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裙带菜和海带提取液体外抑瘤实验研究

营养学报 2004年第1期26卷 79-80页

作者：高淑清单保恩张兵赵泽贞河北医科大学第四医院营养科石家庄050011 河北省肿瘤研究所河北医科大学公共卫生学院

裙带菜(Undaria pinnatifida(Harv.)Suringar)和海带(Laminaria)均为褐藻门昆布属,生活在海洋里[1],可用于防治缺碘性甲状腺肿、动脉硬化、高脂血症、高血压等[2～4],本实验研究其对肿瘤细胞增殖的体外抑制作用.

关键词：裙带菜海带提取液体外抑瘤实验研究

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重组白喉毒素的制备及体外抑瘤效果的研究

重组白喉毒素的制备及体外抑瘤效果的研究

作者：张英波吉林大学

学位级别：硕士

生长抑素(Somatostatin,简称SST或SS)是一种多肽物质,以14肽和28肽两种形式存在,其广泛分布于脑组织、胰腺、胃肠道,少量分布在甲状腺、颌下腺、肾上腺、前列腺、胎盘、肾脏、肝脏、胆囊等组织中。SS受体在很多肿瘤细胞表面都有过度表达... 详细信息

生长抑素(Somatostatin,简称SST或SS)是一种多肽物质,以14肽和28肽两种形式存在,其广泛分布于脑组织、胰腺、胃肠道,少量分布在甲状腺、颌下腺、肾上腺、前列腺、胎盘、肾脏、肝脏、胆囊等组织中。SS受体在很多肿瘤细胞表面都有过度表达,如神经内分泌瘤、神经系统肿瘤和结肠癌等。SS可以特异的结合过度表达SS受体的肿瘤细胞。白喉毒素(DT)是白喉杆菌产生的细菌外毒素,有三个不同功能区。N端为催化区( catalytic domain )由193个氨基酸组成(193),中间为穿膜区(transmembrance)由173个氨基酸组成(20578),C端为受体结合区( receptor binding domain)由149个氨基酸组成(38635)。DTB(39035)氨基酸残基组成白喉毒素的受体结合区,该区域可以用抗体或细胞因子基因取代。DTA(189)为毒素发生毒性作用的部位,是白喉毒素的酶活性区,它通过阻止延长因子-2在核糖体内促进多肽链延长而抑制蛋白质合成造成细胞死亡,具有极强的细胞毒性。本文利用重叠延伸PCR技术,将DT389基因片断与SS基因片断通过一个柔性肽Linker连接,经特异性酶切后,将基因片段插入到原核表达载体pET-28a中,构建了原核重组表达质粒pET-28a- DT389 -SS,测序结果与设计一致。将重组质粒转化至BL21(DE3),诱导表达后经SDS-PAGE表明,DT389-SS重组蛋白表达量占菌体蛋白总量的31%。免疫印迹分析结果显示,重组蛋白可与anti-6×histag抗体发生特异性免疫反应。从培养基的选择、诱导剂剂量的选择、诱导条件的优化等方面,研究了重组工程菌BL21(DE3)LysS/pET-28a-DT389-SS的发酵工艺,对重组工程菌进行了发酵,用MTT法测定目的蛋白对细胞生长的抑制作用,结果表明,重组蛋白对多种癌细胞的生长抑制作用明显。

关键词：生长抑素白喉毒素重组毒素体外抑瘤

乳酸菌胞外多糖的生物合成及其组成和体外抑瘤活性研究

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乳酸菌胞外多糖的生物合成及其组成和体外抑瘤活性研究

作者：陈晓红南京农业大学

学位级别：硕士

1、从藏灵菇粒申筛选到一株高产胞外多糖(EPS)的乳酸菌菌株FML02-8，在脱脂乳培养基中多糖产量为187.6mg/L。通过FML02-8的菌体培养特征及部分生理生化特征研究，初步鉴定FML02-8为乳酸菌的链球菌属(Streptococcus)。菌株的生长特性表... 详细信息

1、从藏灵菇粒申筛选到一株高产胞外多糖(EPS)的乳酸菌菌株FML02-8，在脱脂乳培养基中多糖产量为187.6mg/L。通过FML02-8的菌体培养特征及部分生理生化特征研究，初步鉴定FML02-8为乳酸菌的链球菌属(Streptococcus)。菌株的生长特性表明其产酸能力强、凝乳快、生长迅速，在MRS培养基中最适生长温度为37℃，生长的最适初始pH值为7.0。 2、证明菌株FML02-8产EPS的特性不受质粒调控，具有一定的遗传稳定性。 3．筛选了适于FML02-8合成EPS的最适培养基为：葡萄糖(或其它碳源)2.0％蛋白胨2％酵母浸出汁0.5％、乙酸钠0.5％柠檬酸三铵0.2％吐温80 0.1％MgSO 0.01％ MnSO 0.005％ KHPO 0.2％。用单因素试验证明了该菌株可以利用不同的碳源合成不同量的EPS，其中以葡萄糖的合成量最高，碳源的最适添加量均为20g/L。 4、用SAS8.0的四因素二水平析因设计筛选了影响EPS合成的显著因素为温度、初始pH和时间，用中心组合设计得出了优化的EPS产量模型为：EPS=-3764.49+79.42*温度+729.90*PH+16，30*时间-0.97*温度*温度-52.67*PH*PH -0.49*时间*时间。并对该模型进行了验证。在优化条件下，以葡萄糖为碳源，FML02-8合成EPS产量达400mg/L。 5、3L发酵罐的pH控制发酵表明：发酵过程的pH控制也影响FML02-8合成EPS的产量，通过流加碱控制pH5.5，EPS的合成量达503.7mg/L，较未控制时的产量提高了约30％。 6、通过Sevage法、三氯乙酸法脱蛋白的效果比较，发现终浓度3.5％的三氯乙酸法脱蛋白效果好，蛋白质脱除率可达到83.4％。确定乙醇沉淀法提取EPS的条件为：乙醇终浓度75％，沉淀时间12小时，提取温度4℃，溶液pH值6.0到6.5。 7、研究了Scpharose 4B凝胶过滤色谱分级分离EPS的条件，确定的最佳分离条件为：样品浓度750mg/L，上样体积5mL，洗脱剂(0.1MNaCl)流速30mL/hr。在这一最适条件下，FML02-8分别以葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳清粉为碳源合成的胞外多糖EPS、EPS、EPS、EPS、EPS、EPS均能被纯化为两个级分，EPS纯化的两级分比例为26.3：1，多糖回收率可达90.5％，纯度鉴定结果为纯多糖。 8、用红外光谱法对FML02-8分别以葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳清粉为碳源合成的胞外多糖EPS、EPS、EPS、EPS、EPS、EPS的结构进行了初步分析，乳酸菌胞外多糖的生物合成及其组成和体外抑瘤活性研究 6个多糖样品的红外光谱图均呈现多糖的特征吸收峰，均为a一构型的毗喃糖，但波形、特征吸收波段、波峰强度有差别。用H PLC法测定BPS。、EPsF、EPSL、EPss、EPSM、EPs、的峰值分子量(Mp)分别为:41092、54029、45468、46996、46257、4s46sDa一t。ns。用气相色谱法分析6个多糖样品的单糖组成及摩尔比分别为:EPS。一半乳糖:鼠李糖一1.60:1;EPS。一葡萄糖:甘露糖一1.98:1;EPSL一半乳糖:鼠李糖=4.的:1;EPSs 一半乳糖形成的半乳聚糖;EPSM一葡萄糖:鼠李糖:甘露糖=1.41:1.60:1;EPS* 一半乳糖:葡萄糖:鼠李糖二2.26:1.33:1。结果表明，碳源对FML02一8合成EPS 的影响不仅在产量，而且影响EPS的结构，包括分子量、单糖组成及摩尔比等。 9、通过对FML02一8以不同碳源发酵得到的纯化后的EPS进行体外抑瘤功能测定，表明EPS。、EPSF、EPSL、EPSs、EPS。、EPS，与腹水型肉瘤细胞5180共培养48hr后，均可抑制肿瘤细胞的增殖。在10一4 00“g/mL的浓度梯度内，EPS。作用效果存在剂量依赖效应。EPS、、EPSL、EPSs、EPSM、EPS。浓度在10一1 00林g/mL时，抑瘤作用与多糖存在剂量效应关系，提高浓度后这种剂量效应则不存在，且在1 00林g/mL的浓度下均出现T抑制率高峰。EPS。、 EPS、、EPSL、EPSs、EPS。、EPSF在1 00“g/mL的浓度下与·5180 共48hr后，抑制率分别达37.7%、28.8%、34.2%、33.6%、34.9%、36.3%。 10、研究EPS。、EPS、、EpSL、Epss、EPS，、EPSF6个多糖样品体外对脾淋巴细胞的转化作用，结果表明一定浓度的多糖对静止淋巴细胞和ConA激活的淋巴细胞均有促转化作用，且6个多糖样品对淋巴细胞的促转化效

关键词：胞外多糖链球菌生物合成分离纯化分子组成体外抑瘤

胶原/纤维蛋白胶复合药膜的性质及其体外抑瘤效应初步研究

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国际生物医学工程杂志 2016年第1期39卷 1-5,19页

作者：陈红丽徐佳迪南文滨郭双李武山连杰丰慧根林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省干细胞与生物治疗工程技术中心453003

目的制备载硫酸长春新碱（VCR）微球的胶原/纤维蛋白胶的缓释药膜并研究其性质,考察京尼平的交联浓度（0、0.05、0.1、0.2 mol/ml）对药膜性质的影响.方法冷冻干燥和京尼平交联法制备多孔胶原膜,将VCR微球混合纤维蛋白胶后加入多孔胶... 详细信息

目的制备载硫酸长春新碱（VCR）微球的胶原/纤维蛋白胶的缓释药膜并研究其性质,考察京尼平的交联浓度（0、0.05、0.1、0.2 mol/ml）对药膜性质的影响.方法冷冻干燥和京尼平交联法制备多孔胶原膜,将VCR微球混合纤维蛋白胶后加入多孔胶原膜中制备胶原/纤维蛋白胶复合药膜,考察药膜的表面形态、机械性能、降解性质和体外释药行为,并用CCK-8法检测药膜对3种肿瘤细胞（人肺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7和人宫颈癌细胞株HeLa）的体外抑瘤率.结果随着交联剂京尼平浓度的增加,药膜机械强度增加,而断裂伸长率降低.VCR微球与纤维蛋白胶及胶原复合制备成药膜,可达到双重缓释的作用,减少药物突释,并延缓药物释放.未交联的F0药膜药物24h突释为（41.8±3.4）％,京尼平交联后的F0.05、F0.1和F0.2药膜的药物突释分别为（38.4±4.1）％、（35.2±3.6）％和（34.3±3.7）％.未载药的F0.1药膜无显著细胞毒效应,而载药的F0.1药膜在不同时间释放的药液对3种肿瘤细胞株均有显著的抑制作用,且对各细胞株敏感度不同.结论 F0.1药膜能不同程度减少药物的突释,使药物释放更加平稳缓慢,有望用作抗肿瘤药物载体.

关键词：京尼平微球胶原纤维蛋白体外抑瘤

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fas基因修饰食管癌细胞的体外抑瘤效应

解放军医学杂志 2001年第11期26卷 801-803页

作者：赵伟平时永全尹芳丁杰苗继延胡家露刘宪玲赵燕秋肖冰樊代明第四军医大学西京医院

为研究fas基因转导对食管癌细胞的体外抑制作用 ,构建fas基因真核表达载体fas pBK并将其转导入食管癌细胞EC10 9。Westernblot结果证实fas基因转导株Fas EC10 9表达高水平的Fas蛋白 ;细胞生长曲线和软琼脂集落形成实验结果显示 ,与对照... 详细信息

为研究fas基因转导对食管癌细胞的体外抑制作用 ,构建fas基因真核表达载体fas pBK并将其转导入食管癌细胞EC10 9。Westernblot结果证实fas基因转导株Fas EC10 9表达高水平的Fas蛋白 ;细胞生长曲线和软琼脂集落形成实验结果显示 ,与对照细胞相比 ,Fas EC10 9的群体倍增时间延长 ,克隆形成能力降低。MTT比色法表明Fas EC10 9对CDDP、VCR、5 FU的敏感性明显增加。本研究结果提示 ,转导fas基因能有效抑制体外培养的食管癌细胞的生长。

关键词：食管肿瘤 fas基因基因治疗细胞凋亡体外抑瘤

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裂褶菌多糖体外抑瘤试验

裂褶菌多糖体外抑瘤试验

2008全国药用真菌学术研讨会

作者：宋爱荣王光远赵晨吴增波青岛农业大学应用真菌省级重点实验室

裂褶菌（Schizophyllum commune Fr.）又称白参、树花、八担柴,隶属于真菌门（Eumycophyta）,担子菌纲（Basidiomycetes）,伞菌目（Agaricales）裂褶菌科（Schizophyllaceae）,裂褶菌属（Schizophyllum）,是一种珍贵的药用真菌。裂褶菌生长环境主要为阔叶和针叶树的枯枝、倒木、腐木和枕木。在我国20多个省市均有分布,资源非常丰富。国内外医药研究表明,裂褶菌子实体中含有丰富的有机酸和具有抗肿瘤、抗炎作用的裂褶菌多糖。裂褶菌胞外多糖又称裂褶菌素,是一种水溶性的β-D-葡聚糖,因其具有好的水溶性和独特的活性结构,在调节免疫、抗肿瘤、抗辐射等方面有着显著的功效。本研究通过采用体外细胞培养和MTT检测技术来研究裂褶菌-657菌株多糖对人肝癌HepG2、Bel-7402及喉癌Hep-2细胞的抑制作用,以便为肝癌、喉癌治疗提供实验依据。结果显示:不同浓度的裂褶菌多糖（0.3、0.6、1.2、2.3、4.7、9.4、18.8、37.5、75、150μg/ml）持续作用48小时后,可以显著抑制体外培养的人肝癌HepG2、Bel-7402及喉癌Hep-2细胞的生长增殖。对肝癌HepG2细胞的抑制率7.91%～22.83%,并呈剂量效应关系,最佳剂量为150μg/ml,抑制率达到22.74%～22.83%。对肝癌Bel-7402细胞的抑制率7.15%～28.78%,最佳剂量为75μg/ml,抑制率达到28.14%～28.78%。对喉癌Hep-2细胞的抑制试验表明,随着裂褶菌多糖浓度的增加,对Hep-2细胞增殖的抑制作用增强,最佳剂量为150μg/ml,抑制率达到23.81%～24.49%。从天然药物中筛选抗肿瘤药物是当前研究热点之一。药用真菌在我国已经有两千多年的历史,《神农本草经》中就有灵芝、茯苓、猪苓、雷丸等药用功能的记载。我国食用菌（包括部分药用菌）已知1000余种,进一步从中筛选新药,加大药用真菌的研究力度,造福人类健康,意义重大。

关键词：裂褶菌多糖体外抑瘤 MTT法

来源： cnki会议评论

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抗癌药物卡波霉素的体外抑瘤作用的初步研究

抗癌药物卡波霉素的体外抑瘤作用的初步研究

两种牛蛙活性肽结构及体外抗肿瘤细胞增殖作用的研究

全国第十二届生化与分子药理学学术会议

作者：孙岚张浩张英鸽军事医学科学院毒物药物研究所

目的:对活性炭纳米粒子(ACNP)吸附丝裂霉素C(MMC)所制备的新药卡波霉素(CBMC)的载体进行优化并对其药效进行研究。方法:采用球磨悬浮沉淀法制备MMC的靶向载体ACNP;通过透射电镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)对其粒径和形态进行表征;将一定... 详细信息

目的:对活性炭纳米粒子(ACNP)吸附丝裂霉素C(MMC)所制备的新药卡波霉素(CBMC)的载体进行优化并对其药效进行研究。方法:采用球磨悬浮沉淀法制备MMC的靶向载体ACNP;通过透射电镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)对其粒径和形态进行表征;将一定配比的ACNP与MMC超声混悬吸附,测不同时间点未被吸附的MMC的量,以吸附曲线转弯点的切线与平台线的交叉点处的时间作为吸附达平衡时间;将不同配比的ACNP和MMC混悬液

关键词：抗癌药物卡波霉素体外抑瘤药效评价释药特性

来源： cnki会议评论

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中国畜牧兽医 2015年第5期42卷 1211-1217页

作者：王选马吉飞赵瑞利胡烨申杰林东东天津农学院动物科学与动物医学学院中国科学院天津工业生物技术研究所

试验旨在研究新发现的两种牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCFH446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K5623种肿瘤细胞体外增殖的影响，为新的多肽抗肿瘤药筛选提供依据。本试验利用圆二色谱（cD）法检测两种新牛蛙活性肽的二级结构，通过MTS... 详细信息

试验旨在研究新发现的两种牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCFH446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K5623种肿瘤细胞体外增殖的影响，为新的多肽抗肿瘤药筛选提供依据。本试验利用圆二色谱（cD）法检测两种新牛蛙活性肽的二级结构，通过MTS细胞毒试验测定不同浓度的两种新牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCI-H446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K5623种瘤细胞体外增殖的影响。圆二色谱法结果显示，Temporin-Lb的二级空间结构为聚脯氨酸Ⅱ型螺旋（PPⅡ）结构，Catesbeianin-1a的二级空间结构为无规则卷曲。MTS细胞毒试验结果显示，给予Catesbeianin-1a的3种瘤细胞培养24h后，瘤细胞形态无明显变化，正常增殖，而给予Tem—porin-Lb的3种瘤细胞培养24h后，瘤细胞发生皱缩、细胞变圆、脱落甚至死亡，增殖受到抑制，其中对Temporin-Lb在4-40μmol／L浓度范围内对小鼠白血病细胞K562的抑制效果最为明显。结果表明，新牛蛙活性肽Tempor—in-Lb具有一定的抑瘤作用，Catesbeianin-1a对瘤细胞的体外增殖没有明显影响。

关键词：活性肽Temporin-Lb 活性肽Catesbeianin-1a 圆二色谱法(CD) MTS细胞毒试验体外抑瘤

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营养学报第26卷主题索引

营养学报 2004年第6期26卷 i013-i026页