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生物素-亲和素系统定向固定糖化酶的研究

中国食品学报 2014年第3期14卷 106-114页

作者：侯红萍张萍王如福山西农业大学食品科学与工程学院山西太谷030801

以生物素-亲和素系统定向固定糖化酶,首先,通过正交试验确定生物素标记糖化酶的最佳条件是:质量浓度为4 mg/mL的酶液2 mL、反应温度20℃、反应pH 4.6、搅拌时间2.5 h;其次,确定了亲和素-磁性琼脂糖微粒的最佳制备条件是:亲和素30μg/mg... 详细信息

以生物素-亲和素系统定向固定糖化酶,首先,通过正交试验确定生物素标记糖化酶的最佳条件是:质量浓度为4 mg/mL的酶液2 mL、反应温度20℃、反应pH 4.6、搅拌时间2.5 h;其次,确定了亲和素-磁性琼脂糖微粒的最佳制备条件是:亲和素30μg/mg载体、反应时间20 min、pH 6.6;最后,确定了生物素-亲和素系统定向固定糖化酶的最佳条件是:生物素标记糖化酶液40μL/mg载体、反应时间20 min、反应温度20℃、pH 6.1。此条件下固定化酶活力为1 629.7 U/g,活力回收率为50.3%,固定化酶相对活力为64.7%。对固定化糖化酶的酶学性质的研究表明,固定化酶的最适作用温度65℃,最适作用pH 5.1,米氏常数Km为2.28 mg/mL,较游离糖化酶的米氏常数Km(5.56 mol/L)小,说明其与底物的亲和力提高。固定化酶连续使用5次,酶活仍保持71.8%,固定化酶的半衰期为84 d。

关键词：糖化酶定向固定化生物素亲和素磁性琼脂糖微粒

基于生物素-亲和素相互作用的胶体晶体阵列的构筑与特性

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高分子学报 2008年第7期18卷 673-678页

作者：李芬李湛勇关英郭林林李霄羽张栩朱晓夏功能高分子材料教育部重点实验室南开大学高分子化学研究所天津300071 加拿大蒙特利尔大学化学系蒙特利尔H3C 317

将胶体晶体阵列(crystalline colloidal arrays,CCA)的Bragg衍射特性与水凝胶的刺激响应性功能结合起来,可制成一种有效的对特定分子具有识别和响应能力的传感材料.采用无皂乳液聚合制备的单分散聚(苯乙烯-4-苯乙烯磺酸钠)纳米颗粒,通... 详细信息

将胶体晶体阵列(crystalline colloidal arrays,CCA)的Bragg衍射特性与水凝胶的刺激响应性功能结合起来,可制成一种有效的对特定分子具有识别和响应能力的传感材料.采用无皂乳液聚合制备的单分散聚(苯乙烯-4-苯乙烯磺酸钠)纳米颗粒,通过表面电荷的静电斥力可自组装形成CCA,经光聚合固定在水凝胶网络内形成聚合胶体晶阵(polymerized CCA).在水凝胶网络中用共价结合引入生物素分子,通过强的亲和相互作用可与蛋白质亲和素生成生物素-亲和素复合物,在水凝胶网络中形成交联点,引起水凝胶体积相变,进而导致CCA晶面间距发生改变,从而引发Bragg衍射波长发生相应的移动.

关键词：胶体晶体阵列水凝胶生物素亲和素

微悬臂生物传感器检测生物素-亲和素相互作用

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化学学报 2011年第2期69卷 243-246页

作者：张慧勇潘宏青唐纪琳张柏林中国科学院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室长春130022 中国科学院研究生院北京100049

将生物素共价键合到微悬臂的硅表面,利用微悬臂传感技术在流动注样条件下研究了生物素-亲和素的动态作用过程,同时利用原子力显微镜(AFM)力刻蚀技术验证了生物素化硅表面结合亲和素的有效性.结果显示亲和素与生物素作用产生较大的表面... 详细信息

将生物素共价键合到微悬臂的硅表面,利用微悬臂传感技术在流动注样条件下研究了生物素-亲和素的动态作用过程,同时利用原子力显微镜(AFM)力刻蚀技术验证了生物素化硅表面结合亲和素的有效性.结果显示亲和素与生物素作用产生较大的表面应力驱动微悬臂偏转,悬臂偏转的程度和速率与亲和素的浓度相关,亲和素浓度越大,微悬臂偏转程度也越大,同时反应速率也更快.这项工作为开发新型的无标记检测技术,研究生物分子之间相互作用提供了有益的探索.

关键词：微悬臂生物素亲和素相互作用

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亲和素与膜表面模型受体的相互作用

中国科学（B辑） 1994年第11期24卷 1162-1170页

作者：刘铮王少鹏文辰晖隋森芳清华大学生物科学与技术系北京100084

通过构建含有生物素的人工膜,运用3种不同类型的人工膜系统(脂质体、气/液界面LB膜和固体表面支撑单层膜)和相应的观测技术(如椭偏仪、衰减全反射、荧光显微镜膜天平、荧光滴定等)、对亲和素与生物素这一具有极强亲和力的系统之间的特... 详细信息

通过构建含有生物素的人工膜,运用3种不同类型的人工膜系统(脂质体、气/液界面LB膜和固体表面支撑单层膜)和相应的观测技术(如椭偏仪、衰减全反射、荧光显微镜膜天平、荧光滴定等)、对亲和素与生物素这一具有极强亲和力的系统之间的特异性相互作用进行了探讨。实验结果表明,膜表面电荷对非特异性吸附的速度有很大的影响,而对最终的蛋白吸附量影响不大;非特异性吸附可以通过二价阳离子的脱附而去除;受体蛋白质与配体间的特异性结合受到侧向空间位阻效应的制约。实验还证明模型受体的柔性是影响其与配体蛋白特异性结合的重要因素。

关键词：人工膜亲和素膜表面受体相互作用

亲和素蛋白与含有生物素的支撑平面膜之间相互作用的研究

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生物物理学报 1994年第2期10卷 203-209页

作者：刘铮肖才德隋森芳陈皓明清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学现代应用物理系

生物功能分子的二维有序化组装是分子工程学的重要内容。本文通过构建有生物素受体的人工模型膜，对亲和素与生物素这一具有极强亲和力的系统之间的特异性相互作用的某些制约因素进行了探讨．应用ＬＢ膜技术结合激先椭圆偏振术和表面等... 详细信息

生物功能分子的二维有序化组装是分子工程学的重要内容。本文通过构建有生物素受体的人工模型膜，对亲和素与生物素这一具有极强亲和力的系统之间的特异性相互作用的某些制约因素进行了探讨．应用ＬＢ膜技术结合激先椭圆偏振术和表面等离激元谱技术，较深入地研究了蛋白质与脂单层膜发生的非特异性吸附，特异性结合以及结合的侧向空间位阻效应．实验结果表明，膜表面电荷对非特异性吸附的速率有很大的影响，而对最终的蛋白吸附量影响不大；非特异性的吸附可以通过二阶阳离子的脱附而去除；受体蛋白质与配体间的特异性结合受到侧向空间位阻效应的制约．

关键词：人工膜亲和素蛋白生物膜

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亲和素及其类似物在生物医学工程中的应用

生命科学 2018年第11期30卷 1258-1263页

作者：廖诗英蒋春樊崔婧婷张敏湖北文理学院医学院襄阳441053

基于与生物素高特异性紧密结合的能力,亲和素及其类似物广泛地应用于生物医学工程的多个领域,包括从简单的亲和纯化到复杂的药物定向运输等。研究发现,通过改造亲和素及其类似物与生物素的结合方式,可以改善它们的功能特性,进而开发出... 详细信息

基于与生物素高特异性紧密结合的能力,亲和素及其类似物广泛地应用于生物医学工程的多个领域,包括从简单的亲和纯化到复杂的药物定向运输等。研究发现,通过改造亲和素及其类似物与生物素的结合方式,可以改善它们的功能特性,进而开发出纳米适配器和分子水凝胶等系统。现概述亲和素及其类似物与生物素作用的模式,以及目前在亲和纯化、医学信号检测、药物运输、疫苗研制和组织工程等方面的研究与应用,为进一步开发该非共价相互作用提供参考。

关键词：亲和素生物素信号检测药物运输疫苗研制组织工程

亲和素与生物素系统在脂单层膜上相互作用的初步研究

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科学通报 1992年第11期37卷 1037-1040页

作者：覃宏谢文章陈浩明隋森芳清华大学生物科学与技术系北京100084 清华大学现代应用物理系北京100084

许多生命现象的进一步研究,常常涉及生物大分子(主要是蛋白质)的精确结构。因此,蛋白质精确结构的确定一直是生物学研究的一个重要课题。X-射线衍射技术的发展,使人们了解到许多蛋白质的精确结构,但是,X-射线衍射要求蛋白质能够形成良... 详细信息

许多生命现象的进一步研究,常常涉及生物大分子(主要是蛋白质)的精确结构。因此,蛋白质精确结构的确定一直是生物学研究的一个重要课题。X-射线衍射技术的发展,使人们了解到许多蛋白质的精确结构,但是,X-射线衍射要求蛋白质能够形成良好的单晶,而这往往是很困难的。与形成三维晶体相比,蛋白质能比较容易地形成二维晶体。

关键词：亲和素生物素单分子层脂 ATR

人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第8期28卷 871-873,875页

作者：杨静曾昭伟王学谦赵倩孙辉李会强天津渤海职业技术学院生物工程系天津300402 天津医科大学天津300070 天津市天津医院天津300211 沃克(天津)生物科技有限公司天津300384

目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-... 详细信息

目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。

关键词：癌胚抗原乳腺癌生物素-亲和素酶联免疫吸附法生物素亲和素

CD45单抗介导的^(188)Re-亲和素二步法预定位靶向淋巴瘤的实验研究

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南方医科大学学报 2015年第8期35卷 1175-1179页

作者：李贵平郑文莉黄宝丹杜丽齐永帅黄凯张辉南方医科大学南方医院核医学科广东广州510515 佛山市第二人民医院超声科广东佛山528000

目的建立CD45单抗介导的188Re-亲和素二步法预定位方法,观察其在荷瘤小鼠体内的生物学分布特点,评价其在淋巴瘤治疗应用中的可行性。方法 CD45单抗及亲和素的188Re标记采用直接标记法,纸层析法测定标记率及放化纯度。取人Raji细胞移植瘤... 详细信息

目的建立CD45单抗介导的188Re-亲和素二步法预定位方法,观察其在荷瘤小鼠体内的生物学分布特点,评价其在淋巴瘤治疗应用中的可行性。方法 CD45单抗及亲和素的188Re标记采用直接标记法,纸层析法测定标记率及放化纯度。取人Raji细胞移植瘤Nod-Scid小鼠6只,随机分为2组,实验组为二步法预定位组,对照组为188Re-CD45单抗组。注药后0.5、1、6和23 h分别进行SPECT显像;同时于注药后24 h分别处死2组荷瘤小鼠,取脏器组织及肿瘤,称重,测量放射性计数,经放射性衰变校正后计算各脏器%ID/g和靶/非靶(T/NT)比值。结果188Re-CD45单抗的标记率(82.52±2.92)%,放化纯度>90%;188Re-亲和素标记率平均为(80.83±3.48)%。荷瘤小鼠SPECT显像及体内生物分布结果示:在实验组整个显像期间血池内放射性均较低,肝脏和脾脏内见较多放射性浓聚,注射后1 h移植肿瘤见显影,随着时间的延长瘤内放射性分布增多,1~6 h肿瘤显影渐清晰,并持续到23 h;注射标记物后24 h,肿瘤摄取(%ID/g)为(1.34±0.52)%,肾脏和肝脏摄取(%ID/g)分别为(6.77±2.32)%和(2.81±1.25)%,其他脏器内的%ID/g保持在较低水平,24 h肿瘤/血液比值为(4.28±0.82),肿瘤/肌肉比值为(8.00±0.88)。而对照组则可见肝脏、脾脏和肾脏内有明显放射性聚集,肿瘤部位显影模糊,20 h血池内仍见有较多放射性分布,肿瘤部位见少量放射性集聚;注射标记物后24 h,肿瘤/血液比值为(0.58±0.06),肿瘤/肌肉比值为(3.21±0.24)。结论与188Re-CD45单抗组相比较,CD45单抗介导的188Re-亲和素二步法预定位组在淋巴瘤荷瘤小鼠体内具有较好的特异性和靶向性,明显提高肿瘤的T/NT比值,标记物注射后1 h即可使肿瘤显影。

关键词：预定位技术亲和素 CD45单抗 188Re 淋巴瘤