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SDC-1、HLA-g和MMP-9在子宫内膜异位症中的检测及其意义

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SDC-1、HLA-G和MMP-9在子宫内膜异位症中的检测及其意义

作者：王平郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的子宫内膜异位症(endometriosis, EMS)是指子宫内膜腺体和间质种植在子宫腔以外引起的一种良性疾病。其发病机制至今尚未明了，EMS表现出邻近器官种植和破坏，周围组织的侵润，远处部位转移，无限制的生长，治疗彻底更困难和... 详细信息

背景和目的子宫内膜异位症(endometriosis, EMS)是指子宫内膜腺体和间质种植在子宫腔以外引起的一种良性疾病。其发病机制至今尚未明了，EMS表现出邻近器官种植和破坏，周围组织的侵润，远处部位转移，无限制的生长，治疗彻底更困难和快速复发等常见的生物学行为，是具有类似恶性肿瘤生物学特质的一种良性病变，因此影响肿瘤细胞脱离、迁移、粘附、降解及浸润增殖过程的相关各种分子被广泛应用于EMS的研究。多配体蛋白聚糖-1(Syndecan-1, SDC-1)属于跨膜黏蛋白聚糖家族成员，是一个经典的生长因子、血管生成因子、趋化因子，其硫酸肝素侧链(heparansulfate, HS)链具有广泛的结构异质性，结合细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)、细胞表面黏附分子、生长因子、酶等，参与细胞增殖、黏附、迁移和血管生成等过程。人类白细胞抗原g(humanleucocyteantigen-g, HLA-g)是非经典性的MHC-Ib类抗原分子，通过抑制NK细胞和T淋巴细胞的活性，参与肿瘤细胞的免疫逃逸。ECM的降解是EMS异位内膜细胞侵袭和种植的主要途径，而MMPs在ECM的降解中起重要作用。基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9, MMP-9)可降解ECM，穿透细胞的基底膜，通过与整合素的相互作用，从而加强细胞-细胞间的黏附作用，同时促进血管内皮细胞的出芽，利于新生血管的形成。目前，国内外尚未见报道关于联合检测SDC-1、HLA-g和MMP-9在EMS患者中表达水平的研究。本实验通过免疫组化S-P法(immunohistochemical S-Pmethod)和酶联免疫吸附法(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对EMS患者异位内膜、在位内膜组织及血清中SDC-1、HLA-g和MMP-9的表达水平进行研究，分析其表达水平与EMS临床分期的关系，并分析三者之间的关系，以探讨SDC-1、HLA-g和MMP-9在EMS发病机制中的作用，为EMS的发病机制和临床研究提供理论依据。材料和方法1研究对象1.1随机抽取2012年7月至2013年9月我院妇科收治的经腹腔镜及病理诊断证实为卵巢子宫内膜异位囊肿的患者88例。采用1985年美国生育学会修订的EMS临床分期标准(R-AFS)进行分期：Ⅰ-Ⅱ期44例，Ⅲ-Ⅳ期44例，对照组为35例同期入院行宫腹腔镜手术的子宫纵膈患者。1.2对88例卵巢子宫内膜异位囊肿标本进行苏木素伊红(HE)染色后筛选纳入实验组60例，Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期各30例，取卵巢子宫内膜异位囊肿部分囊壁作为标本，纳入异位内膜组;60例EMS患者中48例患者，Ⅰ-Ⅱ期25例，Ⅲ-Ⅳ期23例，因有生育要求同时行宫腔镜检查，排除内膜病变，取宫腔在位内膜作为标本，纳入在位内膜组;35例子宫纵膈患者的标本，排除EMS、子宫内膜病变及其它疾病，取子宫正常内膜作为标本，纳入对照组。1.3123例均于术前清晨抽取空腹肘静脉血。1.4以上纳入标准：(1)育龄期女性，月经周期基本正常;(2)3个月内无激素类药物应用史;(3)无其他系统疾病，尤其排除恶性肿瘤;(4)无急、慢性炎症及其他盆腔疾病;(5)所取标本时间均为患者处于月经周期的增殖期。2实验方法2.1利用免疫组化S-P法检测EMS患者异位内膜、在位内膜及对照组中SDC-1、HLA-g和MMP-9的表达水平。2.2利用ELISA法检测EMS患者及对照组血清中SDC-1、HLA-g和MMP-9的表达水平。3统计学方法所有实验数据均采用SPSS17.0统计软件包进行统计分析，定量资料的统计分析以均数±标准差(±s)表示;两组独立样本的比较采用独立样本t检验;两两间比较采用最小显著性差异法(LSD-t)检验;多组间比较采用单因素方差(ANOVA)分析;相关性采用Pearson直线相关性分析;敏感度和特异度采用应用受试者工作特征曲线(ROC)分析。检验水准α=0.05。结果***组和对照组组织中SDC-1、HLA-g和MMP-9蛋白表达水平SDC-1、HLA-g和MMP-9蛋白主要表达于EMS患者异位内膜和在位内膜组织的腺上皮细胞胞质中，间质细胞的胞质也有少量表达。异位内膜组、在位内膜组和对照组组织中SDC-1蛋白的平均光密度(OD)值分别为：146.35±19.56、114.86±13.67和70.30±11.23，(F=277.44,P=0.000);HLA-g的平均OD值分别为：152.69±16.08、129.06±8.93和61.95±9.40，(F

关键词：子宫内膜异位症多配体蛋白聚糖-1 人类白细胞抗原-g 金属基质蛋白酶-9

HLA-g在卵巢癌细胞株SKOV-3中表达的实验性研究

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HLA-G在卵巢癌细胞株SKOV-3中表达的实验性研究

作者：王琳山东大学

学位级别：硕士

目的:人类白细胞抗原g(human leukocyte antigen-g,HLA-g)属于非经典的HLA-Ⅰ类抗原分子(HLA-Ⅰb),早期的研究发现HLA-g的表达仅局限于母-胎界面的绒毛外细胞滋养层,对其与妊娠的关系研究较多,后来研究发现在人类恶性肿瘤有所表达,HLA-... 详细信息

目的:人类白细胞抗原g(human leukocyte antigen-g,HLA-g)属于非经典的HLA-Ⅰ类抗原分子(HLA-Ⅰb),早期的研究发现HLA-g的表达仅局限于母-胎界面的绒毛外细胞滋养层,对其与妊娠的关系研究较多,后来研究发现在人类恶性肿瘤有所表达,HLA-g与肿瘤的关系引起人们的关注。卵巢癌细胞株SKOV-3是经典的人类卵巢恶性肿瘤细胞株之一,本研究以绒毛膜癌细胞株JEg-3中HLA-g mRNA及蛋白的表达为阳性对照,研究体外培养的卵巢癌细胞株SKOV-3中人类白细胞抗原g(human leucocyte antigen-g,HLA-g)的表达,以期为探讨肿瘤的发生发展提供新的思路和理论依据。方法:分别应用逆转录酶聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerasechain reaction,Rt-PCR)、免疫细胞化学法及流式细胞术方法三种方法在基因和蛋白水平上检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-g的表达,以绒毛膜癌细胞株JEg-3中HLA-g mRNA及蛋白的表达为阳性对照:(1)体外培养的卵巢癌细胞株SKOV-3,生长到细胞密度为5×10个/ml时,收集细胞,用Trizol法提取细胞RNA,应用逆转录酶聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chainreaction,Rt-PCR)检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-g mRNA的表达;(2)将卵巢癌细胞株SKOV-3细胞以5×10个/ml的细胞密度接种在已铺有无菌盖玻片的6孔板内,37℃,5%CO下生长48小时后取出盖玻片,在室温下按照免疫细胞化学试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司)中的步骤进行实验,免疫细胞化学法检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-g蛋白的表达。(3)卵巢癌细胞株SKOV-3细胞生长至5×10个/ml的细胞密度时消化收集细胞处理成单细胞悬液,处理后采用流式细胞术方法检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-g蛋白的表达。结果:(1)Rt-PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明SKOV-3细胞中有HLA-g mRNA的表达,其中HLA-g1:764bp HLA-g2:488bpHLA-g3:215bp HLA-g4:491bp HLA-g5:886bp HLA-g6:610bp HLA-g7:360bp(2)以细胞表面及细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准,免疫细胞化学显色显示SKOV-3细胞膜及细胞浆内有HLA-g的表达。(3)流式细胞术结果提示SKOV-3细胞中HLA-g的阳性率是33.77%。结论:卵巢癌细胞株SKOV-3表达HLA-g,提示HLA-g参与了卵巢癌肿瘤细胞的免疫逃逸,对维持SKOV-3的恶性生物学特征发挥重要的作用。

关键词：人类白细胞抗原-g SKOV-3细胞株 JEg-3细胞株卵巢肿瘤

HLA-g在胃癌患者外周血及癌组织中的表达及临床意义

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HLA-G在胃癌患者外周血及癌组织中的表达及临床意义

作者：王亮河北医科大学

学位级别：硕士

目的:胃癌是我国常见消化道恶性肿瘤之一,严重危害着人民的生命与健康。虽然目前对胃癌采取了多手段的综合治疗,且生存率较以往有所提高,但仍无突破性进展,研究发现,其难以治愈的原因之一与肿瘤的免疫逃逸有关。HLA-g(human leukocyte a... 详细信息

目的:胃癌是我国常见消化道恶性肿瘤之一,严重危害着人民的生命与健康。虽然目前对胃癌采取了多手段的综合治疗,且生存率较以往有所提高,但仍无突破性进展,研究发现,其难以治愈的原因之一与肿瘤的免疫逃逸有关。HLA-g(human leukocyte antigen-g,人类白细胞抗原-g)属于非经典HLA-I类分子,表达于母胎界面滋养层细胞,参与母胎免疫耐受,是正常情况下母体不对胎儿产生排斥反应的主要原因,被认为是妊娠成功的必要条件。近年的研究表明,HLA-g与器官移植、生殖及肿瘤等多种免疫反应有关,是引起免疫耐受的一种重要因子。它能够直接抑制CD4+T细胞增殖、诱导CD8+T细胞凋亡、抑制NK细胞的细胞溶解作用等,进而影响机体的免疫反应。本研究通过检测胃癌患者外周血及胃癌组织中HLA-g、T细胞亚群和NK细胞的表达情况,从而探讨HLA-g与胃癌免疫逃逸的关系,为进一步探讨肿瘤免疫耐受的机制及提高肿瘤的免疫治疗方法奠定理论基础。方法:采用流式细胞仪测定经病理组织学确诊为胃癌患者的癌组织、正常胃粘膜及外周血单个核细胞中HLA-g的表达水平,以及胃癌患者癌组织和外周血中T淋巴细胞亚群和NK细胞的分布情况。结果:1胃癌患者外周血及癌组织中T淋巴细胞亚群和NK细胞的分布情况胃癌患者癌组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值和NK细胞计数分别为33.90±9.78、37.44±8.90、36.40±8.86、0.51±0.11和9.28±3.37,外周血中的含量分别为58.90±10.85、52.01±9.55、20.66±5.19、1.57±0.49、19.94±6.28;胃癌患者外周血中的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值和NK细胞均显著高于胃癌组织(p细胞计数反之(pg在胃癌组织、正常胃粘膜及胃癌患者外周血单个核细胞中表达情况胃癌组织、正常胃粘膜及外周血单个核细胞中HLA-g表达量分别为1.24±0.25、0.94±0.31和1.00±0.22,癌组织HLA-g的表达量显著高于正常胃粘膜组和外周血组(p0.05)。3胃癌患者癌组织及外周血单个核细胞中HLA-g的表达量与T淋巴细胞亚群和NK细胞的相关性分析3.1癌组织中HLA-g的表达量与T淋巴细胞亚群和NK细胞的相关性分析HLA-g的表达量与CD3+、CD4+表达率呈负相关(r=-0.58,p细胞亦呈负相关(r=-0.422,r=-0.630,p细胞中HLA-g的表达量与T淋巴细胞亚群和NK细胞的相关性分析HLA-g的表达量与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的比值和NK细胞呈负相关(r=-0.570,r=-0.454,r=-0.460,r=-0.560,pg的表达量与患者临床生物学行为的关系4.1低分化腺癌组HLA-g表达量为1.35±0.24,高、中分化腺癌表达量为1.03±0.19,两组比较差别有统计学意义(pg的蛋白表达量为1.36±0.34,无转移组表达量为0.99±0.25,两组比较差别有统计学意义(pg蛋白表达量为1.07±0.22,Ⅲ+Ⅳ期组表达量为1.30±0.28,两组比较差别有统计学意义(pg蛋白表达量与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、有无脉管瘤栓、Borrmann分型无相关(p>0.05)。结论:1胃癌患者癌组织中的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值和NK细胞含量较外周血中的低,而CD8+显著增高,提示胃癌患者癌组织局部T细胞、NK细胞免疫呈现低下或抑制状态。2胃癌患者癌组织及外周血单个核细胞中HLA-g的表达量与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的比值和NK细胞含量呈负相关,而与CD8+表达率呈正相关,提示HLA-g参与了胃癌患者机体的免疫调节。3 HLA-g在胃癌组织、正常胃粘膜及外周血单个核细胞中均有表达,且胃癌组织中HLA-g的表达量高于正常胃粘膜和外周血。提示HLA-g可能参与了胃癌局部的免疫逃逸。

关键词：胃癌人类白细胞抗原-g T淋巴细胞亚群 NK细胞免疫逃逸流式细胞术

ILT4和HLA-g在NSCLC中的共表达对病人预后的影响及其机制研究

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ILT4和HLA-G在NSCLC中的共表达对病人预后的影响及其机制研究

作者：张晏文山东大学

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[研究背景]肺癌是世界范围内发病路和死亡率均很高的恶性肿瘤,严重威胁着人类的生命健康。非小细胞肺癌(NSCLC, non-small-cell lung cancer)是肺癌最常见的类型,占肺癌所有类型的的85%。ILT4是免疫球蛋白样转录因子家族的一员,主要通... 详细信息

[研究背景]肺癌是世界范围内发病路和死亡率均很高的恶性肿瘤,严重威胁着人类的生命健康。非小细胞肺癌(NSCLC, non-small-cell lung cancer)是肺癌最常见的类型,占肺癌所有类型的的85%。ILT4是免疫球蛋白样转录因子家族的一员,主要通过免疫受体络氨酸抑制基序产生抑制信号。本课组前期研究在NSCLC细胞中检测到ILT4的表达,且其表达与患者临床预后具有相关性,ILT4可以通过免疫调节和非免疫调节参与促进NSCLC进展的过程。HLA-g属于非经典MHCI分子,可在肿瘤组织中表达并发挥免疫逃避的作用。已有研究证实,HLA-g在NSCLC患者肺癌组织和血浆中均有表达,并与患者临床病理参数和预后相关。综上所述,ILT4和HLA-g均可表达于NSCLC中,而且均可以影响NSCLC的进程。由此我们推测,ILT4和HLA-g可能通过相互作用参与NSCLC的进展。据我们所知,关于ILT4和HLA-g在NSCLC中的共表达作用和相互调节机制目前尚无人研究。本课题组拟研究ILT4和HLA-g在NSCLC组织和细胞中的共表达,分析二者共表达与NSCLC患者预后的关系,并进一步研究二者参与NSCLC进展的分子生物学机制,这将对提高NSCLC治疗的有效率、延长病人的无病生存期、改善预后具有重要意义。[目的]明确ILT4及HLA-g在NSCLC细胞系和肿瘤组织中的共表达情况;明确ILT4与HLA-g的共表达对NSCLC患者预后的影响;明确ILT4与HLA-g在NSCLC中共表达的相互调节作用;探究二者相互作用影响NSCLC发生发展的可能机制;[方法]1、采用免疫组化方法,检测81例NSCLC肿瘤组织中ILT4和HLA-g的表达情况,分析ILT4与HLA-g表达之间的相关性,从而分析ILT4-HLA-g共表达与患者临床病理参数的关系;2、收集81例患者病历资料,采用SPSS 18.0统计学分析软件中Kaplan-Meier法分析并绘制生存曲线,观察ILT4与HLA-g的共表达对NSCLC患者生存和预后的影响。3、采用RT-PCR和Western Blot的方法,检测5株NSCLC细胞系A549、H1650、H226、H1299、H1975中ILT4及HLA-g mRNA和蛋白水平的表达情况。4、检测上调或下调受体ILT4的表达是否对HLA-g的表达产生影响。采用瞬时转染技术,分别用Pez-lv105-ILT-4 (ILT-4 vector)质粒瞬时转染ILT4低表达细胞株(H1650)上调ILT4的表达,用pgPU6/gFP/Neo-shILT4 (shILT4)质粒瞬时转染ILT4高表达细胞株(A549)下调ILT4的表达,通过RT-PCR和Western Blot的方法,检测相应细胞株中HLA-g mRNA和蛋白水平的表达变化;5、在HLA-g低表达细胞株(1650)中加入不同浓度的HLA-g重组蛋白刺激,采用RT-PCR和Western Blot的方法检测相应细胞株中ILT4 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用western blot的方法检测信号通路蛋白pAKT, pERK1/2, pNF-κB。6、在H1650细胞株中加入ILT4封闭性抗体,再加入HLA-g重组蛋白刺激,采用western blot的方法检测信号通路蛋白pERKl/2的表达变化。[结果]1、在NSCLC肿瘤组织中,ILT4和HLA-g存在共表达并与临床参数具有相关性。在81例病例组织中,ILT4和HLA-g的表达有非常明显的相关关系(P(0.0001,R=0.596)。ILT4+/HLA-g+组与其他组(ILT4-/HLA-g-组、ILT4+/HLA-g-组和ILT4-/HLA-g+组)相比,在局部淋巴结转移(p=0.001)和和肿瘤分期(p=0.006)更具相关性。ILT4+/HLA-g+组与ILT4-/HLA-g-组相比,在组织学类型(p=0.042)和细胞分化(p=0.013)也具相关性。2、ILT4和HLA-g的共表达与NSCLC患者预后相关。Kaplan-Meier法计算生存率并绘制生存曲线分析,ILT4+/HLA-g+的患者的生存率明显比ILT4-/HLA-g-患者(p=0.048)和ILT4+/HLA-g-患者(p=0.021)低。但是ILT4+/HLA-g+的患者与ILT4-/HLA-g+的患者相比,生存率无明显差异(p=0.254)。3、在NSCLC细胞系中,ILT4和HLA-g存在共表达。5株NSCLC细胞系A549、H1650、H226、H1299、H1975中均有ILT4及HLA-g的表达。且二者在五铢细胞系中的表达强度具有一致性。4、在NSCLC细胞系中,上调、下调ILT4的表达可影响HLA-g的表达。与对照组相比,上调ILT4

关键词：非小细胞肺癌免疫球蛋白样转录因子4 人类白细胞抗原-g 靶向治疗

miR-19a在重度子痫前期患者胎盘中的表达及功能研究

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miR-19a在重度子痫前期患者胎盘中的表达及功能研究

作者：王桂锋第四军医大学

学位级别：硕士

子痫前期(preeclampsia, PE)是指妊娠20周以后出现的妊娠特有疾病,主要临床表现为高血压、蛋白尿和水肿,在我国其发病率是9.4 %,可以引起严重的母婴并发症,是导致孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一[1]。子痫前期的病因非常复杂,胎盘滋... 详细信息

子痫前期(preeclampsia, PE)是指妊娠20周以后出现的妊娠特有疾病,主要临床表现为高血压、蛋白尿和水肿,在我国其发病率是9.4 %,可以引起严重的母婴并发症,是导致孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一[1]。子痫前期的病因非常复杂,胎盘滋养细胞功能障碍是其发病基础,主要与胎盘浅着床、胎盘缺氧、血管内皮的广泛损伤、基因的遗传背景、母婴免疫失衡等因素有关。微小RNA (miRNA )是一类长19-25nt的小分子非编码RNA,成熟的miRNA通过其5’端的5个核苷酸,以碱基互补配对的方式识别、结合靶mRNA,指导沉默复合体降解靶mRNA或者抑制靶mRNA的翻译,达到转录后调控目的基因表达的作用[2],在生物体早期发育、细胞分化、细胞凋亡等方面发挥作用,参与生命发育及各种疾病的发生。Pineles BL首次验证了在子痫前期(合并或不合并胎儿宫内发育迟缓)病人的胎盘中有特异的miRNA增强表达[3],提示了miRNA可能与子痫前期的发病有关。本实验研究比较了miR-19a在正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘组织中的表达,以探讨其与子痫前期发病的关系。目的: 检测miR-19a在正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘组织中的表达,以探讨其在子痫前期发病中的作用。方法: 1.应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测miR-19a在20例重度子痫前期患者和20正常妊娠胎盘组织中的表达水平。 2.以JEg-3细胞系为研究模型,采用miRNA过表达技术使其过表达miR-19a,用RT-PCR与免疫印迹(western blot)技术验证其靶基因的表达水平。结果: 1. miR-19a在重度子痫前期患者胎盘组织中表达升高(pg-3细胞中人类白细胞抗原g(HLA-g) mRNA水平无差异(p>0.05),western blot结果显示过表达miR-19a后,HLA-g蛋白表达水平下降(pg是miR-19a的作用靶点,子痫前期患者表达升高的miR-19a可能通过调控HLA-g参与该病的发生。

关键词：子痫前期微小RNA 人类白细胞抗原-g 胎盘

云南地区HLA-g基因3’非翻译区位点多态性与系统性红斑狼疮的关联研究

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云南地区HLA-G基因3’非翻译区位点多态性与系统性红斑狼疮的关联...

作者：陈婷婷北京协和医学院

学位级别：硕士

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种临床表现多样的自身免疫性疾病,以自身抗体产生、补体激活、免疫复合物沉积以及多种组织器官损伤为特征。遗传因素和环境因素共同作用参与SLE的发病过程。亚洲人群有较高的发... 详细信息

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种临床表现多样的自身免疫性疾病,以自身抗体产生、补体激活、免疫复合物沉积以及多种组织器官损伤为特征。遗传因素和环境因素共同作用参与SLE的发病过程。亚洲人群有较高的发病率和狼疮肾炎的患病率。随着全基因组关联研究(genome-WideAssociation study, gWAS)的开展,越来越多的SLE的易感基因／位点不断被发现,且在不同的种群中存在SLE易感基因差异。HLA-g属于非经典的HLA I类抗原,具有抑制免疫反应、调节免疫耐受等作用,有研究表明HLA-g基因多态性和SLE疾病易感性相关。目前HLA-g与SLE的关联研究主要集中于该区域第8外显子3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)14bp缺失／插入和+3142C/g这两个多态位点,对于该区域的其他多态性位点的相关性研究只在巴西人群中报道。因此,HLA-g3'UTR遗传多态性与SLE的关联研究有待于在不同SLE群体中开展。sHLA-g是HLA-g基因表达的重要分子,对机体起着系统化免疫调节作用。有研究显示HLA-g3'UTR区多态性位点与可溶性HLA-g分子的表达水平有关联性,其在SLE发病过程的作用机制值得进一步探讨。为了探究HLA-g3'UTR位点多态性与云南地区人群系统性红斑狼疮、sHLA-g表达水平的关联,我们应用PCR和DNA序列测序法对云南地区349例SLE患者及330名健康对照者的HLA-g基因3'UTR区+296014bp插入／缺失,+3003C/T,+3010C/g,+3027A/C,+3035C/T,+3142C/g,+3187A/g,+3196C/g8个多态性位点进行基因分型。同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其中162例SLE患者sHLA-g水平,进行HLA-g3'UTR基因多态性和sHLA-g表达水平关联研究。实验结果显示：(1) HLA-g3'UTR区+3027A/C、+3035C/T和+3196C/g位点的等位基因分布差异具有统计学意义(Pg、+3142C/g.+3187A/g等位基因和基因型频率在SLE组和对照组间的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。对频率高的等位基因+3027A、+3035T和+3196C进行遗传模式的分析发现+3027A、+3035T在显性模式下,SLE组中(AA+AC)和(CT+TT)的OR值分别为1.578(95%CI:1.153-2.160, P=0.004)和1.720(95%CI:1.260-2.348, P=0.0006)。而+3196C在隐性遗传模式下,SLE组中CC的OR值为2.897(95%CI:1.229-6.830, P=0.015)。(2)单倍型UTR-3(DTCCCgAC)在病例对照两组间的差异具有统计学意义(P=0.003, OR=0.683,95%:0.530-0.881)。单倍型UTR-7(ITCATgAC)在SLE病例组和正常对照组间的差异有统计学意义(P=0.005),OR值为1.439(95%：1.115-1.857)。(3)14bp插入／缺失,+3003C/T,+3010C/g,+3027A/C,+3035C/T,+3142C/g,+3187A/g和+3196C/g位点基因型之间sHLA-g水平的差异没有统计学意义,P值均大于0.05。单倍型UTR-1, UTR-3和UTR-7间sHLA-g表达水平的差异没有统计学意义(P=0.369)。我们的结果提示：(1) HLA-g3'UTR遗传多态性和云南SLE易感性存在关联。HLA-g+3027A/C、+3035C/T和+3196C/g多态性与云南地区系统性红斑狼疮易感性相关,+3027A、+3035T和+3196C等位基因可能为云南地区系统性红斑狼疮发生的风险因素。(2) HLA-g基因3'UTR8个多态性位点构建的单倍型与云南SLE的发生有相关性。推测单倍型UTR-3(DTCCCgAC)可能是SLE的保护性单倍型。单倍型UTR-7(ITCATgAC)可能与SLE的易感性相关。(3)本研究未发现HLA-g3'UTR多态性位点基因型或单倍型与sHLA-g表达水平有显著相关性。

关键词：系统性红斑狼疮人类白细胞抗原-g 多态性 DNA序列测序人类可溶性白细胞抗原-g 关联分析

HLA-g基因上游调控区SNP与重度子痫前期的相关性研究

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HLA-G基因上游调控区SNP与重度子痫前期的相关性研究

作者：琚娟郑州大学

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子痫前期(preeclampsia, PE)是妊娠期特有的严重并发症,在我国发病率为9.4%,国外报道7%-12%。以妊娠20周后高血压、蛋白尿和水肿为特征,并伴有全身多系统损害,同时常伴有胎儿生长受限。该病严重影响母婴健康,是孕产妇和围生儿发病及死... 详细信息

子痫前期(preeclampsia, PE)是妊娠期特有的严重并发症,在我国发病率为9.4%,国外报道7%-12%。以妊娠20周后高血压、蛋白尿和水肿为特征,并伴有全身多系统损害,同时常伴有胎儿生长受限。该病严重影响母婴健康,是孕产妇和围生儿发病及死亡的主要原因之一。子痫前期的病因及发病机制至今尚未完全阐明,是国内外研究的焦点。目前公认可能与以下四种学说有关：遗传易感性、免疫适应不良、胎盘缺血、氧化应激反应。流行病学调查结果提示,遗传易感性及免疫适应不良可能相互影响,共同参与了子痫前期的发病。围绕这一中心思想,对引起移植排斥反应的最主要的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)系统进行研究,筛选子痫前期的HLA系统易感基因位点,成为研究子痫前期的免疫遗传学发病机制的一条重要思路。 HLA-g表达减少的机制可能与HLA-g基因5’上游调控区(5’-upstream regulatore region,5’-URR)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)相关。SNP是指存在于某一(些)群体、正常个体的基因组DNA中单个碱基的差异,是人类遗传信息多态性的本质表现。其具有数目多、分布广,相对稳定的存在于染色体上等特点。SNP的产生可能会引起蛋白质表型的改变,所以SNP也是影响人类体质的关键,使人可能特别易于或特别不易患上某些疾病。本研究从SNP角度研究重度子痫前期的基因背景,推测HLA-g基因上游调控区可能存在导致重度子痫前期发病的某(几)个SNP易感位点,这些位点的碱基变化导致了HLA-g蛋白在母胎界面的表达发生变化,从而打破了母胎间的免疫耐受,导致重度子痫前期的发病。考虑到HLA-g在妊娠过程中的重要作用,及其作为一种可能诱导免疫耐受的分子在临床中的潜在应用价值,分析其表达影响因素将有助于深入了解HLA-g的分子生物学特性,并为临床实践提供有价值的信息。目的本研究收集河南汉族重度子痫前期人群及正常妊娠妇女外周血,采取直接测序法计算HLA-g基因5’-URR SNP位点等位基因及基因型频率,比较各SNP在重度子痫前期组和正常妊娠组间的分布差异。从免疫遗传学角度,分析研究HLA-g基因上游调控区SNP与重度子痫前期的关系,探讨HLA-g基因上游调控区表达调控的机制。材料与方法 1研究对象重度子痫前期患者39例,平均年龄(31.17±5.97)岁,平均孕周(33.93±3.53)周;病人来自2008年10月至2009年3月郑州大学第三临床学院产科。重度子痫前期诊断标准参照乐杰主编《妇产科学》(第7版)。选取同期孕晚期正常足月妊娠妇女43例为对照组,平均年龄(29.82±5.07)岁,平均孕周(38.87±1.01)周。两组孕妇孕前均无高血压、心脏病、肾病、肝病及糖尿病史,无输血及免疫治疗病史。所有研究对象均随访至产后12周。本研究经我院伦理委员会审批通过并获得参与者的知情同意。 2实验方法 2.1标本采集于剖宫产术前采集重度子痫前期组孕妇和正常晚孕组孕妇肘静脉血2mL,以3.8%的枸橼酸钠抗凝,置-20℃冰箱保存备用。采集纳入者个人信息及病史资料,建立数据库。 2.2基因组DNA的提取采用盐析法。将-20℃保存的抗凝全血在室温状态下逐渐溶解。取抗凝全血500μl于已灭菌的1.5mlEppendorf管,加红细胞裂解液(本实验用三蒸水)900μl,颠倒混匀,4000转/分离心1分钟,弃上清,重复以上步骤2-3次,直至沉淀层无色。移去上清,加白细胞裂解液370μl(蛋白酶K终浓度为750ug/ml, SDS至终浓度为1.0%),用振荡器将沉淀打碎,55℃水浴30分钟。待冷却至室温加100μl饱和NaCl,充分混匀15秒,13,000转/分离心6分钟。将离心后的上清转入另一灭菌的1.5mlEppendorf管中,然后离心13,000转/分3分钟。再将离心后的上清转入另一灭菌的1.5mlEppendorf管中,加无水乙醇1ml,轻轻颠倒几次,离心13,000转/分6分钟。离心后倒去上清液加70%乙醇500μl,颠倒混匀13,000转/分离心6分钟。在双人净化工作台中倒去上清,并使Eppendorf管壁附着的DNA自然风干,加三蒸水50μl。用紫外分光光度计检测DNA浓度、纯度,并调整DNA浓度为100μg/ml。标本置-80℃冰箱保存备用。 2.3 HLA-g 5’-URR的特异性扩增采用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction, nPCR)特异性扩增HLA-g 5’-URR片断。根据美国国立生物信息中心(National Center for Bio-technology Information,

关键词：子痫前期上游调控区单核苷酸多态性人类白细胞抗原-g

肝癌白细胞抗原-g的表达及其在肝癌肝移植预后中的价值

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中国普外基础与临床杂志 2012年第7期19卷 712-717页

作者：曾宪成陈贯中陈伟张彤李华张琪陈规划中山大学器官移植研究所中山大学附属第三医院肝移植中心广东广州510630 增城市人民医院(中山大学附属博济医院)普通外科广东增城511300 浙江大学医学院附属第二医院普通外科浙江杭州310009

目的探讨人类白细胞抗原-g(human leukocyte antigen-g,HLA-g)在肝细胞肝癌组织中的表达及其在肝癌肝移植患者预后中的价值。方法回顾性分析2004年1月至2008年5月期间中山大学附属第三医院肝移植中心收治的83例肝癌肝移植患者的临床资... 详细信息

目的探讨人类白细胞抗原-g(human leukocyte antigen-g,HLA-g)在肝细胞肝癌组织中的表达及其在肝癌肝移植患者预后中的价值。方法回顾性分析2004年1月至2008年5月期间中山大学附属第三医院肝移植中心收治的83例肝癌肝移植患者的临床资料。应用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织及其癌旁组织中HLA-g的表达情况,应用Kaplan-Meier法计算累积生存率和无瘤生存率,采用log-rank检验和Cox回归模型分别进行无瘤生存率单因素和多因素分析。结果 83例肝癌肝移植患者中,35例(42.2%)肿瘤复发。全部病例1、3和5年累积生存率分别为97.2%、89.8%和43.1%,1、3和5年无瘤生存率分别为93.6%、68.9%和38.7%。肝癌组织中HLA-g表达阳性率(68.7%)明显高于癌旁组织(15.7%,Pg的表达与肿瘤直径、病理分级和血管侵犯有关(Pg表达(Pg表达阳性组移植后的无瘤生存率低于HLA-g表达阴性组(Pg表达(Pg表达。HLA-g表达、肿瘤侵犯血管及病理分化程度是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。对HLA-g表达阳性患者采取干预治疗及严格筛选肝癌肝移植的适应证可有效降低术后肿瘤的复发率。

关键词：肝细胞肝癌肝移植预后人类白细胞抗原-g 免疫组织化学

胃蛋白酶原、HLA-g诊断早期胃癌及癌前病变的临床意义

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国际检验医学杂志 2021年第24期42卷 2977-2980页

作者：印睿葛建新黄晓丽刘一廷于成功南京江北人民医院消化科江苏南京210000 南京大学医学院附属鼓楼医院消化科江苏南京210000

目的探讨胃蛋白酶原(Pg)、人类白细胞抗原-g(HLA-g)对诊断早期胃癌及癌前病变的临床意义。方法以病理检查诊断的20例早期胃癌患者(胃癌组),30例癌前病变患者(上皮内瘤变组),50例慢性浅表性胃炎患者(对照组)、50例慢性萎缩性胃炎患者(萎... 详细信息

目的探讨胃蛋白酶原(Pg)、人类白细胞抗原-g(HLA-g)对诊断早期胃癌及癌前病变的临床意义。方法以病理检查诊断的20例早期胃癌患者(胃癌组),30例癌前病变患者(上皮内瘤变组),50例慢性浅表性胃炎患者(对照组)、50例慢性萎缩性胃炎患者(萎缩性胃炎组)为研究对象。比较4组患者血清PgⅠ、PgⅡ、PgⅠ/PgⅡ(PgR)、HLA-g水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PgⅠ、PgⅡ、PgR、HLA-g对早期胃癌及癌前病变的诊断价值。结果与对照组比较,萎缩性胃炎组、上皮内瘤变组、胃癌组的PgⅠ、PgR水平明显降低,PgⅡ水平明显升高,差异均有统计学意义(Pg水平明显高于其他3组,差异均有统计学意义(PgR、PgⅠ+PgR、PgⅡ+PgR、PgR+HLA-g诊断上皮内瘤变的曲线下面积(AUC)分别为0.705、0.728、0.713、0.721(PgⅠ+PgⅡ+PgR+HLA-g)诊断上皮内瘤变的AUC为0.734(PgⅡ、PgR、HLA-g诊断胃癌的AUC分别为0.719、0.730、0.674(PgⅡ+PgR、PgⅡ+HLA-g、PgR+HLA-g诊断胃癌的AUC分别为0.740、0.723、0.742(Pg诊断胃癌的AUC(PgⅠ+PgⅡ+PgR+HLA-g)对诊断胃癌有一定价值(PgⅠ、PgⅡ、PgR、HLA-g对早期胃癌及癌前病变具有良好的诊断价值,4项指标联合检测有助于提高临床诊断价值。

关键词：胃蛋白酶原Ⅰ 胃蛋白酶原Ⅱ 胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ 人类白细胞抗原-g 早期胃癌癌前病变