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环境与健康杂志 2010年第11期27卷 1013-1015,F0003页

作者：贾庆华哈小琴蒋军军吕同德中国人民解放军兰州军区兰州总医院医学实验中心甘肃省干细胞与基因药物重点实验室甘肃兰州730050

为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒置相... 详细信息

为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化,采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测Caspase-3的表达,采用Western blot法检测细胞中Caspase-3表达量。结果显示,显微镜下观察发现,乙酸铅染毒人星形胶质细胞变小、变圆,细胞间隙变大,细胞部分脱落。透射电镜观察发现,乙酸铅染毒细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化。流式细胞仪检测结果表明,乙酸铅染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P细胞免疫化学法和Western Blot法检测结果显示,乙酸铅染毒人星形胶质细胞Caspase-3表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高。提示乙酸铅可诱发人星形胶质细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。

关键词：乙酸铅人星形胶质细胞超微结构天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 细胞凋亡

蛋白质转导4型-铜锌超氧物歧化酶融合蛋白在人星形胶质细胞中穿膜能力和保护作用的研究

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国际麻醉学与复苏杂志 2017年第8期38卷 682-687页

作者：孟丽华薛荣亮杨毅猛雷晓鸣党莎杰西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科 710004 陕西省肿瘤医院麻醉科西安710061

目的观察蛋白质转导4型-铜锌超氧物歧化酶融合蛋白（protein transduetion domain4-Cu,Zn superoxidedismutase fusion protein, PTD4-Cu,Zn-SOD）能否穿膜进入人星形胶质细胞、能否减轻人星形胶质细胞的缺氧损伤。方法①Westem blot：从干预时间（15、30、60min）和干预浓度（0．5、1．0、2．0μmol／L）两个方面观察融合蛋白能否穿膜。②实验分组：制备细胞缺氧损伤模型，按完全随机法分为对照组、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）组（SOD组）和PTD442u，Zn-SOD组（PTD4-SOD组），对照组加DMEM（dulbecco’s modified eagle’s medium，DMEM）培养基（不含血清），其余两组分别加入含有Cu，Zn-SOD和PTD4-Cu，Zn-SOD终浓度为2μmol／L的DMEM培养基，三组干预时间均为1h，用AnnexinV／PI凋亡试剂盒流式测凋亡，观察融合蛋白能否减轻细胞缺氧损伤。结果①对照组各组未发现明显的蛋白条带，SOD组各个干预时间点（15、30、60min）与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；PTD4-SOD组在15、30min两个时间点与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；在干预60min时与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②对照组各组未发现明显的蛋白条带，SOD组的各个剂量（0．5、1．0、2．0μmol／L）与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；PTD4-SOD组在0．5、1．0μmol／L两个浓度与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；在浓度为2μmol／L时与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。③对照组的凋亡率为（27．03±0．50）％，SOD组凋亡率为（23．29±0．58）％，和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；而PTD4-SOD组凋亡率为（12．06±0．19）％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；PTD4-SOD组和SOD组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论①PTD4-Cu，Zn-SOD能进入体外培养的人星形胶质细胞内；细胞内融合蛋白的量随着培养的时间和加入融合蛋白浓度的增加而增加。②融合蛋白PTD4-Cu，Zn-SOD能减轻人星形胶质细胞缺氧损伤后的凋亡。

关键词：超氧化物歧化酶人星形胶质细胞穿膜蛋白凋亡

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血管紧张素Ⅱ对人星形胶质细胞老化的影响

山西医药杂志（上半月） 2013年第2期42卷 131-132页

作者：刘芳曹学照何志义中国医科大学附属第一医院 110001

目的本研究通过体外细胞实验,拟探讨血管紧张素Ⅱ对人星形胶质细胞老化的影响。方法血管紧张素Ⅱ不同剂量(1,10,100nmol/L)刺激人星形胶质细胞3d,或者相同剂量血管紧张素Ⅱ(100nmol/L)不同时间(1、3、7d)刺激人星形胶质细胞,利用β半乳... 详细信息

目的本研究通过体外细胞实验,拟探讨血管紧张素Ⅱ对人星形胶质细胞老化的影响。方法血管紧张素Ⅱ不同剂量(1,10,100nmol/L)刺激人星形胶质细胞3d,或者相同剂量血管紧张素Ⅱ(100nmol/L)不同时间(1、3、7d)刺激人星形胶质细胞,利用β半乳糖苷酶染色评估细胞内细胞老化。100nmol/L血管紧张素Ⅱ刺激人星形胶质细胞0、15、30、60min,利用二氢乙啡啶(DHE)染色评估活性氧产生。结果血管紧张素Ⅱ剂量依赖性引起人星形胶质细胞DHE染色表达增多,在30min达到顶峰(P细胞增多(P人星形胶质细胞老化,提示在脑缺血损伤和老年退行性疾病进展期,血管紧张素Ⅱ引起活性氧产生和细胞老化的内在机制。

关键词：血管紧张素Ⅱ 活性氧老化人星形胶质细胞

丹皮酚对肿瘤坏死因子α诱导人星形胶质细胞神经损伤模型的保护机制研究

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中国中医药科技 2023年第3期30卷 443-447页

作者：秦劭晨王爱梅万晓波山西中医药大学附属医院山西太原030024 太原市中医医院山西太原030009

目的:探讨丹皮酚(Pae)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导人星形胶质细胞(HA1800)损伤模型的保护作用机制。方法:以TNF-α(10μg/L)诱导HA1800细胞神经损伤模型,取对数生长期的HA1800细胞分为正常组、TNF-α组、Pae组(50μmol/L)和地塞米松(D... 详细信息

目的:探讨丹皮酚(Pae)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导人星形胶质细胞(HA1800)损伤模型的保护作用机制。方法:以TNF-α(10μg/L)诱导HA1800细胞神经损伤模型,取对数生长期的HA1800细胞分为正常组、TNF-α组、Pae组(50μmol/L)和地塞米松(DEX)组(10μmol/L),TNF-α诱导的HA1800细胞加入Pae或DEX作用24 h后,采用CCK8检测各组细胞活力变化;分光光度法检测一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)表达;RT-PCR检测白细胞介素1β(IL-1β)mRNA、白细胞介素18(IL-18)mRNA、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)mRNA表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-18、NLRP3和caspase-1的水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与正常对照组相比,各浓度Pae组均可诱导正常HA1800细胞增殖。TNF-α诱导细胞损伤后,25~100μmol/L Pae对神经损伤细胞有保护作用,Pae可以抑制HA1800细胞IL-1β、IL-18、NLRP3、caspase-1 mRNA表达(P细胞凋亡(P细胞凋亡发挥对TNF-α诱导的HA1800细胞体外神经损伤模型的保护作用。

关键词：丹皮酚人星形胶质细胞神经损伤凋亡氧化应激 IL-1β IL-18 NLRP3 caspase-1 体外实验

1,2-二氯乙烷及其代谢产物对人星形胶质细胞毒性研究

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中国职业医学 2016年第1期43卷 30-36页

作者：赖关朝罗国忠曾丽海张碧珠李宏玲葛怡琛刘晓勇黄振烈广东省职业病防治院广东省职业病防治重点实验室广东广州510300 广东省电力一局医院 510735

目的探讨1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)及其体内代谢产物对人星形胶质细胞(HAs)的毒性。方法取对数生长期的HAs建立离体细胞培养实验模型,分别采用不同剂量的1,2-DCE(5.00、10.00、25.00、50.00、100.00mmol/L)、2-氯乙醇(5.00、25.00、50.00、... 详细信息

目的探讨1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)及其体内代谢产物对人星形胶质细胞(HAs)的毒性。方法取对数生长期的HAs建立离体细胞培养实验模型,分别采用不同剂量的1,2-DCE(5.00、10.00、25.00、50.00、100.00mmol/L)、2-氯乙醇(5.00、25.00、50.00、100.00、200.00 mmol/L)、2-氯乙醛(1.00、5.00、10.00、20.00、50.00mmol/L)和氯乙酸(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 mmol/L)对HAs进行染毒,培养24 h后,采用荧光倒置相差显微镜观察HAs形态,采用CCK-8比色法检测HAs的存活率和抑制率,估算24 h半抑制浓度(24 h-IC50),采用磷脂结合蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双标记流式细胞技术检测细胞的凋亡情况。结果染毒24 h后,1,2-DCE、2-氯乙醇、2-氯乙醛和氯乙酸均可使HAs发生不同程度的改变,表现为胞体变小、伪足变尖、胞内颗粒增多,细胞透明度下降,圆形悬浮细胞增多。随着1,2-DCE、2-氯乙醇、2-氯乙醛和氯乙酸染毒剂量的增加,HAs的细胞存活率均下降(P细胞抑制率均增加(P<0.01),均呈剂量-效应关系;上述4种受试物对HAs的24 h-IC50分别为56.25、235.00、26.43和1.38 mmol/L。1,2-DCE、2-氯乙醇和氯乙酸均可诱导HAs凋亡,HAs的凋亡率与上述3种受试物的染毒剂量均呈正相关(P<0.01)。结论 1,2-DCE及其代谢产物2-氯乙醇、2-氯乙醛和氯乙酸均可对HAs造成毒性损伤,并可诱导HAs发生凋亡,以氯乙酸毒性作用最强。

关键词： 1,2-二氯乙烷 2-氯乙醇 2-氯乙醛氯乙酸人星形胶质细胞细胞毒性半抑制浓度

EIF2B5表达下调的人星形胶质细胞与人神经元在内质网应激后细胞存活及miRNA表达的差异

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生物化学与生物物理进展 2022年第11期49卷 2230-2239页

作者：陈娜王静敏姜玉武吴晔北京大学第一医院儿科北京100034 首都医科大学附属北京天坛医院儿科北京100070

目的探讨白质消融性白质脑病中胶质细胞选择性受累而神经元受累轻微的原因。方法将EIF2B5-RNAi表达载体转染至人星形胶质细胞和人神经元,检测基础状态下及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)后细胞凋亡和活力,检测参与ERS调... 详细信息

目的探讨白质消融性白质脑病中胶质细胞选择性受累而神经元受累轻微的原因。方法将EIF2B5-RNAi表达载体转染至人星形胶质细胞和人神经元,检测基础状态下及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)后细胞凋亡和活力,检测参与ERS调控的已知和未知miRNA,筛选EIF2B5-RNAi人星形胶质细胞在ERS后miRNA变化。结果与EIF2B5-RNAi人神经元相比,星形胶质细胞自发凋亡及细胞活力下降。较之神经元,更多miRNA参与星形胶质细胞ERS刺激后的调控,EIF2B5-RNAi组参与调控的miRNA数目显著减少。聚类分析发现,5条已知miRNA是通路连接的关键组分。结论人星形胶质细胞在ERS后可能更加依赖众多促细胞增殖分化的miRNA修复,而EIF2B5-RNAi人星形胶质细胞存在自发凋亡,ERS后严重减少的miRNA可能导致细胞无法存活。

关键词：白质消融性白质脑病人星形胶质细胞人神经元内质网应激凋亡 miRNA表达差异

人脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养体外血脑屏障细胞模型的建立

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人脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养体外血脑屏障细胞模型的...

作者：庞博南京农业大学

学位级别：硕士

血脑屏障(Blood Brain Barrier,BBB)是位于中枢神经系统与血液循环系统之间具有一定的限制物质通过能力、调节和维持中枢神经系统微环境稳定的屏障结构。主要由脑微血管内皮细胞、Ⅰ型星形胶质细胞足板及血管基膜组成,完整的血脑屏障具... 详细信息

血脑屏障(Blood Brain Barrier,BBB)是位于中枢神经系统与血液循环系统之间具有一定的限制物质通过能力、调节和维持中枢神经系统微环境稳定的屏障结构。主要由脑微血管内皮细胞、Ⅰ型星形胶质细胞足板及血管基膜组成,完整的血脑屏障具有特殊的酶系统、低水平的细胞内吞、以及一定选择性的物质转运功能。猪链球菌(Streptococcus suis,),为链球菌属(Streptococcus)的直径1～2μm单个或卵圆形、液体培养中呈短链状的革兰阳性球菌。根据荚膜抗原的差异,猪链球菌可分为多个血清型以及相当数量未定型菌株。猪链球菌是一种重要的致脑膜炎细菌,但已有的研究还无法揭示猪链球菌如何穿透血脑屏障并引致宿主动物脑膜炎,缺乏一种从分子和细胞层面研究猪链球菌穿透血脑屏障的模型工具。随着近几年体外细胞培养技术和材料工艺的发展和进步,通过模拟体内环境来研究内皮细胞跨膜物质转运、离子信号通路、蛋白表达机制已成为可能。利用此类细胞培养技术,我们可以有条件的在体外重建血脑屏障,通过构建基因突变株、黏附试验等方法,借助免疫荧光技术、电镜技术等手段观察细菌与细胞的互相作用,有助于血脑屏障的进一步研究。本研究使用Transwell细胞培养小室作为载体构建体外血脑屏障模型,利用人脑微血管内皮细胞和人正常星形胶质细胞构建三种血脑屏障模型。通过测定跨内皮阻抗(TEER)和荧光素钠(FLU)通透性来评价血脑屏障模型的构建效果。TEER值测定结果显示:在第5天时,共培养屏障模型可达143Ωcm2,单层hBMEC屏障模型为137Ωcm2,而单层HA-1800屏障模型为124Ωcm2。FLU透过率测定结果显示:单层hBMEC屏障模型为67.8%,共培养屏障模为42.6%。而后,我们利用实验室现有的猪链球菌2型强毒株ZY05719对比大肠杆菌DH5α、猪链球菌CHz型强毒株CZ130302对比其基因缺失弱毒株△50K进行体外血脑屏障穿透试验,统计结果显示:猪链球菌2型强毒株ZY05719对三种屏障模型穿透能力强于大肠杆菌DH5α且差异显著,大肠杆菌DH5α在4h内甚至无法对共培养屏障模型完成穿透。而猪链球菌CHz型强毒株CZ130302对三种屏障模型的穿透能力都强于△50K且差异显著。以上几点说明我们构建的三种血脑屏障细胞模型不仅能够形成与体内生理条件下相似的结构、具有一定的限制物质透过能力,还对致脑膜炎细菌有一定的屏障能力,可以体现出不同细菌对屏障模型穿透能力的差异。但在跨内皮阻抗(TEER)方面与其他文献指报道还存在差异。本研究在细胞共培养模拟体内血脑屏障基础上使用猪链球菌穿透血脑屏障致脑膜炎的研究结果在国内报道较少。这一模型不仅为研究猪链球菌与构成血脑屏障的细胞间互相作用搭建了体外可视化平台还为其提供了一定的理论支持。

关键词：人脑微血管内皮细胞人星形胶质细胞体外血脑屏障模型猪链球菌细菌穿透

黄芩素抑制人巨细胞病毒感染星形胶质细胞的实验研究

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微生物学杂志 2014年第1期34卷 41-46页

作者：周雯李玲于向民刘爱红王斌钱冬萌杨瑞张志超青岛大学医学院组织胚胎学教研室山东青岛266071 青岛大学医学院附属青岛海慈医疗集团山东青岛266071 青岛大学病原微生物学教研室山东青岛266071

目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirous,HCMV)感染尚无特异有效的治疗和预防手段,研究通过观察黄芩素(baicalein,BAI)抑制HCMV体外感染人星形胶质细胞引起的IE、pp65 mRNA及蛋白表达的变化,探讨黄芩素抗HCMV感染的机制。运用MTT法... 详细信息

目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirous,HCMV)感染尚无特异有效的治疗和预防手段,研究通过观察黄芩素(baicalein,BAI)抑制HCMV体外感染人星形胶质细胞引起的IE、pp65 mRNA及蛋白表达的变化,探讨黄芩素抗HCMV感染的机制。运用MTT法检测BAI组、HCMV组、HCMV+BAI组和对照组细胞的细胞活性,观察BAI对HCMV感染致人星形胶质细胞增殖异常的抑制作用;Real-time PCR检测不同组之间IE、pp65 mRNA表达的变化;免疫荧光、Western blot技术检测IE、pp65蛋白表达的变化。MTT结果显示,20μmol/L BAI+HCMV组的吸光值在24、48、72 h均高于HCMV组(P细胞出现明显的细胞病变效应(CPE),而20μmol/L BAI+HCMV组细胞状态较好,CPE不明显;Real-time PCR结果显示在感染48和72 h时20μmol/L BAI+HCMV组IE、pp65的mRNA表达明显低于HCMV组(P细胞的IE、pp65蛋白表达明显低于HCMV组(P细胞增殖异常,同时降低IE及pp65的mRNA和蛋白表达量。

关键词：黄芩素人巨细胞病毒人星形胶质细胞

染料木黄酮对宿主和HCMV编码的IE基因相关microRNA表达的影响

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染料木黄酮对宿主和HCMV编码的IE基因相关microRNA表达的影响

作者：徐敬国青岛大学

学位级别：硕士

目的:1应用染料木黄酮(genistein,Gen)作药物,探讨在人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人星形胶质细胞(human astrocyte,AS)中,Gen对HCMV IE基因的作用及对与主要即刻早期启动子(major immediate early promoter,MIEP)结合的组蛋白H3乙酰化的影响。2探讨宿主和HCMV的micro RNA(mi RNA)在Gen抗HCMV感染AS中的作用。方法:1 ASs由人神经干细胞(human neural stem cell,NSC)分化而来,HCMV于人胚肺中(human embryonic lung fibroblast,HELFs)扩增,TCID50法测其滴度。2 Cell counting kit-8(CCK-8)实验测不同药物浓度下的细胞活性与细胞毒性,以选出合适的药物浓度。3 RT-q PCR测IE1、IE2基因及细胞mi RNA200家族、病毒mi R-UL112的表达变化。4染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)检测与HCMV MIEP结合的组蛋白H3乙酰化的改变。结果:1 CCK-8结果显示,10μmol/L G+V组的cck-8值均高于同时间组的V组。2形态学观察,G组与对照组无明显差别,V组细胞病变明显,V+G组与G+V组的细胞状态相对V组要好,先加药的G+V组的细胞状态相对后加药的V+G组要好。3 RT-q PCR结果表明,同V组相比,10μmol/L G+V与V+G组会降低IE1、IE2基因的表达。4 RT-q PCR结果表明,同V组相比,10μmol/L G+V与V+G组能逆转部分hsami R-200 mi RNA家族及mi R-UL112的下降。5 Ch IP结果显示,10μmol/L G+V与V+G组会降低MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化。结论:1 10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖异常。2 Gen能一定程度抑制IE1、IE2基因的表达,降低病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化,并能逆转部分宿主hsa-mi R200家族及病毒mi R-UL112的下调。Gen可能通过这些作用机理,实现了其抑制病毒IE蛋白的效应。

关键词：人巨细胞病毒人星形胶质细胞染料木黄酮染色质免疫共沉淀 microRNA