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强化厌氧表达dld基因以提高大肠杆菌工程菌发酵产L-乳酸的光学纯度

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中国酿造 2024年第8期43卷 115-121页

作者：余杰李正王金华王永泽高娃赵筱湖北工业大学生命科学与健康工程学院湖北武汉430068 湖北工业大学发酵工程教育部重点实验室湖北武汉430068 湖北工业大学工业发酵省部共建协同创新中心湖北武汉430068

为去除廉价发酵原料中的D-乳酸从而提高发酵最终产物L-乳酸的光学纯度,该研究通过构建带有不同厌氧诱导启动子(pflBp6、pnirB、pflBp6-pnirB)的D-乳酸脱氢酶基因(dld)的表达质粒,并将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)HBUT-L,加强... 详细信息

为去除廉价发酵原料中的D-乳酸从而提高发酵最终产物L-乳酸的光学纯度,该研究通过构建带有不同厌氧诱导启动子(pflBp6、pnirB、pflBp6-pnirB)的D-乳酸脱氢酶基因(dld)的表达质粒,并将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)HBUT-L,加强其在发酵产L-乳酸的同时消除外源D-乳酸的能力。通过装液量与转速的单因素试验筛选最优的质粒表达条件及菌株,并在无机盐培养基与玉米浆培养基中进行发酵验证。结果表明,在装液量为200 mL/250 mL、转速为150 r/min的条件下,含有启动子pflBp6-pnirB的表达质粒的工程菌株HBUT-L4发酵18 h时D-乳酸脱氢酶活力最高,为81.1 U/g。在此条件下进行无机盐培养基和玉米浆培养基发酵时,工程菌株HBUT-L4相对于出发菌株HBUT-L,D-乳酸消耗速率分别提高250%、217%,L-乳酸的光学纯度分别从96.32%、98.48%提升至99.95%、99.98%。在大肠杆菌工程菌发酵L-乳酸的过程中,带有厌氧诱导启动子pflBp6-pnirB的表达质粒可提高D-乳酸脱氢酶活力,强化菌株消除外源D-乳酸,进而提高L-乳酸的光学纯度的能力,具有重要的工业化应用价值。

关键词： L-乳酸光学纯度启动子 D-乳酸脱氢酶基因大肠杆菌

预聚物光学纯度对立体复合聚乳酸固相缩聚产物的影响

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高分子材料科学与工程 2019年第2期35卷 74-79,85页

作者：吴单王婷兰姚远董亮唐颂超华东理工大学材料科学与工程学院上海200237

采用乳酸为引发剂,辛酸亚锡为催化剂,引发丙交酯开环聚合制备光学纯度不同的预聚物L-聚乳酸(PLLA)和D-聚乳酸(PDLA);将光学纯度相近的预聚物熔融共混后进行固相缩聚,研究了预聚物光学纯度对立体复合聚乳酸固相缩聚产物的影响,分析了固... 详细信息

采用乳酸为引发剂,辛酸亚锡为催化剂,引发丙交酯开环聚合制备光学纯度不同的预聚物L-聚乳酸(PLLA)和D-聚乳酸(PDLA);将光学纯度相近的预聚物熔融共混后进行固相缩聚,研究了预聚物光学纯度对立体复合聚乳酸固相缩聚产物的影响,分析了固相缩聚产物的链结构、相对分子质量、晶体结构、动态力学性能及降解性能。结果表明,预聚物的光学纯度随着原料单体丙交酯中异构单体含量的增加而降低,预聚物光学纯度的降低使缩聚过程中均相晶体以及立体复合晶体含量降低,从而促进了固相缩聚产物相对分子质量的增加。当预聚物的光学纯度降为95.5%时,固相缩聚产物相对分子质量的增长幅度最大,较未添加异构单体的缩聚产物而言,其相对分子质量提升了97.6%。随着光学纯度的降低,固相缩聚产物的储能模量、耗能模量及玻璃化转变温度下降,吸水率增加。

关键词：固相缩聚立体复合聚乳酸光学纯度

质谱中的立体化学效应（19）──对映异构的α－苯乙胺光学纯度质谱测定

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高等学校化学学报 1996年第9期17卷 1421-1423页

作者：吴忆南涂亚平潘远江陈耀祖崔勐宋凤瑞刘淑莹浙江大学化学系兰州大学应用有机化学国家重点实验室中国科学院长春应用化学研究所郑州大学分析测试中心

质谱中的立体化学效应（１９）──对映异构的α－苯乙胺光学纯度质谱测定吴忆南，涂亚平，潘远江，陈耀祖（浙江大学化学系，杭州，３１００２７，兰州大学应用有机化学国家重点实验室）崔勐，宋凤瑞，刘淑莹（中国科学院长春应用化学... 详细信息

质谱中的立体化学效应（１９）──对映异构的α－苯乙胺光学纯度质谱测定吴忆南，涂亚平，潘远江，陈耀祖（浙江大学化学系，杭州，３１００２７，兰州大学应用有机化学国家重点实验室）崔勐，宋凤瑞，刘淑莹（中国科学院长春应用化学研究所）关键词对映体，光学纯度，质...

关键词：对映体光学纯度质谱测定立体化学苯乙胺

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光学纯度对聚左旋乳酸结晶与熔融行为的影响

应用化学 2016年第8期33卷 887-893页

作者：项盛邵俊冯立栋李杲陈学思边新超刘凤岐中国科学院长春应用化学研究所生态环境高分子材料重点实验室长春130022 中国科学院大学北京100049 江西师范大学化学化工学院南昌330027 吉林大学化学学院长春130012

通过示差扫描量热仪（DSC）和广角X射线衍射仪（WAXD）研究了聚左旋乳酸（PIJ．A）的光学纯度（91．6％、93．3％、94．0％、97．0％、98．4％）对聚乳酸结晶和熔融行为的影响。在非等温结晶过程中，随着光学纯度的提高，聚乳酸的结晶... 详细信息

通过示差扫描量热仪（DSC）和广角X射线衍射仪（WAXD）研究了聚左旋乳酸（PIJ．A）的光学纯度（91．6％、93．3％、94．0％、97．0％、98．4％）对聚乳酸结晶和熔融行为的影响。在非等温结晶过程中，随着光学纯度的提高，聚乳酸的结晶峰值温度、熔点、熔融焓均提高。在等温结晶过程中，PLLA的半结晶时间（t1/2）随着光学纯度的增加而减少，在结晶温度100～110℃区间内半结晶时间均达到最小值；含有不同光学纯度PuA的Avrami指数n=3，表明光学纯度的变化不能改变聚乳酸以三维球晶生长的异相成核机理。随着光学纯度的增加，聚乳酸δ-晶型转变为α-晶型的临界温度升高。聚乳酸的结晶和熔融行为对光学纯度具有依赖性。

关键词：聚左旋乳酸光学纯度结晶

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手性仲丁胺的制备拆分和光学纯度的测定

有机化学 2003年第4期23卷 390-392页

作者：车超代星毛淑芬徐彦军覃兆海中国农业大学应用化学学院北京100094

为了获取仲丁胺的两种光学纯对映异构体 ,采用D 或L 酒石酸作为拆分试剂 ,经过多次结晶 ,分别得到S ( +) 仲丁胺·L ( +) 酒石酸盐和R ( -) 仲丁胺·D ( -) 酒石酸盐晶体 ,从而成功实现了其分离 .产物的光学纯度通过用光活性(R) ... 详细信息

为了获取仲丁胺的两种光学纯对映异构体 ,采用D 或L 酒石酸作为拆分试剂 ,经过多次结晶 ,分别得到S ( +) 仲丁胺·L ( +) 酒石酸盐和R ( -) 仲丁胺·D ( -) 酒石酸盐晶体 ,从而成功实现了其分离 .产物的光学纯度通过用光活性(R) 联萘酚磷酰氯衍生成 (R) 联萘酚磷酰胺后 ,经3 1PNMR测定 ,o .p .>99% ,拆分剂D 或L 酒石酸经过强酸型阳离子交换树脂 ( 0 0 1× 7× 7型 )方便回收 ,回收率 >80 % .

关键词：手性仲丁胺制备手性拆分光学纯度测定对映异构体

3种芳香连二醇对映体的毛细管区带电泳手性拆分及其光学纯度分析

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分析化学 2006年第3期34卷 293-297页

作者：赵燕孙晓莉杨兴斌南鹏娟金瑛张生勇第四军医大学化学教研室陕西师范大学生命科学学院

以磺化环糊精为毛细管区带电泳(CZE)手性选择剂,成功地分离了3种烯烃的不对称二羟化产物苯基乙二醇、β-甲基苯基-乙二醇和1,2-二苯基乙二醇对映体;考察了不同手性选择剂及其浓度、背景电解质pH值、操作电压等因素对分离的影响,优化了... 详细信息

以磺化环糊精为毛细管区带电泳(CZE)手性选择剂,成功地分离了3种烯烃的不对称二羟化产物苯基乙二醇、β-甲基苯基-乙二醇和1,2-二苯基乙二醇对映体;考察了不同手性选择剂及其浓度、背景电解质pH值、操作电压等因素对分离的影响,优化了分离条件;对该3种芳香连二醇对映体样品进行了光学纯度检查,并与HPLC测定结果作比较,评价该方法的准确性。结果表明:两批样品中对映体过量(ee)测定值与HPLC法结果相一致,CZE方法简单、准确、分离度好,可用于该芳香连二醇中性化合物的手性拆分和ee值的测定。

关键词：芳香连二醇磺化环糊精手性分离光学纯度毛细管区带电泳

柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸的光学纯度

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分析化学 2007年第4期35卷 545-548页

作者：余荔宋航徐旭杨丹陈宇静四川大学制药与生物工程系四川大学制药与生物工程系成都610065

用苯胺对四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸(TTCA)进行柱前衍生,将其衍生物在手性固定相上拆分,通过二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对其衍生物进行检测,建立了一种拆分TTCA消旋体、测定TTCA光学纯度的新方法。以正己烷和乙醇或异丙醇为流动... 详细信息

用苯胺对四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸(TTCA)进行柱前衍生,将其衍生物在手性固定相上拆分,通过二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对其衍生物进行检测,建立了一种拆分TTCA消旋体、测定TTCA光学纯度的新方法。以正己烷和乙醇或异丙醇为流动相,在DNB-Leucine手性固定相上对TTCA衍生物进行了拆分,并考察了流动相组成和柱温对其衍生物分离的影响,获得较优分析条件,分离因子大于1.2。非手性试剂苯胺柱前衍生化法测定(R)-TTCA的光学纯度与旋光度方法比较,结果一致,相对偏差小于1.34%。

关键词：高效液相色谱柱前衍生化手性固定相四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸光学纯度

来源：博看期刊

柱前衍生化高效液相色谱法准确测定2-氯丙酸的光学纯度

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分析化学 2007年第8期35卷 1195-1198页

作者：李俊峰都婷婷兰先秋张义文宋航四川大学制药与生物工程系四川大学制药与生物工程系成都610065

用1-萘胺对2-氯丙酸进行柱前衍生化,衍生化反应在30℃条件下进行10min或更长时间。选择ChiralcelOD-H色谱柱和正己烷-醇类为流动相,考察了流动相组成和柱温的变化对2-氯丙酸衍生物对映体拆分效果的影响。确定流动相为V(正己烷):V(甲醇)... 详细信息

用1-萘胺对2-氯丙酸进行柱前衍生化,衍生化反应在30℃条件下进行10min或更长时间。选择ChiralcelOD-H色谱柱和正己烷-醇类为流动相,考察了流动相组成和柱温的变化对2-氯丙酸衍生物对映体拆分效果的影响。确定流动相为V(正己烷):V(甲醇):V(乙醇)=50:45:5,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长224nm为较优分析条件,分离因子2.5,8min内出峰。现有文献和试剂手册提供的2-氯丙酸的比旋光度标准值之间相差很大,在实际测量和计算中无准确标准可依。柱前衍生化结合手性固定相色谱方法灵敏度高,重现性好,操作较简单,可用于准确测量2-氯丙酸的光学纯度,并准确给出一定条件下2-氯丙酸的比旋光度和光学纯度的对应关系([α]D20-13.94(neat,d1.2547),e.e.97.9%)。

关键词： 2-氯丙酸柱前衍生化手性固定相高效液相色谱光学纯度

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L-乳酸调控乳酸产生菌产物光学纯度的分析

生物工程学报 2009年第11期25卷 1679-1683页

作者：孟武李十中封文涛张晗星王瑞明山东轻工业学院食品与生物工程学院济南250353 清华大学核能与新能源研究院北京100084

发酵初期在米根霉菌发酵培养基中添加L-乳酸可以调控发酵产物乳酸的光学纯度。随着L-乳酸添加量的增加,所产L-乳酸的光学纯度随之增加,当L-乳酸的添加量≥1.5g/L时,D-乳酸不再产生。同时,L-乳酸的产量、生物量、糖转化率也随之降低。该... 详细信息

发酵初期在米根霉菌发酵培养基中添加L-乳酸可以调控发酵产物乳酸的光学纯度。随着L-乳酸添加量的增加,所产L-乳酸的光学纯度随之增加,当L-乳酸的添加量≥1.5g/L时,D-乳酸不再产生。同时,L-乳酸的产量、生物量、糖转化率也随之降低。该调控方法对乳酸菌调控产L-乳酸光学纯度影响不大,对大肠杆菌发酵调控产D-乳酸光学纯度没有效果。

关键词： L-乳酸 D-乳酸光学纯度米根霉乳酸菌大肠杆菌调控