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猪催乳素的真核表达与生物活性验证

华南农业大学学报 2024年第2期45卷 179-189页

作者：谢社风韩贝贝高凤磊马莹李莉张守全邹娴卫恒习国家生猪种业工程技术研究中心/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室/华南农业大学动物科学学院广东广州510642 广东农工商职业技术学院热带农林学院广东广州510507 广东省农业科学院动物科学研究所广东广州510640 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000

【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MC... 详细信息

【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro中,经慢病毒包装获得携带猪PRL基因的PRL-慢病毒;用浓缩的PRL-慢病毒感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得能够分泌PRL重组蛋白的阳性细胞系CHO-K1-PRL;利用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化并进行LC-MS/MS质谱鉴定,利用HC11细胞体外培养体系验证PRL重组蛋白的生物活性。【结果】成功构建了携带猪PRL基因的pCDH-CMV-6His-PRL-6HisEF1-GFP+Puro慢病毒表达载体;包装及浓缩后的PRL-慢病毒滴度为9.9×10^(8) TU/mL,其感染的CHO-K1细胞经嘌呤霉素筛选后得到阳性细胞系CHO-K1-PRL;从CHO-K1-PRL细胞培养液中成功纯化出重组蛋白,质量浓度为50μg/mL,LC-MS/MS质谱分析的覆盖率达94%,鉴定为猪PRL重组蛋白;重组PRL具有促进HC11细胞增殖及酪蛋白表达的生物活性。【结论】构建的细胞系CHO-K1-PRL可稳定表达具有生物活性的猪重组PRL,为猪PRL功能的研究和生产应用奠定了基础。

关键词：猪催乳素 CHO-K1细胞真核表达慢病毒载体重组蛋白

浙东白鹅催乳素选择性剪接体基因克隆和活性初步鉴定

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中国畜牧杂志 2024年第5期60卷 195-205页

作者：周晓龙徐中宝樊金云赵阿勇杨松柏浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

催乳素(Prolactin,PRL)在家禽卵泡发育和就巢行为中扮演着至关重要的调控角色。本研究深入剖析了浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体及其蛋白结构,进而发现了一种新的剪接体PRL-S。利用生物信息学软件,对2种剪接体的mRNA和蛋白序列进行了详... 详细信息

催乳素(Prolactin,PRL)在家禽卵泡发育和就巢行为中扮演着至关重要的调控角色。本研究深入剖析了浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体及其蛋白结构,进而发现了一种新的剪接体PRL-S。利用生物信息学软件,对2种剪接体的mRNA和蛋白序列进行了详尽的对比分析,成功获取了PRL-L和PRL-S的全长CDS序列。在对比中,发现PRL-S缺乏信号肽,且其N端缺失了57个氨基酸,其N端的前19个氨基酸序列与PRL-L存在显著差异。进一步对PRL-S蛋白的二级结构分析,发现其N端的第一个α-螺旋已完全消失。为了深入研究PRL-S的生物学功能,利用原核表达系统成功制备了高纯度的PRL蛋白,并通过pET28a原核表达系统对重组PRL蛋白进行了表达。随后,通过CO-IP和双荧光素酶报告系统等试验,证实了PRL-S重组蛋白确实具有一定的生理活性。本研究不仅为深入理解浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体在就巢行为调控中的作用提供了重要线索,同时也为通过调控这些剪接体来提高浙东白鹅的产蛋量奠定了坚实的理论基础。

关键词：催乳素 PRLR基因剪接体原核表达浙东白鹅

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催乳素对奶牛RANKL基因启动子活性的研究

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中国乳品工业 2024年第2期52卷 33-37页

作者：毛永尽杨慧琳马晓聪赵锋崔英俊东北农业大学乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030

文章以奶牛乳腺上皮细胞为实验模型,探讨催乳素对RANKL基因启动子活性的调节。采用Western Blot方法检测催乳素对RANKL蛋白表达的影响,构建RANKL启动子荧光素酶载体,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测催乳素对RANKL基因启动子活性影响... 详细信息

文章以奶牛乳腺上皮细胞为实验模型,探讨催乳素对RANKL基因启动子活性的调节。采用Western Blot方法检测催乳素对RANKL蛋白表达的影响,构建RANKL启动子荧光素酶载体,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测催乳素对RANKL基因启动子活性影响,采用定点合成突变的方法,构建突变型RANKL启动子荧光素酶载体,运用双荧光素酶报告基因检测系统检测催乳素对突变型RANKL启动子活性影响。结果表明,催乳素能够显著提高乳腺上皮细胞RANKL启动子活性及RANKL蛋白表达,催乳素响应元件在奶牛RANKL基因启动子-826~-814 bp区域。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞催乳素 RANKL STAT5a

垂体催乳素瘤的临床特点及诊治要点更新--基于《2022版ICCE/AME垂体催乳素瘤临床实践共识》解读

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中国全科医学 2024年第6期27卷 650-655页

作者：谭惠文李丹婷余叶蓉四川大学华西医院内分泌代谢科四川省成都市610041 四川大学华西医院垂体瘤及相关疾病诊疗中心四川省成都市610041

垂体催乳素瘤是一种由垂体催乳素细胞瘤过量合成和分泌催乳素引起的神经内分泌疾病,垂体催乳素瘤的规范化诊疗对于恢复并维持患者的正常垂体功能并提高其生活质量具有重要意义。2022年1月,《欧洲内分泌杂志》发布了国际临床内分泌学分会... 详细信息

垂体催乳素瘤是一种由垂体催乳素细胞瘤过量合成和分泌催乳素引起的神经内分泌疾病,垂体催乳素瘤的规范化诊疗对于恢复并维持患者的正常垂体功能并提高其生活质量具有重要意义。2022年1月,《欧洲内分泌杂志》发布了国际临床内分泌学分会(ICCE)与意大利临床内分泌学家协会(AME)关于垂体催乳素瘤的临床实践最新共识申明——《2022版ICCE/AME垂体催乳素瘤临床实践共识》(简称2022版ICCE/AME新共识)。2022版ICCE/AME新共识立足最新循证医学证据,对于垂体催乳素瘤的临床诊治问题进行系统性阐述、分析和建议。本文围绕2022版ICCE/AME新共识关于垂体催乳素瘤的诊断、治疗、特殊人群、多巴胺激动剂抵抗及侵袭性疾病等诊治要点更新进行解读,希望有助于全科医生及内分泌专科医生对于垂体催乳素瘤的认识,为其临床实践的规范化诊疗提供参考。

关键词：催乳素瘤垂体肿瘤高催乳素血症指南催乳素多巴胺激动剂药物治疗

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催乳素与产妇泌乳关系的研究进展

护理学 2024年第2期13卷 141-148页

作者：李星星周梦佳刘李肖归张婷婷张瑜秦春香陈正英吉首大学医学院湖南湘西中南大学湘雅医学院湖南长沙中南大学湘雅三医院湖南长沙

泌乳是乳腺分泌乳汁的过程,其过程与内分泌系统有错综复杂的联系。催乳素是与泌乳有关的主要激素之一,了解其在泌乳过程中的激素变化对泌乳障碍的妇女具有临床应用价值;因此,本文对催乳素与泌乳的启动、维持及泌乳量之间的关系进行综述... 详细信息

泌乳是乳腺分泌乳汁的过程,其过程与内分泌系统有错综复杂的联系。催乳素是与泌乳有关的主要激素之一,了解其在泌乳过程中的激素变化对泌乳障碍的妇女具有临床应用价值;因此,本文对催乳素与泌乳的启动、维持及泌乳量之间的关系进行综述,为进一步确定开展相关研究提供参考依据。

关键词：泌乳催乳素泌乳启动泌乳量

催乳素水平降低在内分泌科住院的绝经女性非酒精性脂肪性肝病发生中的作用分析

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国际内分泌代谢杂志 2024年第2期44卷 78-82页

作者：徐萍毕艳朱烨张芃子南京大学医学院附属鼓楼医院内分泌科南京210008

目的探讨催乳素(PRL)在内分泌科住院的绝经女性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发生中的中介效应。方法回顾性分析2016年4月至2022年2月在南京大学医学院附属鼓楼医院内分泌科就诊的女性患者的临床资料, 根据纳排标准, 最终纳入2 399例。以... 详细信息

目的探讨催乳素(PRL)在内分泌科住院的绝经女性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发生中的中介效应。方法回顾性分析2016年4月至2022年2月在南京大学医学院附属鼓楼医院内分泌科就诊的女性患者的临床资料, 根据纳排标准, 最终纳入2 399例。以停经≥12个月为绝经的诊断标准, 分为未绝经组(n=705)和绝经后组(n=1 694);根据患者腹部超声结果诊断是否患有NAFLD。空腹抽血检测糖化血红蛋白、血糖、血脂、肝酶、催乳素及雌二醇等性激素水平。结果绝经后组较未绝经组NAFLD患病率更高(42.6%比29.4%, P催乳素水平显著低于未绝经组[6.8(5.0, 9.4) μg/L比11.3(8.5, 15.8) μg/L, P素logistic回归分析示, 绝经是女性NAFLD的危险因素(OR 2.278, 95%CI 1.551~3.347, P催乳素是NAFLD的保护因素(OR 0.944, 95%CI 0.921~0.968, P催乳素在女性绝经与NAFLD发生间起部分中介作用, 中介效应占比为36.88%。结论在内分泌科住院女性患者中, 血清催乳素水平下降可能介导了绝经后NAFLD的发生。

关键词：绝经非酒精性脂肪性肝病催乳素

抗精神病药物致高催乳素血症的作用机制、危险因素、临床特征与治疗策略

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中国药物滥用防治杂志 2024年第2期30卷 189-194页

作者：王忠宝李然然济宁医学院精神卫生学院山东济宁272000 山东省精神卫生中心/山东大学附属精神卫生中心精神科山东济南250014

高催乳素血症是患者在接受抗精神病药物治疗过程中经常出现的不良反应,长期的催乳素水平升高容易使患者出现性功能障碍、骨质疏松、月经不调甚至闭经等不良后果。催乳素是垂体前叶的催乳素细胞分泌的一种激素,多巴胺通过与催乳素细胞膜... 详细信息

高催乳素血症是患者在接受抗精神病药物治疗过程中经常出现的不良反应,长期的催乳素水平升高容易使患者出现性功能障碍、骨质疏松、月经不调甚至闭经等不良后果。催乳素是垂体前叶的催乳素细胞分泌的一种激素,多巴胺通过与催乳素细胞膜上的多巴胺D2受体结合,防止催乳素的过度分泌。抗精神病药物通过阻断这些受体,使多巴胺失去对催乳素分泌的抑制作用,导致高催乳素血症的发生。同时,抗精神病药物透过血脑屏障能力的强弱、与多巴胺D2受体亲和力的高低以及对多巴胺受体是抑制作用还是激动作用都会导致催乳素水平的不同。目前的治疗方法包括减少抗精神病药物的剂量、停用抗精神病药物、换用另一种不易引起高催乳素血症的抗精神病药物,或联用阿立哌唑、多巴胺受体激动剂(卡麦角林和溴隐亭)、二甲双胍和中草药等。本文对高催乳素血症的发病机制、危险因素、临床特征以及目前的常用治疗策略做一综述,旨在为今后高催乳素血症患者的治疗、康复和管理提供指导。

关键词：高催乳素血症抗精神病药物不良反应催乳素

长期住院精神分裂症患者甲状腺功能和催乳素随访8年变化研究

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浙江医学 2024年第11期46卷 1168-1172,1191页

作者：杨颖佳叶小英张四美谢新晖杨斌让汕头大学医学院 515041 深圳市康宁医院精神科湖北省人民医院精神科深圳市儿童医院儿童保健科

目的探讨长期住院精神分裂症患者甲状腺功能和催乳素(PRL)随访8年变化。方法回顾性选取2014年1月至2022年9月在深圳市康宁医院长期住院的105例精神分裂症患者为研究对象,以患者参加长期住院计划的年份为基线,随访频率1次/年,共随访8年... 详细信息

目的探讨长期住院精神分裂症患者甲状腺功能和催乳素(PRL)随访8年变化。方法回顾性选取2014年1月至2022年9月在深圳市康宁医院长期住院的105例精神分裂症患者为研究对象,以患者参加长期住院计划的年份为基线,随访频率1次/年,共随访8年。每个年末统计甲状腺功能指标[包括促甲状腺激素(TSH)、T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)]和PRL水平,以当年各项指标平均值作为记录值。采用重复测量混合模型分析精神分裂症患者整体以及不同性别随访8年甲状腺功能指标和PRL变化,进一步分析各项指标与抗精神病药物剂量的交互关系以及抗精神病药物种类与PRL的交互关系。结果与基线比较,精神分裂症患者TSH在第2~8年末均较高(均P0.05)。与女性患者比较,男性精神分裂症患者第6年末TSH较低(P<0.05),第7年末T_(3)较低(P<0.05),第8年末T_(4)较低(P<0.01),第7、8年末FT_(3)均较高(均P<0.05),第1~3年末以及第7年末PRL均较低(均P<0.05)。T_(3)、PRL与抗精神病药物剂量(奥氮平等效剂量)均存在交互关系(均P<0.05),阿立哌唑、氨磺必利、利培酮、氯氮平、舒必利剂量与PRL均存在交互关系(均P<0.01)。结论长期住院精神分裂症患者在8年随访期间甲状腺功能指标持续变化,而PRL变化虽不明显,但不同性别、抗精神病药物剂量及种类患者之间存在一定的差异。

关键词：精神分裂症抗精神病药物甲状腺功能催乳素

七彩神仙鱼催乳素基因的克隆、定位及表达分析

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广东农业科学 2024年第4期51卷 35-44页

作者：成果温彬高建忠陈再忠上海海洋大学水产与生命学院/农业农村部淡水水产种质资源重点实验室/水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室/水产科学国家级实验教学示范中心

【目的】七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具有特殊的亲代抚育行为，克隆并定位七彩神仙鱼催乳素基因，分析其在亲代抚育中的表达模式，为理解催乳素在七彩神仙鱼亲代抚育中的作用提供依据。【方法】通过BLASTP对七彩神仙鱼全基... 详细信息

【目的】七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具有特殊的亲代抚育行为，克隆并定位七彩神仙鱼催乳素基因，分析其在亲代抚育中的表达模式，为理解催乳素在七彩神仙鱼亲代抚育中的作用提供依据。【方法】通过BLASTP对七彩神仙鱼全基因组进行分析，鉴定出1个催乳素基因，命名为dfprl。基于dfprl基因的CDS区，设计克隆和PCR引物，通过RACE技术克隆获得dfprl基因全长，并利用生物信息学对dfprl基因进行结构分析，对其氨基酸序列进行理化性质和进化分析。对不同抚育阶段七彩神仙鱼的脑、性腺和皮肤进行转录组分析，探究dfprl基因在亲代抚育中的表达特征，并利用原位杂交技术对dfprl基因在七彩神仙鱼皮肤中的表达进行定位。【结果】dfprl全长为1 282 bp，cDNA序列开放阅读框长度为639 bp，共编码212个氨基酸，5'-UTR为309 bp，3'-UTR为334 bp。dfprl蛋白存在PRL家族的典型结构域Hormone＿1，dfprl蛋白与慈鲷科其他鱼类PRL蛋白相似性较高，与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应的氨基酸序列同源性最高、为96.70%。亲鱼进入抚育阶段后，dfprl在性腺和皮肤中的表达水平逐渐上升，抚育结束时表达水平下降。原位杂交结果显示，dfprl在皮肤粘液细胞中表达，且与七彩神仙鱼催乳素受体(dfprlr)表达位点重叠，在抚育早期阶段高表达。【结论】七彩神仙鱼dfprl基因高度保守，存在稳定的Hormone＿1结构域。七彩神仙鱼dfprl基因在亲代抚育阶段的皮肤中高表达，且在亲代抚育阶段的皮肤粘液细胞中与dfprlr表达位点重合，表明dfprl可能通过作用于dfprlr进而促进七彩神仙鱼独特抚育行为的发生。

关键词：七彩神仙鱼催乳素亲代抚育皮肤粘液细胞基因克隆

来源：博看期刊