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大鼠急性脊髓牵张损伤相关蛋白质的筛选和鉴定

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中华外科杂志 2012年第8期50卷 737-743页

作者：王文岳杨天府刘雷雷鸣鸣四川大学华西医院骨科成都610041

目的筛选并鉴定与大鼠急性脊髓牵张损伤相关的蛋白质。方法sD大鼠10只随机分为2组：假手术组（Sham组）和脊髓牵张损伤组（tractivespinalcordinjury，TSCI组），每组5只。术后1d取材，对脊髓组织蛋白进行提取制备、定量、分离，建立差... 详细信息

目的筛选并鉴定与大鼠急性脊髓牵张损伤相关的蛋白质。方法sD大鼠10只随机分为2组：假手术组（Sham组）和脊髓牵张损伤组（tractivespinalcordinjury，TSCI组），每组5只。术后1d取材，对脊髓组织蛋白进行提取制备、定量、分离，建立差异表达图谱，通过双向凝胶成像分析和人工比对，分别确定差异蛋白质斑点。采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术鉴定差异蛋白，检索数据库，对差异蛋白进行分类。结果Sham组与TSCI组两者间完全相同的差异蛋白质点共22个，其中4个下调，18个上调；4个差异蛋白点新出现在TSCI组。鉴定出16种有意义的蛋白质，其中与凋亡相关的蛋白4种，神经信号转导相关的蛋白3种，参与代谢的蛋白6种，未知蛋白3种。结论鉴定出的蛋白质可能通过神经信号转导、调节细胞凋亡及细胞代谢等途径参与了TSCI的损伤及修复过程。

关键词：脊髓损伤蛋白质组学色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离大鼠

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己烯雌酚人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

浙江大学学报（医学版） 2013年第1期42卷 25-31页

作者：张书杰雷雅静徐晓倩施卫星陈枢青浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所浙江杭州310058 浙江大学医学院公共卫生学院浙江杭州310058

目的:合成己烯雌酚人工抗原,制备效价高、特异性好的己烯雌酚多克隆抗体。方法:以己烯雌酚(DES)、溴乙酸乙酯、牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)等作为合成的主要原料,采用亲核取代反应,合成己烯雌酚衍生物(DES-HS),用电喷雾电离质谱... 详细信息

目的:合成己烯雌酚人工抗原,制备效价高、特异性好的己烯雌酚多克隆抗体。方法:以己烯雌酚(DES)、溴乙酸乙酯、牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)等作为合成的主要原料,采用亲核取代反应,合成己烯雌酚衍生物(DES-HS),用电喷雾电离质谱(ESI-MS)鉴定合成是否成功;然后,将DES-HS与BSA(OVA)偶联合成人工抗原,并用紫外扫描法以及高效液相色谱鉴定人工抗原是否制备成功。最后,用DES人工抗原动物免疫以获得DES多克隆抗体。结果:成功合成了偶联率为22∶1的己烯雌酚人工抗原。利用已合成的人工抗原制备出了效价为1∶25 600、IC50为10.81 ng/ml的己烯雌酚多克隆抗体。结论:建立了己烯雌酚人工抗原合成和鉴定以及制备己烯雌酚多克隆抗体的方法。

关键词：乙底酚免疫学血清白蛋白,牛双香豆乙酯色谱法高压液相光谱法,质量,电喷雾电离免疫学技术

LC-MS／MS测定健康人体内乌苯美司浓度及其药动学(英文)

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中国新药与临床杂志 2009年第8期28卷 576-581页

作者：孙颖光张淑慧赫立恩马杰河北省人民医院药学部河北石家庄050051

目的建立测定人血浆中乌苯美司的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。方法采用Inertsil ODS-3(50mm×2.1mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-20mmol·L-1甲酸铵(含0.05%甲酸)(50∶50,V/V),流速:0.3mL·min-1;质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子模式检测,监测离子为309.55→119.88(乌苯美司)和339.25→280.8(溴莫普林,内标)。结果乌苯美司在2～3000μg·L-1线性关系良好(r=0.9982),定量限为2μg·L-1。主要药动学参数分别为:ρmax(2702±s431)μg·L-1,tmax(0.58±0.26)h,t虔蚝α(0.53±0.17)h,t虔蚝β(1.9±0.5)h,AUC0～t(3744±574)μg·h·L-1,Vc/F(0.0080±0.0020)L,CL(0.0082±0.0012)L·h-1。结论本方法操作简便、准确、灵敏,适用于乌苯美司的人体药动学研究。

关键词：乌苯美司色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离药动学

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中倍他米松的浓度

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中国新药与临床杂志 2011年第3期30卷 220-225页

作者：谭洁贺春晖刘江慧余潜胡云芳程俊霖于翠霞周洁樊宏伟朱余兵邹建军南京医科大学附属南京第一医院国家药物临床试验机构江苏南京210006 南京医科大学药学院江苏南京210029

目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中倍他米松(BOH)浓度的方法。方法采用Agilent Zorbax C_(18)(2.1mm×150mm,5μm)色谱柱,柱温25℃,流动相为甲醇-水(85:15,V/V),流速为0.2mL·min^(-1),电喷雾(ESI)离子源,多反应离... 详细信息

目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中倍他米松(BOH)浓度的方法。方法采用Agilent Zorbax C_(18)(2.1mm×150mm,5μm)色谱柱,柱温25℃,流动相为甲醇-水(85:15,V/V),流速为0.2mL·min^(-1),电喷雾(ESI)离子源,多反应离子监测(MRM)的扫描方式。BOH采用负离子检测,二丙酸倍氯米松(内标,IS)采用正离子检测,BOH和IS的离子通道分别选择为m/z 361.0→m/z307.2和m/z 543.1→m/z 433.2。结果 BOH在0.1～30μg·L^(-1)浓度范围内有良好的线性关系(r^2=0.999 1),定量下限(LOQ)为0.1μg·L^(-1),日内、日间精密度(RSD)均小于15%,提取回收率均在65%左右,相对回收率均在85%～115%范围内。结论该方法简便、准确、灵敏,可用于人血浆中BOH的浓度检测、人体药动学和生物等效性研究。

关键词：倍他米松色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离

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注射用多西他赛纳米粒在犬体内的药动学研究

中国新药与临床杂志 2008年第5期27卷 323-328页

作者：武亦文闻俊范国荣李亚平吴玉田中国人民解放军第二军医大学药学院药物分析教研室中国科学院上海药物所上海201203

目的建立高通量测定犬血浆中多西他赛浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并将其应用于注射用多西他寒纳米粒与多西他赛注射液的药动学比较研究。方法2组Beagle犬分别前肢静脉注射5 mg·kg^(-1)的注射用多西他赛纳米粒和多西他赛注... 详细信息

目的建立高通量测定犬血浆中多西他赛浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并将其应用于注射用多西他寒纳米粒与多西他赛注射液的药动学比较研究。方法2组Beagle犬分别前肢静脉注射5 mg·kg^(-1)的注射用多西他赛纳米粒和多西他赛注射液后,后肢静脉取血约0.5 mL。血浆样品及内标紫杉醇置于96孔板中,采用8道移液器取液进行高通量的液液萃取。采用LC-MS/MS法测定血药浓度,计算主要药动学参数。结果多西他赛的线性范围为1～500μg·L^(-1),最低定量限为1μg·L^(-1),提取回收率均大于95%,批内、批问精密度(RSD)均小于15%。注射用多西他赛纳米粒和多西他赛注射液,t_(1/2)分别为(5.3±s 1.4)和(3.2±1.4)h,MRT分别为(3.2±1.3)和(0.66±0.21)h,V_(ss)分别为(83±48)和(15±6)L,且2种制剂的t_(1/2)、MRT和V_(ss)均具有显著差异。结论该方法灵敏、准确、专一、简便并且实现高通量分析,适用于多西他赛的药动学比较研究。与多西他赛注射液相比,注射用多西他赛纳米粒能控制药物释放速率,并具有较长的体内循环时间,在一定程度上控制了急性毒性,提高机体耐受性。

关键词：多西他赛纳米粒药动学色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离

银杏叶滴丸剂与片剂的药动学及生物等效性评价

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中国新药与临床杂志 2005年第12期24卷 946-950页

作者：王长虹李宏侴桂新程雪梅张芳王峥涛上海中医药大学中药研究所浙江九旭药业有限公司浙江金华321000

目的:对银杏滴丸剂和片剂的药动学和生物等效性进行研究和评价。方法:10只新西兰家兔随机分成2组,先后单剂量口服受试制剂和参比制剂后,采用高效液相色谱质谱(HPLCMS)法测定家兔分别口服银杏叶滴丸剂与片剂后血中银杏内酯A(ginkgolideA,... 详细信息

目的:对银杏滴丸剂和片剂的药动学和生物等效性进行研究和评价。方法:10只新西兰家兔随机分成2组,先后单剂量口服受试制剂和参比制剂后,采用高效液相色谱质谱(HPLCMS)法测定家兔分别口服银杏叶滴丸剂与片剂后血中银杏内酯A(ginkgolideA,GA),银杏内酯B(ginkgolideB,GB),银杏内酯C(ginkgolideC,GC)及白果内酯(bilobalide,BB)的血药浓度。用3P97药动学程序计算GA,GB,GC及BB的药动学参数。以AUC0～12,tmax和cmax为指标,以双单侧t检验进行生物等效性判定。结果:家兔分别口服银杏叶滴丸剂及片剂后GA,GB,GC及BB均符合一房室模型。口服滴丸剂后GA,GB,GC及BB相对于口服片剂的生物利用度分别为104%,109%,112%和110%。2种制剂的药动学参数无显著差异。结论:银杏叶滴丸剂和对照剂型银杏叶片剂生物等效。

关键词：二裂银杏片剂药动学色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离生物等效性银杏内酯白果内酯滴丸剂

液质联用法测定犬血浆中阿普唑仑及其代谢物α-羟基阿普唑仑的浓度

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中国新药与临床杂志 2008年第10期27卷 746-750页

作者：毛叶萌张奇志武炳贤沈烨虹陈恩冯亮蒋新国复旦大学药学院药剂学教研室上海200032 上海市精神卫生中心上海200030

目的建立测定Beagle犬血浆中阿普唑仑及其代谢物α-羟基阿普唑仑浓度的液相色谱-质谱联用(LC-MS)法。方法血浆样品采用1 mol·L^(-1)硼酸盐缓冲液(pH 9.0)碱化、乙酸乙酯-正庚烷(85:15,V:V)萃取后LC-MS测定。色谱柱:Zorbax SB-C_(18)柱(... 详细信息

目的建立测定Beagle犬血浆中阿普唑仑及其代谢物α-羟基阿普唑仑浓度的液相色谱-质谱联用(LC-MS)法。方法血浆样品采用1 mol·L^(-1)硼酸盐缓冲液(pH 9.0)碱化、乙酸乙酯-正庚烷(85:15,V:V)萃取后LC-MS测定。色谱柱:Zorbax SB-C_(18)柱(150 mm×3 mm,3.5μm);流动相:乙腈-0.01 mol·L^(-1)乙酸胺缓冲液(含1%甲酸)(45:55,V:V);流速:0.3 mL·min^(-1);柱温:40℃。采用电喷雾正离子模式离子化,用于定量分析的离子分别为m/z 309.2(阿普唑仑)、m/z 325.2(α-羟基阿普唑仑)和m/z 343.2(三唑仑,内标)。结果阿普唑仑和α-羟基阿普唑仑的线性范围分别为0.5～50μg·L^(-1)和0.5～32μg·L^(-1),两者定量下限均为0.5μg·L^(-1),提取回收率均>80%,方法回收率为97.3%～102.5%,批内RSD≤10.4%,批间RSD≤12.2%。结论本方法灵敏、准确、重现性好,适用于阿普唑仑犬体内药动学研究。

关键词：阿普唑仑 α-羟基阿普唑仑血浆犬色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离

氨氯地平2种片剂在中国健康志愿者体内的生物等效性

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中国新药与临床杂志 2009年第8期28卷 599-603页

作者：江涛孙菁陈冰陈聪颖谢一凡徐懿萍徐荣静陆阳荣征星上海交通大学医学院药物研究所上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院国家药品临床研究机构上海200025 山德士(中国)有限公司上海200031

目的评价2种氨氯地平片剂在中国健康志愿者体内的生物等效性。方法24名健康男性受试者,随机分为2组,分别单剂量口服氨氯地平受试制剂或参比制剂10mg。14d清洗期后再交叉给药。于服药前(0h)和服药后2、4、6、8、10、14、24、36、48、72... 详细信息

目的评价2种氨氯地平片剂在中国健康志愿者体内的生物等效性。方法24名健康男性受试者,随机分为2组,分别单剂量口服氨氯地平受试制剂或参比制剂10mg。14d清洗期后再交叉给药。于服药前(0h)和服药后2、4、6、8、10、14、24、36、48、72、96、120h抽取静脉血,采用LC-MS/MS法测定血浆中氨氯地平的浓度。利用DAS2.1.1软件计算主要药动学参数,并对2种制剂进行生物等效性评价。结果受试制剂和参比制剂的tmax分别为(6.7±s2.1)h和(6.8±1.8)h,ρmax分别为(7.0±1.3)μg·L-1和(7.3±1.8)μg·L-1,AUC0～120分别为(329±73)μg·h·L-1和(325±83)μg·h·L-1,AUC0～∞分别为(383±96)μg·h·L-1和(369±97)μg·h·L-1。受试制剂的相对生物利用度为(105±24)%。结论2种氨氯地平片剂在中国健康志愿者体内具有生物等效性。

关键词：氨氯地平色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离药动学生物等效性

高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中洛伐他汀的浓度

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中国新药与临床杂志 2005年第12期24卷 954-957页

作者：郁韵秋黄建明翁伟宇顾丽华王以俭张莉复旦大学药学院药物分析教研室上海200032 复旦大学药学院药剂学教研室上海200032

目的:建立高效液相色谱质谱联用法测定人血浆中洛伐他汀的浓度。方法:色谱条件———色谱柱为DiamonsilC18(150mm×2.1mm,5μm),流动相为乙腈∶水=60∶40,流速为0.4mL·min-1,柱温40℃;质谱条件———电喷雾离子化法(ESI)采集正离子,单... 详细信息

目的:建立高效液相色谱质谱联用法测定人血浆中洛伐他汀的浓度。方法:色谱条件———色谱柱为DiamonsilC18(150mm×2.1mm,5μm),流动相为乙腈∶水=60∶40,流速为0.4mL·min-1,柱温40℃;质谱条件———电喷雾离子化法(ESI)采集正离子,单离子方式检测洛伐他汀m/z405和内标辛伐他汀m/z419。血浆样品预处理采用环己烷二氯甲烷(3∶1)萃取法。结果:方法的线性范围为0.5～50μg·L-1,r=0.9989,检测限为0.1μg·L-1,标准血浆样品0.5,4,20μg·L-1的日内和日间精密度为RSD法回收率为88.12%～112.09%,提取回收率为76.28%～77.15%。结论:该法灵敏、专属,适用于洛伐他汀人体药动学的研究。

关键词：洛伐他汀色谱法,高压液相光谱法,质量,电喷雾电离