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高效液相色谱法同时测定人参中人参皂苷f2和人参皂苷Rg3的含量

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食品安全质量检测学报 2024年第17期15卷 275-281页

作者：罗功才蒲长军纽斯葆广赛(广东)生物科技股份有限公司广州510920

目的建立反相高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定人参中人参皂苷f2和人参皂苷Rg_(3)含量的分析方法。方法样品经高温高压蒸汽灭菌处理后,以0.4%磷酸水溶液:乙腈(90:10,V:V)为流动相,梯度洗脱,样品经... 详细信息

目的建立反相高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定人参中人参皂苷f2和人参皂苷Rg_(3)含量的分析方法。方法样品经高温高压蒸汽灭菌处理后,以0.4%磷酸水溶液:乙腈(90:10,V:V)为流动相,梯度洗脱,样品经C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,并于203 nm波长检测。结果人参皂苷f2在质量浓度8.46~84.56μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=1.0000,加标回收率为97.54%~104.28%,相对标准偏差为2.4%;人参皂苷Rg_(3)在质量浓度18.61~139.60μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=0.9999,加标回收率在96.42%~102.25%之间,相对标准偏差为2.0%。结论该方法前处理简捷、快速,色谱分析又能同时测定人参(药材)中人参皂苷f2和人参皂苷Rg_(3)含量,提高检测效率,可用于实验室对人参中人参皂苷f2和人参皂苷Rg_(3)的批量检测。

关键词：高温高压高效液相色谱法人参皂苷f2 人参皂苷Rg3

人参皂苷f2通过PI3K/Akt途径改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

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现代食品科技 2022年第5期38卷 8-15页

作者：韩胜强谢元李甫胡烨烨周静胡卫成张迹新疆农业大学食品科学与药学学院新疆乌鲁木齐830052 淮阴师范学院江苏省高校区域现代农业与环境保护协同创新中心江苏淮安223300 中国科学院成都生物研究所四川成都610041

该研究探讨了人参皂苷f2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10μmol/L的罗格列酮(阳性对照)和25、50、100μmol/L人参皂苷f2处理胰岛素... 详细信息

该研究探讨了人参皂苷f2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10μmol/L的罗格列酮(阳性对照)和25、50、100μmol/L人参皂苷f2处理胰岛素抵抗细胞12 h,检测细胞对2-NBDG的摄取。实验结束后用RT-qPCR检测各组细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)和胰岛素底物受体1(IRS-1)mRNA相对表达量,并利用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中蛋白表达及其磷酸化水平。结果表明:与模型组相比,25、50、100μmol/L人参皂苷f2均能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对2-NBDG的摄取,分别增加了12.58%、29.07%和34.62%(p人参皂苷f2作用12 h后,GLUT-4和IRS-1 mRNA相对表达量以及PI3K、Akt的磷酸化水平显著提高(p人参皂苷f2可通过促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中GLUT-4和IRS-1mRNA相对表达,增加PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,改善其糖代谢和胰岛素抵抗。

关键词：人参皂苷f2 3T3-L1脂肪细胞 PI3K/Akt信号通路胰岛素抵抗

人参皂苷f2对过氧化氢诱导细胞损伤的保护作用

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卫生研究 2019年第3期48卷 452-457页

作者：刘迪张聪孙宏宇时文艳孔繁利冯宪敏吉林医药学院病原生物学教研室吉林132013 北华大学医学技术学院吉林132013

目的研究人参皂苷f2对人胚肾293(HEK-293)细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以0.4 mmol/L过氧化氢(H_2O_2)诱导HEK-293细胞氧化应激,1.25、5和20μmol/L人参皂苷f2预处理,MTS法检测细胞活力;DCfH-DA荧光探针考察细胞活性氧(reactive oxy... 详细信息

目的研究人参皂苷f2对人胚肾293(HEK-293)细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以0.4 mmol/L过氧化氢(H_2O_2)诱导HEK-293细胞氧化应激,1.25、5和20μmol/L人参皂苷f2预处理,MTS法检测细胞活力;DCfH-DA荧光探针考察细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量;试剂盒检测丙二醛(malondialchehyche, MDA)水平和抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性;蛋白质印迹法(Western blot)和qRT-PCR检测核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)/抑制蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)信号的蛋白和mRNA表达量。结果 1.25、5和20μmol/L人参皂苷f2处理正常HEK-293细胞后对细胞无毒性或促增殖作用;人参皂苷f2预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于损伤组,各组间差异均有统计学意义(Pf荧光较对照组相比显著增强(P人参皂苷f2预处理后细胞ROS相对量呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P人参皂苷f2预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低,各组间差异均有统计学意义(P人参皂苷f2能显著提高CAT活性(P人参皂苷f2处理后,Nrf2的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P人参皂苷f2具有细胞保护作用,可降低HEK-293细胞ROS和MDA水平,提高抗氧化酶活性,其作用机制可能是通过调节Nrf2/Keap1信号通路以抵抗过氧化氢导致的细胞氧化应激损伤。

关键词：人参皂苷f2 氧化应激核因子E2相关因子2 信号通路

人参皂苷f2减肥机制及其对肥胖小鼠肠道菌群的影响

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人参皂苷F2减肥机制及其对肥胖小鼠肠道菌群的影响

作者：周静新疆农业大学

学位级别：硕士

肥胖已经成为一种严重威胁人们生活质量的社会公共卫生问题,在肥胖的众多形成因素中,由饮食不均衡引起的营养性肥胖最为普遍。然而,减肥药物常同时会引起各种副作用,因此,针对肥胖的研究仍十分必要。人参皂苷f2（Gf2）具有抗炎、抗氧化... 详细信息

肥胖已经成为一种严重威胁人们生活质量的社会公共卫生问题,在肥胖的众多形成因素中,由饮食不均衡引起的营养性肥胖最为普遍。然而,减肥药物常同时会引起各种副作用,因此,针对肥胖的研究仍十分必要。人参皂苷f2（Gf2）具有抗炎、抗氧化、抗癌等多种生理功能,本文就Gf2的降脂减肥功能从体内外展开了系统研究,并讨论了其对肥胖小鼠肠道菌群的影响,以期为肥胖相关研究提供实验参考。（1）以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象,采用“鸡尾酒”诱导剂建立高脂模型,研究Gf2的体外降脂作用。MTT细胞活力检测和台盼蓝细胞计数分析表明,Gf2在100μM浓度以内时对3T3-L1前脂肪细胞活力没有影响,但浓度在25-100μM时可以显著抑制分化期的细胞增殖,减少细胞数量。油红O染色显示Gf2在3T3-L1前脂肪细胞的分化早期干预时具有最佳降脂效果,显著抑制胞内TG生成。RT-q PCR检测结果显示Gf2可能通过下调成脂转录因子PPARγ、C/EBPα的表达,从而抑制3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化。（2）采用网络药理学方法预测了Gf2减肥作用机制,共得到35个潜在减肥靶点,包括VEGfA、MAPK1、CASP3等,这些靶点主要参与代谢、结合、组成细胞组分等生物学过程,可能通过EGfR抗酪氨酸激酶抑制剂信号通路、P13K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路等方式发挥减肥作用,表明Gf2具有多靶点、多通路的作用特点。（3）采用RNA-seq技术检测了Gf2干预后3T3-L1前脂肪细胞的基因谱,共得到975个差异表达基因（DEGs）,其中457个基因上调,518个基因下调。GO功能分析表明DEGs主要参与脂肪酸、有机酸、脂质等代谢过程;KEGG通路分析表明DEGs显著富集于AMPK信号通路等生物学通路,采用免疫印迹法对AMPK信号通路蛋白进行验证,结果表明Gf2促进了p-AMPK、p-ACC表达水平;同时采用免疫荧光标记法观察了细胞内线粒体分布,结果发现,Gf2显著增强了脂肪细胞内线粒体荧光强度。因此,Gf2可能通过激活AMPK信号通路、促进线粒体的生物合成来调控3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化,调节脂质代谢。（4）以高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠建立肥胖模型,研究Gf2的体内降脂减肥作用。结果表明,Gf2减轻了肥胖小鼠体重增长和脂肪组织重量,而对小鼠摄食量没有影响。同时,Gf2还通过降低小鼠血清TC、TG和AST水平调节血脂平衡。H＆E病理切片分析显示,Gf2明显减小了脂肪细胞大小,肝脏脂肪空泡明显减少、变小,表明Gf2通过减小脂肪细胞大小来减轻脂肪重量,并且缓解了肝脏脂肪病变。AMPK通路蛋白检测结果与体外实验结果一致,进一步确定Gf2的减肥降脂机制可能是通过激活AMPK信号通路来实现的。（5）Gf2干预重塑了高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠道菌群结构,影响肠道微生物多样性和均匀度。在门水平上,Gf2显著降低了小鼠肠道中厚壁菌门与拟杆菌门的丰度比率;在属水平上,Gf2则显著增加了艾克曼菌属的相对丰度。这些菌群的改变均在相关研究报道中与脂质代谢密切相关,因此,Gf2还可能通过调节这些肠道微生物的相对丰度而缓解肥胖。

关键词：人参皂苷f2 3T3-L1前脂肪细胞脂肪生成肥胖小鼠肠道菌群

人参皂苷f2脂质体装载fTY720诱导胶质瘤细胞发生铁死亡

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人参皂苷F2脂质体装载FTY720诱导胶质瘤细胞发生铁死亡

作者：吴治圣中国医科大学

学位级别：硕士

研究背景与目的:神经胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,其预后差,易复发的特点为临床诊治带来极大的难度。近来研究发现,铁死亡与肿瘤的发生、发展密切相关,为肿瘤的治疗提供新的思路,已成为目前肿瘤研究的热点方向。据报导,fTY720... 详细信息

研究背景与目的:神经胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,其预后差,易复发的特点为临床诊治带来极大的难度。近来研究发现,铁死亡与肿瘤的发生、发展密切相关,为肿瘤的治疗提供新的思路,已成为目前肿瘤研究的热点方向。据报导,fTY720提取自中药冬虫夏草并由结构修饰获得。同时,fTY720在多种癌症模型中具有临床前抗肿瘤疗效。但是fTY720于水溶液中不够稳定,为达到治疗的有效血药浓度需要更高剂量的全身给药,极易引起肝肾毒性,免疫抑制等严重的不良反应,因此局部释放fTY720更有利于胶质瘤的靶向治疗,而近年来对脂质体等纳米药物递送系统的开发为肿瘤的治疗提供了新的方法。由于脂质体的经济性、易制备、血脑屏障通透性及低免疫原性,将fTY720装载于脂质体中能够有效提高脂溶性药物fTY720在血液环境中的稳定性。此外,鉴于跨膜蛋白GLUT1在胶质瘤患者脑组织中呈高表达,为使装载fTY720的脂质体具备靶向胶质瘤的能力,在脂质体的磷脂双分子层表面添加GLUT1的靶向配体人参皂苷f2(Ginsenoside f2,Gf2)。有研究指出,fTY720在多发性骨髓瘤细胞中激活自噬诱导铁死亡,另据报导Gf2可以降低胶质瘤细胞谷胱甘肽水平及促进活性氧累积,这一现象也与铁死亡密切相关,基于以上研究,我们考虑添加在脂质体表面的配体Gf2可以增强fTY720对胶质瘤细胞铁死亡效应。因此,应用Gf2修饰脂质体的磷脂双分子层,同时装载fTY720能够在克服以上各种缺点的同时,高效靶向胶质瘤,诱导胶质瘤细胞铁死亡发生,抑制胶质瘤发生发展。本课题研究目的旨在探讨fTY720诱导的胶质瘤细胞铁死亡具体的分子机制,同时构建一种新型的纳米递送系统装载药物fTY720后透过血脑屏障靶向胶质瘤细胞并抑制肿瘤发展,以此来克服fTY720全身应用时的缺点,为胶质瘤新型治疗手段的选择与研究提供新的思路及理论基础。方法:1、通过CCK-8实验、平板克隆形成实验及STYOX Green死细胞核酸染色检测fTY720对胶质瘤细胞LN229,A172活力,增殖能力及细胞死亡的影响,同时应用各种抑制剂回复实验检测fTY720是以何种方式促进胶质瘤细胞死亡。2、通过免疫荧光实验,各种铁死亡标志物试剂盒,Western blotting实验及透射电镜观察线粒体形态等方式明确fTY720诱导细胞死亡的方式是否为铁死亡同时探究其通路具体分子机制。3、为明确Gf2与fTY720是否协同促进铁死亡发生,通过CCK-8实验,流式细胞仪检测ROS水平,同时检测铁死亡各标志物并通过Western blotting实验检测其促进铁死亡的具体方式。4、构建Gf2-fTY72-LPs纳米载药系统,通过透射电镜观察纳米粒形态,动态光散射技术检测大小、多分散系数及zeta电位,紫外分光光度法及透析法检测Gf2-fTY720-LPs的封装率,载药量及释药效率。5、构建血脑屏障模型,验证Gf2-fTY720-LPs透过血脑屏障及靶向胶质瘤的能力,同时通过分子对接模型及GLUT1受体抑制剂阻断实验,验证Gf2-fTY720-LPs是否通过GLUT1受体靶向胶质瘤细胞。6、通过Western blotting实验检测Gf2-fTY720-LPs是否进一步下调铁死亡关键调控因子GPX4的水平,透射电镜观察Gf2-fTY720-LPs作用下细胞内线粒体形态。7、构建裸鼠原位成瘤模型,通过小动物活体成像仪观察Gf2-fTY720-LPs与颅内的靶向能力及对胶质瘤的抑制作用,免疫组化检测肿瘤组织中铁死亡通路相关蛋白的水平是否与体外实验结论一致,HE染色观察Gf2-fTY720-LPs对裸鼠肿瘤组织大小的影响,同时观察对体内心肝脾肺肾组织是否有明显毒性作用。结果:1、CCK-8实验,平板克隆形成实验及STYOX Green染色结果表明fTY720明显抑制LN229,A172细胞活力,同时抑制其增殖并促进细胞死亡,初步验证了促进细胞死亡的方式可能与铁死亡相关。2、对铁死亡相关标志物及Western blotting实验结果表明fTY720通过AMPK-m TOR-GPX4通路诱导胶质瘤细胞发生铁死亡。3、对Gf2与fTY720协同作用相关实验的结果表明Gf2能够协同fTY720通过进一步下调GPX4的水平增强铁死亡的效应。4、对构建的新型纳米载药系统Gf2-fTY720-LPs表征结果显示其具有良好的物理性质及良好的药物封装率,载药量及释药效率。5、血脑屏障模型证明了Gf2-fTY720-LPs能透过血脑屏障且对胶质瘤具有明显的靶向能力,GLUT1受体抑制剂阻断实验及分子对接模型结果证明了Gf2-fTY720-LPs通过GLUT1受体靶向胶质瘤细胞。6、Western blotting实验及透射电镜检测结果显示Gf2-fTY720-LPs能

关键词：胶质瘤铁死亡纳米载药系统 fTY720 人参皂苷f2

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人参皂苷f2降糖作用研究

人参皂苷F2降糖作用研究

作者：韩胜强新疆农业大学

学位级别：硕士

糖尿病是一种全球流行的慢性疾病,是现代化面临的最大健康挑战之一。近年来,一些天然产物(例:皂苷类、黄酮类、多糖类、多酚类等)在体内外被证明具有降糖活性且副作用较低,对胰岛素抵抗和糖尿病症状有积极改善作用。人参是一种食药同源... 详细信息

糖尿病是一种全球流行的慢性疾病,是现代化面临的最大健康挑战之一。近年来,一些天然产物(例:皂苷类、黄酮类、多糖类、多酚类等)在体内外被证明具有降糖活性且副作用较低,对胰岛素抵抗和糖尿病症状有积极改善作用。人参是一种食药同源的草本植物,具有较高的药用价值和优异的保健功效,人参中的主要活性成分人参皂苷已被用作治疗糖尿病的佐剂多年。体内外试验和临床数据表明人参皂苷的抗糖尿病功效归因于其抗氧化、抗炎和抗高血糖活性。人参皂苷f2(Ginsenosides f2,Gf2)是低糖基皂苷,具有抗氧化、抗炎、抗癌、降脂等生物活性,其降糖作用及其相关机制尚不清楚。因此,本文通过网络药理学预测Gf2降糖作用及其机制,利用体外胰岛素抵抗模型,研究其降糖活性及分子机制。主要研究内容如下:(1)通过网络药理学方法分析Gf2潜在降糖靶点,得到IL2、STAT3、AKT1、AKT2、AKT3等26个相关靶点。将这26个靶点GO和KEGG富集分析。GO功能注释把这26个靶基因的功能分成了三个部分:生物过程、分子功能和细胞组分;主要参与代谢、调控、应激、催化、转导等生物过程;KEGG通路富集共得到148条相关通路,其中包含了AMPK、MAPK、PI3K/AKT和胰岛素信号通路等与降糖相关的信号通路。(2)通过高糖诱导建立IR-HepG2细胞模型,从MAPK信号通路探讨了Gf2对IR-HepG2细胞的氧化应激保护作用,从PI3K/AKT/GSK-3β信号通路研究了Gf2对IR-HepG2细胞糖代谢的影响。细胞活力结果显示Gf2在50μM内对HepG2细胞和IR-HepG2细胞活力均无影响,2-NBDG摄取实验表明Gf2对IR-HepG2细胞糖吸收有促进作用,具有体外降糖作用。高糖诱导能使细胞产生大量活性氧(Reactive oxygen species,ROS),激活MAPK通路引起氧化应激,加剧胰岛素抵抗;而Gf2能抑制MAPK通路中JNK、ERK1/2和p38 MAPK磷酸化,降低ROS和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,增强超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力,减轻氧化应激反应。采用RT-q PCR检测了与葡萄糖转运相关的转运体的基因表达,Western blot检测了MAPK、PI3K/AKT信号通路和糖代谢相关蛋白表达及其磷酸化水平,结果显示Gf2能激活PI3K/AKT信号通路,上调了IR-HepG2细胞中的GLUT-2和GLUT-4水平,促进细胞对葡萄糖的吸收;GSK-3β磷酸化后增加葡萄糖的利用,促进肝糖原合成;同时Gf2降低PEPCK和G6Pase表达水平,抑制糖异生。这些结果初步表明Gf2可能通过MAPK途径降低IR-HepG2细胞氧化应激,改善IR,并激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,促进细胞糖原合成并抑制糖异生。(3)基于PI3K/AKT信号通路探讨Gf2对IR-3T3-L1脂肪细胞糖吸收的影响。采用“鸡尾酒”法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,利用DEX诱导建立体外胰岛素抵抗脂肪细胞模型。地塞米松是一种糖皮质激素类似物,能抑制IRS-1和GLUT-4表达。2-NBDG摄取实验表明Gf2能促进IR-3T3-L1脂肪细胞糖吸收;RT-q PCR结果显示,模型组中的GLUT-1和GLUT-4基因表达水平降低,糖摄入减少;加入Gf2后,恢复了GLUT-1和GLUT-4表达水平,促进细胞糖吸收。Western blot结果显示,DEX处理降低了p-PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达水平,而且RT-q PCR结果提示IRS-1基因表达受到抑制;Gf2处理12 h后,恢复了AKT蛋白表达水平,同时促进了PI3K和AKT蛋白磷酸化,IRS-1表达也得到改善。初步表明Gf2能逆转DEX诱导的PI3K/AKT信号通路失活,上调IRS-1、GLUT-1、GLUT-4表达水平,促进IR-3T3-L1脂肪细胞的糖吸收,进一步验证了Gf2在HepG2细胞中的降糖机制。本研究结果初步表明Gf2的降糖机制可能是通过PI3K/AKT途径实现的。

关键词：人参皂苷f2 HepG2细胞 3T3-L1脂肪细胞 PI3K/AKT信号通路糖代谢

人参皂苷f2改善DSS诱导的小鼠结肠炎的作用机制研究

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人参皂苷F2改善DSS诱导的小鼠结肠炎的作用机制研究

作者：牛志强新疆农业大学

学位级别：硕士

炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)主要包括溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)和克罗恩病(Crohn Disease,CD),不仅影响到胃肠,而且也广泛到影响到其它器官,该病以往多见于西方国家,近年在我国发病率呈显著上升趋势。因此... 详细信息

炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)主要包括溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)和克罗恩病(Crohn Disease,CD),不仅影响到胃肠,而且也广泛到影响到其它器官,该病以往多见于西方国家,近年在我国发病率呈显著上升趋势。因此开发对IBD具有预防和保护作用的药物仍然十分重要。人参中含有多种生物活性物质,而人参皂苷是其主要活性成分。人参皂苷有抗氧化、抗肥胖、抗抑郁、抗炎和心血管保护等作用。本文主要研究人参皂苷f2(Gf2)的抗炎活性及其可能的作用机制。(1)以葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)诱导C57BL/6小鼠获得急性结肠炎模型,通过预先给药(Gf2给药浓度为50和100 mg/kg)建预防型模型,通过对小鼠的体重、饮水量和摄食量进行监测,以及对相关指标进行检测(结肠长度、脾脏指数、结肠组织形态、外周血炎症因子含量、结肠组织炎症相关蛋白表达),评价Gf2对溃疡性结肠炎的改善作用。结果发现,Gf2能够缓解小鼠体重降低,能够促进小鼠的摄食饮水,恢复小鼠结肠长度,降低脾脏指数。综上所述,Gf2能够改善UC小鼠的临床症状。(2)Gf2通过抑制NLRP3炎症小体改善UC小鼠的炎症反应。通过ELISA检测炎症相关因子;RT-PCR检测NLRP3炎症小体相关蛋白和肠屏障紧密连接蛋白转录表达水平;蛋白印迹检测炎症典型效应物分子和NLRP3炎症小体相关蛋白。结果表明,Gf2能够降低炎症因子(IL-6和TNf-α)释放;下调NLRP3炎症小体相关蛋白m RNA水平;上调肠屏障紧密连接蛋白m RNA水平,抑制NLRP3炎症小体相关蛋白表达。以上结果说明Gf2可通过抑制NLRP3炎症小体改善DSS诱导的小鼠结肠炎。(3)以脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导RAW264.7细胞产生炎症,建立体外细胞炎症模型,探究人参皂苷f2的抗炎作用。相对于LPS处理组,人参皂苷f2可以有效抑制LPS刺激RAW264.7细胞的NO释放量,下调i NOS、COX2、TNf-α和IL-1β的m RNA相对表达量,抑制i NOS蛋白的表达,并且可以有效改善细胞形态。最后使用蛋白印迹分析在不同处理时间的细胞全蛋白、核蛋白中相关通路蛋白的表达量,Gf2可通过影响PDK1/AKT/IκB-α/Nf-κB途径发挥抗炎作用。综上,人参皂苷f2对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有明显的改善作用,但具体作用靶点有待进一步探寻。(4)通过分子克隆构建NLRP3及其三个结构域蛋白的真核表达质粒,将表达质粒转入HEK293T细胞中,探究Gf2对外源基因表达的NLRP3及其结构域蛋白的作用。结果表明,Gf2能够下调外源基因表达的NLRP3蛋白,而对NLRP3三个结构域蛋白无明显作用。对开发Gf2针对NLRP3抗炎药物提供一定的理论依据。

关键词：人参皂苷f2 IBD NLRP3 抗炎作用

基于网络药理学预测人参皂苷f2减肥作用的靶标及通路

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现代食品科技 2021年第1期37卷 24-30,307页

作者：周静何洋胡卫成张迹杨晓君新疆农业大学食品科学与药学学院新疆乌鲁木齐830052 淮阴师范学院江苏省区域现代农业与环境保护协同创新中心江苏淮安223300

人参皂苷f2具有抗癌、护肝、抗炎、降脂等多种生理功能,但是其关于减肥的作用机制尚不明确。本研究利用网络药理学方法预测人参皂苷f2减肥作用的潜在靶点和作用通路,借助PubChem、GeneCards数据库收集人参皂苷f2、肥胖靶点信息,通过共... 详细信息

人参皂苷f2具有抗癌、护肝、抗炎、降脂等多种生理功能,但是其关于减肥的作用机制尚不明确。本研究利用网络药理学方法预测人参皂苷f2减肥作用的潜在靶点和作用通路,借助PubChem、GeneCards数据库收集人参皂苷f2、肥胖靶点信息,通过共享靶点,利用Cytoscape等平台构建并分析人参皂苷f2-靶点-肥胖网络。结果表明,人参皂苷f2减肥作用共涉及35个潜在靶点,其中关键靶点包括MAPK1、VEGfA、CASP3等,GO富集提示潜在靶点主要参与代谢、结合、组成细胞组分等生物学过程,通过EGfR抗酪氨酸激酶抑制剂信号通路、P13K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路等方式发挥减肥作用。网络药理学成功预测了人参皂苷f2减肥作用的多靶点、多通路模式,为后续深入探讨其作用机制提供理论依据和研究方向。

关键词：人参皂苷f2 肥胖网络药理学靶点信号通路

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酿酒酵母异源合成稀有人参皂苷f2

酿酒酵母异源合成稀有人参皂苷F2

作者：叶楠天津大学

学位级别：硕士

人参皂苷f2是一种四环三萜类稀有皂苷,具有多种生物活性,如抗癌、抗炎、抗氧化等。与其他稀有皂苷相比,f2具有更高的水溶性和生物膜渗透性,因此更易被人体吸收利用,具有重要的药用价值。由于f2天然含量少,化学合成难,因此本文拟构建生... 详细信息

人参皂苷f2是一种四环三萜类稀有皂苷,具有多种生物活性,如抗癌、抗炎、抗氧化等。与其他稀有皂苷相比,f2具有更高的水溶性和生物膜渗透性,因此更易被人体吸收利用,具有重要的药用价值。由于f2天然含量少,化学合成难,因此本文拟构建生产f2的酿酒酵母细胞工厂,实现f2的异源高效生物合成。本文以高产原人参二醇PPD的酿酒酵母菌株WLT-MVA5为出发菌株,通过表达糖基转移酶UDP-glycosyltransferase 1(UGT1)和glycosyltransferase yoj K1(GTK1),对PPD的C3-OH和C20-OH进行糖基化修饰,在酿酒酵母体内构建了f2的生物合成通路,产量达到6.26 mg/L。随后对糖基转移酶进行了融合表达,并改造酿酒酵母内源途径,敲除DGA1并过表达DGK1使磷脂酸更多地流向三萜途径,敲除EGH1减少糖苷键的水解,高表达PGM1和UGP1提高UDPG的供应,提高f2的产量至56.31 mg/L。继而对限速糖基转移酶GTK1进行了半理性设计和定向进化,获得体外催化活性提高的糖基转移酶突变体GTK1,将其转入酿酒酵母底盘,提升产量至86.80 mg/L,PPD到f2的转化率达到40.76%。最后,经过发酵条件优化和过程控制,在5 L发酵罐中f2的产量达到375.38mg/L。本研究对酿酒酵母进行工程改造,实现了f2的高产量异源合成,为f2的大批量生产及应用奠定了基础。

关键词：酿酒酵母人参皂苷f2 糖基转移酶蛋白质工程代谢工程