-转角(3.75%)和无规则卷曲(29.96%)构成。qPCR检测结果显示,TBC1D7基因在西藏牦牛脾脏组织中的表达最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。

关键词：西藏牦牛 TBC1D7基因克隆生物学分析组织表达

陆地棉GhMAPKKKK3基因的克隆及其表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分子植物育种 2024年第3期22卷 697-703页

作者：王倩章超代培红玛迪娜·木拉提胡子曜李月新疆农业大学生命科学学院乌鲁木齐830052

促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在植物生长、发育、抗逆、抗病和激素信号转导过程中起重要的调控作用。本研究以陆地棉的cDNA为模板克隆得到GhMAPKKKK3基因,其开放阅读框为1998 bp,编码665个氨基酸残基... 详细信息

促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在植物生长、发育、抗逆、抗病和激素信号转导过程中起重要的调控作用。本研究以陆地棉的cDNA为模板克隆得到GhMAPKKKK3基因,其开放阅读框为1998 bp,编码665个氨基酸残基。通过荧光定量PCR的方法分析GhMAPKKKK3基因在不同逆境诱导条件下以及不同棉花品种中的表达模式。结果表明,GhMAPKKKK3基因对高盐、干旱、低温和棉花黄萎病菌处理都有一定程度的响应,并且该基因受盐胁迫时调控的程度最强,其次是干旱胁迫与冷胁迫,黄萎病菌诱导时仅在1 h左右显著高于对照;该基因在不同品种棉花根部组织中的表达量低于茎部和叶部组织,在不同黄萎病抗性的品种中GhMAPKKKK3基因表达量有差异但没有显著规律。本研究结果为棉花抗逆相关基因的筛选及进一步研究GhMAPKKKK3基因的功能提供了重要的线索。

关键词：陆地棉 GhMAPKKKK3基因克隆逆境胁迫

茶树中β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆与表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分子植物育种 2024年

作者：王余茜蒋勋赵明吕才有刘志薇云南农业大学茶学院普洱市茶叶科学研究所云南农业大学马克思主义学院

β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase， β-OHase)是类胡萝卜素生物合成途径中的关键酶之一，促进β-胡萝卜素向玉米黄质转化和脱落酸的生成。为探究β-OHase基因在茶树类胡萝卜素合成和叶色变异机理中的作用，本研究以“云抗10... 详细信息

β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase， β-OHase)是类胡萝卜素生物合成途径中的关键酶之一，促进β-胡萝卜素向玉米黄质转化和脱落酸的生成。为探究β-OHase基因在茶树类胡萝卜素合成和叶色变异机理中的作用，本研究以“云抗10号(YK10)”茶树一芽二叶新梢为材料，采用逆转录PCR方法克隆出β-OHase序列，并对其结构和理化性质进行分析，利用靶向代谢组和RT-qPCR检测三个具有不同颜色茶树品种“YK10”、“紫娟(ZJ)”、“金边玉叶(JBYY)”新梢中类胡萝卜素含量和β-OHase表达谱，并进行关联性分析。结果显示：β-OHase编码蛋白序列具有典型的脂肪酸羟化酶超家族的结构域，开放阅读框长度为1065 bp，编码354个氨基酸，分子式为C1822H2780N4880O493S15，等电点为9.21，相对分子量为39889.99 Da。茶树β-OHase属于亲水性蛋白，由延伸链、α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成，与猕猴桃的亲缘关系较近。此外，本次研究结果表明，β-OHase序列的表达与类胡萝卜素积累有一定相关性，推测其与茶树叶片颜色形成有关，为探究茶树叶色变异提供参考依据。

关键词： β-胡萝卜素羟化酶类胡萝卜素茶树克隆表达分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

猫DDX20基因克隆及生物信息学分析

中国动物传染病学报 2024年

作者：董宁宁张琦谈晓梅孙亚娟李传峰朱杰汤傲兴张达刘光清李永畅孟春春新疆农业大学中国农业科学院上海兽医研究所

本研究对猫DDX20的CDS区进行克隆、比对不同物种DDX20核苷酸序列和氨基酸序列，构建系统发育树，利用ExPASy ProtParam、DeepTMHMM等软件或在线工具对DDX20蛋白理化性质、二级结构等预测分析，并在mRNA水平上判断猫杯状病毒（FCV）对猫D... 详细信息

本研究对猫DDX20的CDS区进行克隆、比对不同物种DDX20核苷酸序列和氨基酸序列，构建系统发育树，利用ExPASy ProtParam、DeepTMHMM等软件或在线工具对DDX20蛋白理化性质、二级结构等预测分析，并在mRNA水平上判断猫杯状病毒（FCV）对猫DDX20的影响。结果表明：成功克隆出猫DDX20基因CDS区，并上传GenBank，获得登录号：OR237969。生物信息学分析结果显示，猫DDX20蛋白为亲水性蛋白，无跨膜螺旋区和信号肽，有92个潜在的磷酸化修饰位点，3个潜在的N-糖基化位点和7个潜在的O-糖基化位点。亚细胞定位分析显示猫DDX20蛋白主要分布在细胞核（65.2%）。进化分析表明，猫DDX20与老虎和豹子同源性较高。FCV感染会导致猫DDX20的mRNA水平升高，或对病毒的复制产生影响。本研究成功克隆猫DDX20基因CDS区，为后续猫DDX20蛋白功能研究奠定基础。

关键词：猫 DDX20蛋白克隆生物信息学分析

大片吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆表达和免疫原性分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2024年第1期56卷 39-45页

作者：姚文浩吴兴隆秦志博李文豪朱惠丽王磊胡建和韩艳辉河南科技学院河南新乡453003

磷酸丙糖异构酶(TPI)是生物体糖酵解的一种关键酶,对大片吸虫获取能量而赖以生存有着十分重要的作用。本试验根据肝片吸虫TPI(GenBank:KC164346.1)的基因序列,设计带有BamHⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物,以大片吸虫的cDNA为模板,扩增大... 详细信息

磷酸丙糖异构酶(TPI)是生物体糖酵解的一种关键酶,对大片吸虫获取能量而赖以生存有着十分重要的作用。本试验根据肝片吸虫TPI(GenBank:KC164346.1)的基因序列,设计带有BamHⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物,以大片吸虫的cDNA为模板,扩增大片吸虫磷酸丙糖异构酶(FgTPI)基因。结果:FgTPI基因开放阅读框为762 bp,编码253个氨基酸,理论等电点pI为8.07;构建的重组表达质粒FgTPI-pET-28a(+)成功在大肠杆菌中表达,重组蛋白的分子量约为32 kDa;重组蛋白免疫BALB/c小鼠,收取多克隆抗体,ELISA检测结果显示,rFgTPI能诱导较高的IgG抗体水平;用感染大片吸虫动物的血清检测重组蛋白的免疫原性,Western blot分析表明,重组蛋白rFgTPI具有良好的免疫原性;生物信息学预测显示,FgTPI主要以α螺旋和β折叠为主,β转角较少,有3个较长的无规则卷曲;通过α-磷酸甘油脱氢酶偶联法测定其活性,发现FgTPI酶促反应最佳pH值为7.5,最适温度为35℃。本试验结果为深入研究FgTPI的生物学功能、评价其作为抗大片吸虫病疫苗候选分子奠定了基础。

关键词：大片吸虫磷酸丙糖异构酶克隆表达酶活性分析

野大麦肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国草食动物科学 2024年

作者：袁惠君关玉晨王春梅冯欢张欢欢袁毅君兰州理工大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所天水师范学院生物工程与生物技术学院

野大麦（Hordeumbrevisubulatum）是重要的野生禾本科牧草，具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因，本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因（Actin，ACT）的核心片段。采用BLAST序列比对，qRT-PCR实时定量方法对其序列特征... 详细信息

野大麦（Hordeumbrevisubulatum）是重要的野生禾本科牧草，具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因，本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因（Actin，ACT）的核心片段。采用BLAST序列比对，qRT-PCR实时定量方法对其序列特征和表达特性进行了分析。结果表明，野大麦ACT的基因片段长518 bp，编码171个氨基酸。BLAST分析表明，野大麦的肌动蛋白基因片段与大麦（Hordeum vulgare）ACT基因核苷酸序列的一致性达97%，与ACT蛋白氨基酸序列同源性达91%，并将其命名为HbACT。与11种相关植物进行ACT氨基酸序列比对发现，HbACT含152个保守氨基酸和19个非保守氨基酸，说明HbACT蛋白具有高度保守性。qRT-PCR分析表明，在不同盐浓度处理条件下，不同处理时间下野大麦各器官的HbACT的Ct平均值为19.30，地上部的变异系数为3.5，峰度系数为0.262；地下部的变异系数为5.3，峰度系数为0.409，均属于尖峰分布，Ct值的稳定系数均小于1.7。综上所述，HbACT基因表达稳定，可作为内参基因用于研究野大麦功能基因的表达模式分析。

关键词：野大麦肌动蛋白基因克隆表达模式分析

鸡pro-IL-1β表达、多克隆抗体制备与初步应用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年

作者：许萌萌黄萌萌牛鑫鑫王国栋于航博张玉龙韩京哲韩金泽刘润杭吴子文于晓雪王笑梅高玉龙李留安祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽免疫抑制病创新团队

为研究禽类疫病病原触发炎症的分子机制，试验克隆和分析鸡源白细胞介素-1β前体（Interleukin-1β precursors,pro-IL-1β）基因，原核表达和纯化pro-IL-1β蛋白，用纯化的pro-IL-1β蛋白免疫小鼠制备pro-IL-1β多克隆抗体，对该抗体进... 详细信息

为研究禽类疫病病原触发炎症的分子机制，试验克隆和分析鸡源白细胞介素-1β前体（Interleukin-1β precursors,pro-IL-1β）基因，原核表达和纯化pro-IL-1β蛋白，用纯化的pro-IL-1β蛋白免疫小鼠制备pro-IL-1β多克隆抗体，对该抗体进行ELISA效价检测和鉴定，并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验和Western blot试验中的应用效果。结果显示：重组蛋白pro-IL-1β成功表达，分子量约37 ku，能与His标签抗体发生特异性结合反应；获得了ELISA效价高于1∶32 000的鼠抗pro-IL-1β多克隆抗体，该抗体可通过间接免疫荧光试验（IFA）检测到pro-IL-1β真核表达蛋白，也可通过Western blot试验检测到pro-IL-1β原核表达蛋白和真核表达蛋白，还可通过Western blot和IFA检测到传染性法氏囊病病毒（IBDV）诱发的巨噬细胞HD11内源性pro-IL-1β蛋白的表达。研究表明，成功制备鸡pro-IL-1β多克隆抗体，为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。

关键词：鸡 pro-IL-1β 克隆表达多克隆抗体炎症

大恒799肉鸡Myoz1基因CDs区克隆、序列分析及其组织表达研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年

作者：朱师良余春林邱莫寒张增荣熊霞胡陈明杨礼彭涵陈家磊宋小燕夏波刘思洋蒋小松杜华锐李晴云杨朝武四川省畜牧科学研究院动物遗传育种重点实验室四川大恒家禽育种有限公司

为研究钙调神经磷酸酶肌小结结合蛋白1(Myoz1)的氨基酸序列特征及其在不同组织器官中的mRNA表达水平，试验通过PCR克隆Myoz1 CDs序列，分别利用ExPASYProtparam、ProtScale、Target P、DNAStar Protean、SWISS-MODEL、SignalP 4.1 Server、NetPhos2.0Server和STRTNG软件，进行Myoz1蛋白理化特性、亲/疏水性、亚细胞结构、蛋白二级结构、三级结构、信号肽、磷酸化位点和蛋白互作分析，并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Myoz1基因表达量。结果显示：大恒799肉鸡Myoz1基因CDs序列全长为881 bp，可编码293个氨基酸；大恒799肉鸡Myoz1基因氨基酸序列与雉鸡、岩石雷鸟位于一个分支，同源性最高，均高于96%，亲缘关系最近；Myoz1蛋白为水溶性蛋白且大多分布于细胞核内，分子式为C1442H2244N400O430S10，分子质量约为32 384.70 ku，理论等电点为9.12;Myoz1蛋白不存在信号肽，为分泌蛋白，共存在37个潜在的磷酸化位点、1个N-糖基化潜在位点；Myoz1蛋白二级结构主要由α-螺旋、β-转角和无规则卷曲组成，三级结构预测结果与其一致；Myoz1蛋白与ACTN2、LDB3、LMOD3等Z盘蛋白（PDZ-LIM结构域蛋白，ZASP）以及肌肉生长发育相关蛋白有相互作用的关系；Myoz1在1日龄大恒799肉鸡胸肌和腿肌的表达量显著高于其他组织，且在胸肌中的表达量高于腿肌（P<0.05）。研究表明Myoz1基因可能在肌肉生长发育过程中发挥调控作用。

关键词：大恒肉鸡 Myoz1基因克隆生物信息学分析组织表达

太子参萜类合成关键酶HMGR基因的克隆及异源表达分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中药材 2024年 1612-1618页

作者：林思妮许雨琼陈观水福建农林大学生命科学学院

目的:克隆太子参类异戊二烯生物合成甲羟戊酸途径的第1个关键限速酶3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因的全长cDNA,并进行生物信息学分析和异源表达分析。方法:基于其他植物HMGR基因的保守序列设计简并引物,以太子参块根总RNA为... 详细信息

目的:克隆太子参类异戊二烯生物合成甲羟戊酸途径的第1个关键限速酶3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因的全长cDNA,并进行生物信息学分析和异源表达分析。方法:基于其他植物HMGR基因的保守序列设计简并引物,以太子参块根总RNA为模板,利用RT-PCR结合RACE技术获得太子参HMGR基因的全长cDNA,并经生物信息学分析和农杆菌介导转化法进行功能验证。结果:太子参HMGR基因cDNA序列全长2 137bp,编码区长1 674 bp,命名为Ph HMGR,序列已提交至NCBI,登录号为MZ647966,该基因编码557个氨基酸,理论分子量约为5.93×10～4 Da,等电点为7.49,不稳定指数为43.45,总平均亲水性为0.128,为不稳定疏水蛋白。根据氨基酸同源性分析,推测PhHMGR氨基酸同其他植物如人参、刺五加、大豆等氨基酸序列相似,包含HMGR蛋白家族的4个保守结合基序,即2个HMG-CoA结合基序、2个NADP(H)结合基序和2个跨膜结构域。Ph HMGR基因在模式植物烟草中的异源表达发现,Ph HMGR基因在烟草转基因植株的表达可以显著提高转基因植株的总三萜含量。结论:从太子参中成功克隆了太子参HMGR基因的全长cDNA,该基因的异源表达可显著提高转基因植株的总三萜含量,研究结果为进一步解析太子参萜类化合物代谢途径的分子机制奠定了基础。

关键词：太子参萜类化合物 HMGR 克隆异源表达