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盐藻Psy基因保守序列的克隆及同源性分析

华南理工大学学报（自然科学版） 2004年第10期32卷 76-79页

作者：姜建国严媛宋冬林华南理工大学食品与生物工程学院广东广州510640 中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430072

文中根据两种藻———Dunaliellabardawil和Haematococcuspluvialis的PsycDNA保守序列以及 6种植物———Arabidopsisthaliana ,Oryzasative ,Tageteserecta ,Lycopersi conesculentum ,Capsicumannuum和Daucuscarota的Psy基因氨基酸保守序列设计了上游引物 5 -GAGTACGCCAAGACCTTCTA - 3 和下游引物 5 -GTTGTCATAGT CATTCTTCTC - 3 .以盐藻基因组为模板、以 4 6～ 35℃每循环递减 0 .5℃的退火温度扩增获得的大小约为 2 4 90bp的片段 ,经NCBI/BlastP同源性分析推测其为Psy基因的部分片段 .

关键词：杜氏盐藻八氢番茄红素合成酶保守序列同源性分析

鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1内保守序列LLRKxGxKG的功能研究

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解放军医学杂志 2010年第5期35卷 508-512页

作者：林磊吴晓燕常国辉祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能。方法扩增并构建MHVNSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒。用所构建的真核表达质... 详细信息

目的研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能。方法扩增并构建MHVNSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒。用所构建的真核表达质粒转染L929细胞,经新城疫病毒(NDV)刺激诱导后,采用ELISA法检测IFN-β的表达水平,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β表达的影响。通过与含CAT和Luc报告基因的重组质粒进行共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β启动子活性和干扰素刺激应答元件(ISRE)活性的影响。通过与三种报告基因(pRLuc-CMV、pGL3-basic、pGL3-control)共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对共转染基因表达的影响。结果MHVNSP1对真核细胞产生干扰素有一定的影响,并可显著抑制IFN-β启动子或ISRE应答元件的活性,且该抑制作用不受LLRKxGxKG序列缺失的影响。同时,MHVNSP1还可强烈抑制多种共转染报告基因的表达。该抑制作用在LLRKxGxKG序列缺失后显著降低。结论MHVNSP1对Ⅰ型干扰素信号通路有特异的抑制作用。LLRKxGxKG序列是MHVNSP1的一个重要功能域,在抑制共转染基因表达过程中发挥着重要作用。

关键词：冠状病毒属肝炎病毒,鼠病毒非结构蛋白质类保守序列

HPV L1 C-末端保守序列短肽体液免疫学特性

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免疫学杂志 2009年第3期25卷 239-242,246页

作者：姜波玲肖长义袁太宁叶红王雅琴黎家华黄利鸣三峡大学医学院三峡大学第一临床医院湖北省宜昌市中心医院

目的探讨一段位于HPVL1C-末端、长30个氨基酸残基的保守序列的体液免疫学性质而进行此实验。方法以此序列为基础人工合成短肽,以该短肽免疫小鼠和兔,获得抗血清,通过ELISA,Western Blot及免疫组织化学的方法,分别对含HPV6b,16及18L1的... 详细信息

目的探讨一段位于HPVL1C-末端、长30个氨基酸残基的保守序列的体液免疫学性质而进行此实验。方法以此序列为基础人工合成短肽,以该短肽免疫小鼠和兔,获得抗血清,通过ELISA,Western Blot及免疫组织化学的方法,分别对含HPV6b,16及18L1的细胞裂解物、重组蛋白或HPV阳性临床标本进行反应。结果抗短肽抗血清能与含HPV6b,16及18L1的细胞裂解物、重组蛋白发生针对HPVL1的反应,能使HPV6和16阳性的临床标本呈现阳性反应,而抗HPV16及抗重组HPV16L1抗血清对此短肽的反应则较弱。结论结果表明由该保守序列短肽诱导的抗血清具有一定的型间交叉反应特征,这一特性可能对研究检测用广谱HPVL1抗体有一定的意义。该序列短肽抗血清对不同型HPVL1反应的差异性及抗血清对多型别HPVL1的反应是否具有中和性,尚需进一步的研究。

关键词： HPV 晚期蛋白L 保守序列免疫交叉反应

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莲雾乙烯受体基因保守序列的克隆及分析

华北农学报 2003年第F09期18卷 56-58页

作者：韩继成冯志红方宣钧河北省农林科学院昌黎果树研究所河北昌黎066600 河北职业技术师范学院河北昌黎066600 海南省热带作物资源研究利用开发研究所海南三亚572025

用莲雾的叶片提取基因组DNA作为模板,根据乙烯受体基因的保守序列设计引物,进行PCR扩增,得到长度约1 5kb的目的片段,将其克隆到pGEMT easy载体转化大肠杆菌,提取质粒,进行限制性内切酶图谱分析及序列测定。结果表明,该目的片段全长为140... 详细信息

用莲雾的叶片提取基因组DNA作为模板,根据乙烯受体基因的保守序列设计引物,进行PCR扩增,得到长度约1 5kb的目的片段,将其克隆到pGEMT easy载体转化大肠杆菌,提取质粒,进行限制性内切酶图谱分析及序列测定。结果表明,该目的片段全长为1400bp,与栽培稻(Oryzasativa)的osers基因组DNA可比对序列的一致性为98 68%。在所应用的12个内切酶中,该片段内部没有切点,根据序列特征和与其他乙烯受体基因序列比较,推测该片段有2个内含子和3个外显子片段组成,外显子总长为972bp,编码324个氨基酸,其中第197～324氨基酸残基与组氨酸蛋白激酶的磷酸基团接受域有同源性。

关键词：莲雾热带常绿果树乙烯受体基因保守序列克隆序列特征激素基因表达保守性分析

扑草净降解菌降解特性、降解基因保守序列的扩增及同源性分析

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城市环境与城市生态 2002年第4期15卷 61-63页

作者：颜慧李军红宋文华温孚江朱坦南开大学环境科学与工程学院天津300071 山东农业大学泰安271018

从受污染农田中分离到一株扑草净降解菌FR ,经鉴定属于假单胞菌 ,考察了温度及pH对其降解能力的影响 ,确定pH 7.0 ,32℃为最适作用条件 ;设计引物 ,通过PCR扩增得到一条长度约为 5 0 0bp的降解基因保守片段 ,通过对该片段部分序列测定... 详细信息

从受污染农田中分离到一株扑草净降解菌FR ,经鉴定属于假单胞菌 ,考察了温度及pH对其降解能力的影响 ,确定pH 7.0 ,32℃为最适作用条件 ;设计引物 ,通过PCR扩增得到一条长度约为 5 0 0bp的降解基因保守片段 ,通过对该片段部分序列测定及同源性搜索 ,证实该片段与atzA、triA等均三嗪化合物水解酶基因具有很高的同源性。

关键词：降解特性降解基因扩增扑草净降解菌保守序列同源性农药

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沃氏葡萄球菌尿素酶基因保守序列的克隆

上海口腔医学 2006年第1期15卷 66-68页

作者：王艳冯希平李鸣宇黄正蔚上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防儿童科上海200011 上海市口腔医学研究所上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔内科上海200011

目的:克隆沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。方法:通过脲酶试验,定性检测沃氏葡萄球菌的尿素分解活性,应用PCR克隆其尿素酶基因中的保守序列,测序并分析。结果:沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,其基因组中含有尿素酶基因,与已知的尿素... 详细信息

目的:克隆沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。方法:通过脲酶试验,定性检测沃氏葡萄球菌的尿素分解活性,应用PCR克隆其尿素酶基因中的保守序列,测序并分析。结果:沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,其基因组中含有尿素酶基因,与已知的尿素酶基因具有高度同源性。结论:本研究证实沃氏葡萄球菌具有尿素分解活性,并克隆出具有该活性的沃氏葡萄球菌尿素酶基因的部分保守序列。

关键词：沃氏葡萄球菌尿素酶保守序列

HPV L1C-末端保守序列多肽免疫学特性的探讨

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重庆医学 2014年第1期43卷 12-15页

作者：蒋雪梅肖长义吴江峰李红军袁太宁汤桂成三峡大学医学院湖北宜昌443002

目的探讨一段位于人乳头状瘤病毒(HPV)L1C-末端、长30个氨基酸残基的保守序列的免疫学性质而进行此实验。方法以此序列为基础人工合成多肽加氢氧化铝佐剂免疫小鼠。取免疫鼠脾脏制备脾细胞悬液,流式细胞术检测小鼠脾脏中CD3+、CD3+CD4+... 详细信息

目的探讨一段位于人乳头状瘤病毒(HPV)L1C-末端、长30个氨基酸残基的保守序列的免疫学性质而进行此实验。方法以此序列为基础人工合成多肽加氢氧化铝佐剂免疫小鼠。取免疫鼠脾脏制备脾细胞悬液,流式细胞术检测小鼠脾脏中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞数量,计算CD4+/CD8+值。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖。取培养上清液以双抗体夹心法ELISA检测细胞因子IL-4、IFN-γ的含量。结果 (1)脾细胞CD3+CD4+细胞数量、CD4+/CD8+值比阴性对照组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);(3)细胞因子IL-4含量较对照组显著增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论结果表明多肽诱导体液免疫效果是肯定的,有作为预防性疫苗进一步研究开发的前景;多肽的细胞免疫原性可能较弱,未能诱导出与细胞免疫相关的反应,多肽的免疫原性还有待于进一步改进提高。

关键词： HPV 晚期蛋白保守序列免疫原性

甘薯块根总RNA提取与psy基因保守序列的克隆

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福建农林大学学报（自然科学版） 2005年第1期34卷 67-69页

作者：陈选阳袁照年张招娟郑亚凤郑金贵福建农林大学作物学院福建福州350002

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取.本试验采用 4种方法对甘薯块根总RNA进行提取,筛选出 1种最佳的改进方法,排除了甘薯块根中淀粉、多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取到了高质量的甘薯块根总RNA.所提取的RNA得率较高... 详细信息

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取.本试验采用 4种方法对甘薯块根总RNA进行提取,筛选出 1种最佳的改进方法,排除了甘薯块根中淀粉、多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取到了高质量的甘薯块根总RNA.所提取的RNA得率较高,完整性好,纯度高,以其逆转录的cDNA为模板,克隆出了甘薯psy基因 422bp的保守序列.

关键词：薯块块根甘薯保守序列总RNA提取次生物质克隆基因逆转录多糖

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石斛基因组保守序列特性的生物信息学分析

皖西学院学报 2023年第2期39卷 1-7页

作者：詹少华皖西学院生物与制药工程学院安徽六安237012

为了探明石斛属植物基因组保守序列的种类和特性,从44096条石斛基因组序列中优选出4320条用作分析材料,分析方法采用本实验室编写的VBA程序。结果表明,保守序列出现频率越高,种类数越少,序列保守性越强,序列之间保守性差距越大;分布频... 详细信息

为了探明石斛属植物基因组保守序列的种类和特性,从44096条石斛基因组序列中优选出4320条用作分析材料,分析方法采用本实验室编写的VBA程序。结果表明,保守序列出现频率越高,种类数越少,序列保守性越强,序列之间保守性差距越大;分布频率较高的保守序列可以演变为序列更长的保守序列;15.4%的基因组序列具有SSR,其中GC或CG为基元的SSR最少,TC、CT、GA、AG为基元的SSR最为丰富,随着基元重复次数的增加,SSR的频率逐渐下降。此VBA程序可以用于其他任何基因组分析,分析结果将有助于分子标记引物设计、相关基因克隆和遗传多样性研究,也为进一步探索基因组作用机理提供了依据。

关键词：保守序列 SSR 石斛 VBA 引物设计