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辐射研究与辐射工艺学报 2016年第2期34卷 24-30页

作者：马斌博王转子魏巍党秉荣李文建兰州大学药学院兰州730000 中国科学院近代物理研究所兰州730000

利用X射线辐照经羧甲基-β-1,3-葡聚糖预处理的人b淋巴母细胞(Human b lymphoblasts,***),探究羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐射损伤的防护作用。采用CCK-8法检测细胞存活率,并筛选出最佳给药浓度和孵育时间(0.1μg/mL,72 h);流式细胞仪检测... 详细信息

利用X射线辐照经羧甲基-β-1,3-葡聚糖预处理的人b淋巴母细胞(Human b lymphoblasts,***),探究羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐射损伤的防护作用。采用CCK-8法检测细胞存活率,并筛选出最佳给药浓度和孵育时间(0.1μg/mL,72 h);流式细胞仪检测羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐照后***细胞凋亡的影响;微核实验检测羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐照后***细胞微核形成的影响;彗星实验检测对DNA损伤程度和修复的影响。结果表明,羧甲基-β-1,3-葡聚糖对***无细胞毒性并具有增殖促进作用;羧甲基-β-1,3-葡聚糖能够抑制辐射造成的凋亡率和微核率的增加,降低DNA损伤程度,加快损伤DNA的修复。羧甲基-β-1,3-葡聚糖对***细胞辐射损伤有防护作用,其机制可能与抑制辐射诱导的细胞凋亡和DNA损伤有关。

关键词：羧甲基-β-1 3-葡聚糖人b淋巴母细胞 X射线辐射辐射防护效应

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甲基叔丁基醚致人b淋巴母细胞系DNA损伤和氧化应激损伤的研究

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环境与职业医学 2016年第12期33卷 1138-1142页

作者：王禹薛惠中高明谭玉凤宋杨杨叶范宏亮周程吴南翔浙江省医学科学院卫生学研究所环境卫生室浙江杭州300013

[目的]通过体外实验研究甲基叔丁基醚(MTbE)染毒对人b淋巴母细胞系DNA损伤和氧化应激水平的影响。[方法]将处于对数生长期的人b淋巴母细胞系分别以1.25、2.5、5、10、12.5μmol/L的MTbE溶液染毒,24 h后分别收集细胞和上清液,用彗星试验... 详细信息

[目的]通过体外实验研究甲基叔丁基醚(MTbE)染毒对人b淋巴母细胞系DNA损伤和氧化应激水平的影响。[方法]将处于对数生长期的人b淋巴母细胞系分别以1.25、2.5、5、10、12.5μmol/L的MTbE溶液染毒,24 h后分别收集细胞和上清液,用彗星试验检测人b淋巴细胞染毒后的尾部DNA百分比及Olive尾矩;同时,用ELISA试剂盒检测细胞上清液中的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)水平,并对MTbE浓度和这些指标之间的关系进行相关性分析。[结果]MTbE染毒24 h后,人b淋巴母细胞系在5、10、12.5μmol/L剂量组的尾部DNA百分比及Olive尾矩均高于对照组(均PbE浓度和尾部DNA百分比及Olive尾矩之间呈正相关关系(r=0.685,P=0.000;r=0.615,P=0.000)。[结论]低剂量MTbE染毒可以诱导人b淋巴母细胞系发生DNA损伤,DNA损伤可以作为反映MTbE毒性效应的一项较敏感的指标。

关键词：甲基叔丁基醚 DNA损伤氧化应激毒性机制人b淋巴母细胞

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人参有效组分对皮肤细胞及b淋巴母细胞的保护作用及枸杞有效组分的初筛

人参有效组分对皮肤细胞及B淋巴母细胞的保护作用及枸杞有效组分...

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作者：王伟凤兰州大学

学位级别：硕士

人参及枸杞作为传统中药材,对人体具有调整血压、恢复心脏功能、增强免疫等作用。为了综合利用开发人参及枸杞产品,提高其药用价值,我们以人皮肤成纤维细胞及人b淋巴母细胞作为模型,研究人参及枸杞有效组分对人体健康的影响。本研究的... 详细信息

人参及枸杞作为传统中药材,对人体具有调整血压、恢复心脏功能、增强免疫等作用。为了综合利用开发人参及枸杞产品,提高其药用价值,我们以人皮肤成纤维细胞及人b淋巴母细胞作为模型,研究人参及枸杞有效组分对人体健康的影响。本研究的目的为:1)人参有效组分Gx是否对人皮肤细胞具有保护作用;2)人参有效组分Gx是否能够改善免疫细胞功能;3)对初步分离的枸杞各组分进行免疫活性的初筛。结果显示:1)Gx能够缓解由ROS引起的人皮肤成纤维细胞的氧化应激损伤。首先显微观察到,Gx可以改善ROS损伤处理的人皮肤成纤维细胞形态;其次SRb方法测定发现,Gx提高损伤细胞的增殖率;使用免疫荧光方法进一步探索Gx保护细胞形态的机理,发现Gx恢复损伤细胞的骨架相关蛋白Tubulin、跨膜蛋白Integrin和胞外基质蛋白Fibronectin的有序排列,并且Western blotting检测结果显示Gx调控损伤细胞内MMP-1蛋白的含量。2)Gx能够保护由重离子辐照引起的人b淋巴母细胞的损伤。首先观察到损伤的细胞形态得到恢复。流式细胞术方法检测到Gx可以降低损伤细胞的凋亡,并且降低细胞内ROS的水平。此外,ELISA方法发现Gx调控TNFα和IL-1α的分泌。3)以人b淋巴母细胞为细胞模型,使用过氧化氢对细胞造成氧化损伤,研究了共14种枸杞有效组分的免疫活性(Gj1,Gq1,D13)。其中3种枸杞酒提取物Gj1、Gj4、Gj5和2种地骨皮(枸杞植株根部)提取物D2、D3对氧化损伤的免疫细胞具有保护作用,并调节细胞内炎症相关因子TNFα和IL-1α的表达分泌。总之,人参有效组分Gx具有保护皮肤细胞及改善免疫细胞功能的作用。枸杞组分初筛说明枸杞组分(D2、D3、Gj1、Gj4、Gj5)具有免疫活性。我们的研究揭示人参有效组分Gx及枸杞有效组分具有潜在的开发利用价值。

关键词：人参枸杞人皮肤成纤维细胞人b淋巴母细胞活性氧重离子辐照

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羧甲基-β-1,3-葡聚糖对X射线和12C6+重离子束的辐射防护作用研究

羧甲基-β-1,3-葡聚糖对X射线和12C6+重离子束的辐射防护作用研究

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作者：马斌博兰州大学

学位级别：硕士

目的:检测分析羧甲基-β-1,3-葡聚糖(CMG)对HMy细胞的细胞毒性作用和对细胞增殖的影响;利用多靶单击模型,对进行X射线和12C6+重离子束照射后的细胞克隆存活进行存活曲线的拟合,并且分析比较羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy细胞放射生物学参... 详细信息

目的:检测分析羧甲基-β-1,3-葡聚糖(CMG)对HMy细胞的细胞毒性作用和对细胞增殖的影响;利用多靶单击模型,对进行X射线和12C6+重离子束照射后的细胞克隆存活进行存活曲线的拟合,并且分析比较羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy细胞放射生物学参数的影响;探究羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy细胞遭受电离辐射后的细胞凋亡、活性氧类、线粒体膜电位、脂质氧化反应产物丙二醛、超氧化物歧化酶活性、DNA损伤程度和DNA损伤修复能力等的影响,进而检测、评价羧甲基-β-1,3-葡聚糖对X射线和12C6+重离子束辐照的防护作用,并且探讨羧甲基-β-1,3-葡聚糖可能的辐射防护作用机理。材料与方法:通过CCK-8法探究不同浓度羧甲基-β-1,3-葡聚糖,在不同孵育时间下对HMy细胞增殖的影响,并筛选出药物的最佳作用浓度和孵育时间,并且作为后续实验的细胞预处理条件。用不同剂量的X射线和12C6+重离子束分别辐照药物预处理和未进行药物预处理的HMy细胞,用软琼脂克隆形成试验检测细胞存活率,并对存活率进行多靶单击拟合,分析放射生物学参数的变化;通过流式细胞术对细胞凋亡、活性氧和线粒体膜电位的改变进行定量分析;利用丙二醛检测试剂盒对脂质氧化反应的产物丙二醛的生成量进行检测;利用超氧化物歧化酶活性测定试剂盒对超氧化物歧化酶活性的变化进行测定;通过微核实验探究微核率的变化情况;利用碱性单细胞凝胶电泳实验研究DNA损伤和修复的变化情况。结果:羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy细胞没有细胞毒性作用,并且有促进细胞增殖的作用;通过多靶单击拟合得到的相关放射生物学参数的变化可以看出,羧甲基-β-1,3-葡聚糖能够提升HMy细胞的辐射抗性,降低细胞放射敏感性,并且能够提升细胞损伤修复的能力;对于辐射诱导的细胞凋亡、活性氧和线粒体膜电位的改变均有缓解作用,对电离辐射造成的超氧化物歧化酶活性的降低有恢复作用,并且能够抑制细胞内脂质氧化反应产物丙二醛含量的增加;羧甲基-β-1,3-葡聚糖能够降低辐射造成的细胞微核的产生,降低彗星尾长和尾部DNA含量。结论:(1)羧甲基-β-1,3-葡聚糖是一种安全低毒高效的辐射防护药物,对X射线和12C6+重离子束,两种分别为低LET和高LET的电离辐射造成的损伤都能起到很好的防护作用。(2)羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐射诱导的细胞凋亡和氧化应激反应都有抑制作用,表现出抗氧化活性,减轻了电离辐射引起的HMy细胞的氧化应激反应。(3)羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐射造成的遗传毒性有恢复作用,增加了HMy细胞DNA抗辐射损伤的能力,并且能促进损伤DNA的修复。

关键词：羧甲基-β-1,3-葡聚糖人b淋巴母细胞 12C6+重离子束 X射线 DNA损伤和修复辐射防护效应

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甲基叔丁基醚职业暴露人群淋巴细胞遗传损伤研究

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预防医学 2017年第8期29卷 757-761页

作者：薛惠中王禹高明张国珍朱富强汤晓萍阮征钱亚玲吴南翔浙江省医学科学院浙江杭州300013 中国石油化工股份有限公司镇海炼化分公司

目的研究甲基叔丁基醚(MTbE)暴露对淋巴细胞遗传毒性损伤,为建立MTbE职业人群暴露限值体系提供参考。方法人b淋巴母细胞分别用不同浓度MTbE溶液染毒24 h,彗星实验检测细胞尾部DNA百分比及Olive尾矩,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检... 详细信息

目的研究甲基叔丁基醚(MTbE)暴露对淋巴细胞遗传毒性损伤,为建立MTbE职业人群暴露限值体系提供参考。方法人b淋巴母细胞分别用不同浓度MTbE溶液染毒24 h,彗星实验检测细胞尾部DNA百分比及Olive尾矩,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分比。选择某炼化厂60名MTbE职业暴露工人为暴露组,55名未接触MTbE工人为对照组,微核实验检测外周血淋巴细胞微核率,彗星实验检测外周血淋巴细胞尾部DNA百分比及Olive尾矩,酶联免疫吸附试验检测外周血血浆丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果人b淋巴母细胞经10、12.5μmol/L的MTbE染毒24 h后,尾部DNA百分比、Olive尾矩和细胞凋亡百分比均高于对照组(P人外周血微核阳性率为8.93%,高于对照组的3.92%,但差异无统计学意义(P>0.05);暴露组尾部DNA百分比为(15.70±7.67)%,高于对照组的(14.65±6.20)%,差异无统计学意义(P>0.05);暴露组Olive尾矩为7.00±4.94,高于对照组的3.84±1.97(P人血浆MDA、8-OHd G及GSH-Px水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MTbE暴露可诱导人b淋巴母细胞和人外周血淋巴细胞发生遗传损伤。

关键词：甲基叔丁基醚人b淋巴母细胞职业暴露遗传损伤

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