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急性高温低氧胁迫下刺参体腔液细胞miRNA表达谱的构建和靶标基因的功能分析

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2022年第4期52卷 30-42页

作者：尹英超刘富祥张玉钦陈慕雁中国海洋大学水产学院山东青岛266003 海水养殖教育部重点实验室(中国海洋大学) 山东青岛266003 烟台中集蓝海洋科技有限公司山东烟台264000

为了探究刺参应对极端高温、低氧环境的内在分子调控机制,促进刺参养殖产业的可持续发展。本研究以刺参体腔液细胞作为研究对象,分别构建了高温、低氧下miRNA的差异表达谱并分析了差异表达miRNAs的靶基因功能。研究表明:高温组中共发掘... 详细信息

为了探究刺参应对极端高温、低氧环境的内在分子调控机制,促进刺参养殖产业的可持续发展。本研究以刺参体腔液细胞作为研究对象,分别构建了高温、低氧下miRNA的差异表达谱并分析了差异表达miRNAs的靶基因功能。研究表明:高温组中共发掘了20个差异表达miRNA,其中11个上调,9个下调;低氧组中共发掘了10个差异表达miRNA,其中6个上调,4个下调。高温和低氧胁迫下共同显著差异表达的miRNA为:novel-23、novel-43、novel-45、novel-49、miR-200-3p、miR-71。以三代全长转录组为参考文库,利用miRanda软件对差异表达miRNA的靶基因进行预测,靶标基因KEGG富集分析显示,高温组中共显著富集到36条通路,低氧组中共显著富集到37条通路。其中磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)、癌症通路(Pathways in cancer)、黏着斑(Focal adhesion)、丝裂原活化蛋白激酶信号通路(MAPK signaling pathway-fly)等在高温组和低氧组中均有显著富集。研究结果表明,miRNA在刺参响应高温、低氧胁迫中参与了一系列关键的免疫相关过程的调控。

关键词：刺参高温低氧体腔液细胞 miRNA 靶基因

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单环刺螠体腔液细胞类型及抗菌作用

单环刺螠体腔液细胞类型及抗菌作用

作者：黄栋鲁东大学

学位级别：硕士

单环刺螠（Urechis unicinctus）是分布于我国黄渤海沿岸的新兴养殖品种,人工育苗及养殖已经趋于成熟,然而与之相关的基础生物学方面研究相对不足,迫切的需要对单环刺螠免疫功能进行研究。单环刺螠体腔液细胞作为主要的功能细胞,对其类... 详细信息

单环刺螠（Urechis unicinctus）是分布于我国黄渤海沿岸的新兴养殖品种,人工育苗及养殖已经趋于成熟,然而与之相关的基础生物学方面研究相对不足,迫切的需要对单环刺螠免疫功能进行研究。单环刺螠体腔液细胞作为主要的功能细胞,对其类型及抗菌活性进行研究,可为单环刺螠养殖中的病害防控,提供相关理论依据。不但具有较好的科研意义,同时极具现实应用价值。本文对单环刺螠体腔液细胞类型进行了初步区分,并通过大肠杆菌和枯草芽孢杆菌,对单环刺螠体腔液细胞体外抗菌活性进行了分析;最后对单环刺螠抗菌肽ARE111基因进行了克隆、表达与抗菌功能的研究。主要研究内容及结果如下:1.综合运用光学和荧光显微观察、瑞氏-吉姆萨染色和Flow CAM技术,将单环刺螠体腔液细胞根据其形态结构分为5类,分别是多颗粒细胞、半颗粒细胞、圆形透明细胞、不规则透明细胞和细胞聚团。通过流式细胞术可将单环刺螠体腔液细胞聚为白色透明细胞、红色多颗粒细胞和半颗粒细胞三个亚群。2.通过体外抗菌实验,发现短时间内大肠杆菌及枯草芽孢杆菌均能引发单环刺螠体腔液细胞的溶血现象;并且单环刺螠体腔液细胞存在一定的抑菌/杀菌能力,对大肠杆菌抑菌率为22.36%。3.通过对单环刺螠抗菌肽ARE111表达差异的分析结果显示,对于枯草芽孢杆菌,单环刺螠各组织没有表现出抗菌活性,或者只表现出微弱抗菌活性。体腔液细胞和肛门囊,对大肠杆菌具有明显的抗菌活性。此外实验结果显示,体腔液细胞中,ARE111表达差异在大肠杆菌侵染早期就已增至最高点;而枯草芽孢杆菌侵染后,ARE111存在一段滞后性,90min后ARE111的表达差异才增至最高点。***111成熟肽对屎肠球菌MIC浓度为75.0μg/m L,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、志贺痢疾杆菌、钳绿假单胞菌的MIC浓度为37.5μg/m L。单氨基酸位点突变对该多肽的抗菌活性影响较大,其中第6和第24位点的突变后发现,该多肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌均有抑制作用;第26位点的突变后,该多肽仅对β-溶血性链球杆菌具有抑制活性;第12、16、21位点的突变导致该多肽的抗菌活性消失,说明第12、16、21位点对于保持其抗菌活性非常必要。

关键词：单环刺螠体腔液细胞分类抗菌作用 ARE111

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壳寡糖对仿刺参体腔液细胞免疫的影响

宿州学院学报 2016年第12期31卷 86-87,96页

作者：卢亚楠王武李明张建清王丽丛玉婷大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023

考察了三种抗凝剂对仿刺参体腔细胞的抗凝效果,研究了壳寡糖作为免疫添加剂对仿刺参体腔液细胞吞噬能力的影响,利用化学发光法检测壳寡糖对吞噬过程中活性氧作用的影响。结果发现,无菌海水对刺参体腔细胞具有一定的抗凝效果,且细胞形态... 详细信息

考察了三种抗凝剂对仿刺参体腔细胞的抗凝效果,研究了壳寡糖作为免疫添加剂对仿刺参体腔液细胞吞噬能力的影响,利用化学发光法检测壳寡糖对吞噬过程中活性氧作用的影响。结果发现,无菌海水对刺参体腔细胞具有一定的抗凝效果,且细胞形态和活性保持较好,将壳寡糖以1%、3%的质量浓度添加入到基础饲料中,分别检测体腔液细胞吞噬情况和呼吸氧爆发情况,结果表明壳寡糖可显著提高仿刺参体腔液细胞吞噬能力和活性氧水平(P3%壳寡糖组>对照组。

关键词：仿刺参壳寡糖体腔液细胞吞噬活性氧

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弓形革囊星虫体腔液细胞的结构与分类

仲恺农业工程学院学报 2020年第4期33卷 18-21页

作者：李凤麟 SARATH Babu 秦真东林蠡仲恺农业工程学院动物科技学院广东广州510225 广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心广东广州510225 广州市水产病害与水禽养殖重点实验室广东广州510225

弓形革囊星虫(Phascolosoma arcuatum)是一种栖息在潮间带沙泥中的名优经济动物,目前已经对弓形革囊星虫开展了小规模人工养殖,但是关于其基础生理学特性知之甚少.本研究通过瑞氏姬姆萨染色、扫描电镜和透射电镜开展弓形革囊星虫体腔液... 详细信息

弓形革囊星虫(Phascolosoma arcuatum)是一种栖息在潮间带沙泥中的名优经济动物,目前已经对弓形革囊星虫开展了小规模人工养殖,但是关于其基础生理学特性知之甚少.本研究通过瑞氏姬姆萨染色、扫描电镜和透射电镜开展弓形革囊星虫体腔液细胞的形态及结构研究.结果表明,弓形革囊星虫的体腔液细胞主要存在七大类红细胞、盘状细胞、嗜碱性粒细胞、血栓细胞、淋巴样细胞、网状细胞和嗜酸性粒细胞.其中,红细胞数量在体腔液细胞中所占比例最大;盘状细胞长直径最大为39~42μm;嗜碱性粒细胞近椭圆形,碱性颗粒经姬姆萨染色后为蓝色;血栓细胞常多个聚集;淋巴样细胞细胞核较大几乎充满整个细胞;网状细胞内多空泡;嗜酸性粒细胞颗粒经姬姆萨染色后为紫红色.

关键词：弓形革囊星虫体腔液细胞结构分类

壳寡糖对仿刺参（Apostichopus japonicus）体腔液细胞免疫的影响

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壳寡糖对仿刺参（Apostichopus japonicus）体腔液细胞免疫的影响

2014年中国水产学会学术年会

作者：卢亚楠王武大连海洋大学水产与生命学院

本实验使用化学发光法,研究了壳寡糖在体外对仿刺参体腔液细胞吞噬过程中产生的呼吸氧爆发现象的影响,并进一步探究了壳寡糖作为免疫添加剂对仿刺参体腔液细胞免疫能力的影响。体外将1,25,50,100,200μg/ml壳寡糖分别加入刺参体腔液细... 详细信息

本实验使用化学发光法,研究了壳寡糖在体外对仿刺参体腔液细胞吞噬过程中产生的呼吸氧爆发现象的影响,并进一步探究了壳寡糖作为免疫添加剂对仿刺参体腔液细胞免疫能力的影响。体外将1,25,50,100,200μg/ml壳寡糖分别加入刺参体腔液细胞吞噬体系中,实验结果发现吞噬体系的发光值均呈现出先升高后降低的趋势,30min左右活性达到峰值,其中25μg/ml和50μg/ml与对照组差异显著。将壳寡糖以1%,3%的质量浓度添加入到基础饲料中,分别检测体腔液细胞吞噬情况和呼吸氧爆发情况,结果表明壳寡糖可显著提高仿刺参体腔液细胞吞噬能力和活性氧水平（P＜0.05）,总体表现为1%壳寡糖组＞3%壳寡糖组＞对照组。

关键词：仿刺参壳寡糖体腔液细胞吞噬活性氧

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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可口革囊星虫体液细胞的显微和亚显微结构

动物学报 2008年第1期54卷 157-163页

作者：苏秀榕纪其雄丁理发张伟竺俊全李太武应用海洋生物教育部重点实验室宁波大学浙江宁波315211 浙江省医药高等专科学校应用生物系浙江宁波315000 浙江省温岭市水产技术推广站浙江温岭317500 辽宁师范大学生命科学学院大连116029

本文利用光学显微镜和透射电镜研究了可口革囊星虫体液细胞的显微和亚显微结构。研究发现该星虫体液中含有红细胞、颗粒细胞、桑椹胚样细胞和卵母细胞。可口革囊星虫的红细胞数量较多,红细胞呈盘状,从一边或两边略凹陷,最典型的是从三... 详细信息

本文利用光学显微镜和透射电镜研究了可口革囊星虫体液细胞的显微和亚显微结构。研究发现该星虫体液中含有红细胞、颗粒细胞、桑椹胚样细胞和卵母细胞。可口革囊星虫的红细胞数量较多,红细胞呈盘状,从一边或两边略凹陷,最典型的是从三边发育的二裂片内陷,直径为24μm-32μm。圆形红细胞,核位于中央,细胞内很少有细胞器,细胞质内充满嗜锇的血红蛋白。体腔液内含有两种类型的颗粒细胞。Ⅰ型细胞含有大量的小颗粒,是典型的变形细胞,细胞质里含有大量的线粒体、最典型的高尔基体、内质网和各种形状不一的小池。Ⅱ型细胞含有大量的嗜锇细胞质。在可口革囊星虫体液中含有不同发育时期的卵母细胞。

关键词：可口革囊星虫体腔液细胞显微和亚显微结构

单环刺螠（Urechis unicinctus）对硫化物的氧化解毒及代谢适应

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单环刺螠（Urechis unicinctus）对硫化物的氧化解毒及代谢适应

作者：王思锋中国海洋大学

学位级别：硕士

硫化物对好氧生物来说是一种高度有毒的物质,然而在海底热泉口、冷渗泉、近海岸泥性底质等硫化物环境中发现了很多种生物。单环刺螠隶属于螠虫动物门(Echiuroidea)、螠纲(Echiurida)、无管螠目(Xenopneusta)、刺螠科(Urechidae)、刺螠属... 详细信息

硫化物对好氧生物来说是一种高度有毒的物质,然而在海底热泉口、冷渗泉、近海岸泥性底质等硫化物环境中发现了很多种生物。单环刺螠隶属于螠虫动物门(Echiuroidea)、螠纲(Echiurida)、无管螠目(Xenopneusta)、刺螠科(Urechidae)、刺螠属(Urechis),是一种海洋底栖生物。主要栖息于近海岸潮间带或潮下带泥性底质中,在穴居生活中会遭遇硫化物暴露。本文采用实验生态学、硫化物氧化产物分析、代谢酶活性测定以及细胞学等手段研究了单环刺螠对硫化物的耐受能力和氧化脱毒及代谢适应,目的一方面在于揭示其在硫化物环境中的生理代谢机制,另一方面为生物改良污染底质提供新的思路。本文首先研究了不同浓度硫化物对单环刺螠存活的影响。结果显示:在整个实验期间,未添加硫化物的对照组无一个体死亡,而其它各实验组虫体均有不同程度的死亡。50μM硫化物组和150μM硫化物组48 h后出现虫体死亡,LT分别为112 h和86 h。300μM硫化物组和600μM硫化物组24 h后出现虫体死亡,LT分别为68 h和60 h。结果表明:单环刺螠能够适度耐受硫化物,对低浓度硫化物(≤50μM)具有很强的耐受能力,对高浓度硫化物(15000μM)的耐受能力减弱。利用反相高效液相色谱技术对虫体体壁和呼吸肠中硫化物氧化产物含量进行了测定,结果显示:在暴露阶段,硫化物组虫体组织中均具有高浓度的亚硫酸盐和硫代硫酸盐,而在对照组虫体组织中检测不到亚硫酸盐,硫代硫酸盐的浓度很低且基本保持稳定。暴露2 h时,硫化物组虫体体壁和呼吸肠中亚硫酸盐和硫代硫酸盐浓度显著性增加。到暴露24 h时,50μM硫化物组虫体呼吸肠中亚硫酸盐含量达到最大值959.85±29.42μmol kgwm,随后明显减少。体壁中亚硫酸盐含量的变化与呼吸肠类似。150μM硫化物组虫体组织中亚硫酸盐含量变化与50μM硫化物组相似,在暴露12 h时达到最大值,随后显著减少。恢复阶段,

关键词：单环刺螠硫化物耐受亚硫酸盐硫代硫酸盐细胞色素氧化酶延胡索酸还原酶体腔液细胞