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H5Nx禽流感病毒交叉反应性CD4T细胞表位预测

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生物技术通报 2024年

作者：谢爽陈瑶黄俊琼隆昌市人民医院检验科遵义医科大学检验医学院

【目的】评估预先存在的H5Nx交叉反应性免疫记忆，为人类H5禽流感病毒的防治和广谱疫苗的研发提供理论数据。【方法】利用生物信息学方法筛选人源H5Nx禽流感病毒与季节性流感病毒的共同保守的交叉反应性CD4+T细胞表位，进一步分析保守... 详细信息

【目的】评估预先存在的H5Nx交叉反应性免疫记忆，为人类H5禽流感病毒的防治和广谱疫苗的研发提供理论数据。【方法】利用生物信息学方法筛选人源H5Nx禽流感病毒与季节性流感病毒的共同保守的交叉反应性CD4+T细胞表位，进一步分析保守表位嵌套CD8+T细胞表位和B细胞表位情况以及在中国人群中的覆盖率。【结果】92.3%(513/555)的H5Nx CD4+T细胞表位在季节性甲型流感病毒中具有交叉反应性，其中172个表位嵌套CD8+T细胞表位和5个表位嵌套B细胞表位。这些表位与相应HLA-DRB1等位基因在全世界人群中的覆盖率为88.65%。【结论】由于反复接触季节性甲型流感病毒，人群中存在一定水平的的H5Nx交叉反应性免疫记忆，能够为H5Nx感染提供部分保护。

关键词： H5Nx流感病毒共同保守交叉反应性 CD4 T细胞表位嵌套表位

程序性死亡配体2(PD-L2)多克隆抗体在小鼠组织中的交叉反应性研究

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中国科学：生命科学 2013年第4期43卷 304-311页

作者：赵宇卞干兰于才勇刘芳芳刘玲郭虹敏郭俊鞠躬王键第四军医大学神经科学研究所西安710032 第四军医大学唐都医院神经内科西安710038

程序性死亡分子-1(programmed death1,PD-1,由pdcd1基因编码)和它的2个配体PD-L1和PD-L2组成一条重要的抑制性免疫信号通路来防御体外微生物和维持自身免疫耐受.与B7-CD28家族的其他分子不同的是,PD-L1和PD-L2的表达并不局限于免疫系统... 详细信息

程序性死亡分子-1(programmed death1,PD-1,由pdcd1基因编码)和它的2个配体PD-L1和PD-L2组成一条重要的抑制性免疫信号通路来防御体外微生物和维持自身免疫耐受.与B7-CD28家族的其他分子不同的是,PD-L1和PD-L2的表达并不局限于免疫系统.本研究发现,一种识别小鼠PD-L2(mPD-L2)胞外段的多克隆抗体(R&D Systems,MN,USA)可以和多种小鼠组织中的相应抗原结合,这些组织包括:垂体前叶和中间叶、嗅球、嗅上皮、舌上皮、角质上皮细胞、皮肤和胡须的毛囊.这一发现不同于以前关于mPD-L2分子组织定位的报道.然而,随后应用RT-PCR和Western印迹等方法,均未在上述组织中检测到PD-L2的转录本和蛋白,结果提示小鼠的PD-L2多克隆抗体可能与组织内其他抗原存在免疫交叉反应.小鼠发育研究显示,mPD-L2样的抗原最早表达在胚胎12.5天(E12.5)的嗅上皮中;胚胎期14.5天(E14.5)时,皮肤、舌以及皮肤和胡须的毛囊均可见mPD-L2样抗原的表达;从胚胎期18.5天(E18.5)开始,mPD-L2样抗原的分布模式与成年小鼠的分布模式基本一致.生物信息学分析和其他实验结果提示,与PD-L2多克隆抗体起交叉反应的候选蛋白可能是神经细胞黏附因子(NCAM)和Hemicentin-1.结果表明,利用这种PD-L2多克隆抗体检测mPD-L2分子在中枢神经系统和上皮组织,如嗅上皮的表达时,对于染色结果的解释需要特别谨慎.此外,这种PD-L2多克隆抗体也可用于标记小鼠胚胎发育过程中的嗅上皮细胞.

关键词：交叉反应性 PD-L2 免疫反应性 NCAM hemicentin-1

弧菌外膜蛋白OmpU的免疫交叉反应性和交叉保护性

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微生物学报 2016年第5期56卷 867-879页

作者：伦镜盛张设熙董亚萍谢少凤麦亨梅颖怡胡忠汕头大学生物系微生物实验室广东汕头515063

【目的】通过对弧菌外膜蛋白Omp U的克隆、表达以及免疫学特性分析,明确外膜蛋白Omp U是否为弧菌的共同抗原,并具有免疫交叉反应性和交叉保护性。【方法】对弧菌外膜蛋白omp U基因进行克隆和生物信息学分析。分别制备副溶血弧菌、溶藻... 详细信息

【目的】通过对弧菌外膜蛋白Omp U的克隆、表达以及免疫学特性分析,明确外膜蛋白Omp U是否为弧菌的共同抗原,并具有免疫交叉反应性和交叉保护性。【方法】对弧菌外膜蛋白omp U基因进行克隆和生物信息学分析。分别制备副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、拟态弧菌和霍乱弧菌的Omp U重组蛋白抗血清,对Omp U的免疫交叉反应特性以及抗原表位定位情况进行比较分析。以霍乱弧菌的Omp U重组蛋白免疫小鼠后,再以多种弧菌进行攻毒,分析其交叉免疫保护作用。【结果】外膜蛋白Omp U在弧菌种内和种间相似性分别为73.0%–100%和58.6%–89.0%,并至少存在9个保守的B细胞抗原表位。Omp U重组蛋白抗血清在弧菌种内和种间均产生显著的免疫交叉反应,识别弧菌中分子量35–40 k Da的同源蛋白。副溶血弧菌ATCC17802、创伤弧菌ATCC27562和拟态弧菌ATCC33653来源的Omp U重组蛋白抗体能识别供试菌株,提示这些菌株的Omp U抗原表位定位于细胞表面。Omp U重组蛋白对免疫后的小鼠具有交叉免疫保护作用,攻毒实验后小鼠相对存活率(RPS)为43.0%–100%。【结论】上述结果表明,外膜蛋白Omp U是弧菌中一种保守的共同抗原,具有免疫交叉保护性,可以作为弧菌广谱疫苗的候选抗原。

关键词：弧菌外膜蛋白 Omp U 交叉反应性交叉保护性

丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析

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病毒学报 2008年第4期24卷 249-254页

作者：杨苗赵平边中启任艳丽龚育平戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 成都军区昆明总医院感染病中心昆明650032

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位... 详细信息

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性。包装HCV假病毒(HCVpseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用。结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8)。表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用。结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值。

关键词：丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位交叉反应性

人T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性CTLs细胞毒效应及其交叉反应性分析

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中华肿瘤杂志 2003年第1期25卷 9-12页

作者：黄波冯作化李东张桂梅王洪涛华中科技大学同济医学院医学分子生物学研究室武汉430030

目的探讨T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性抗瘤免疫的作用及不同细胞株混合抗原肽之间的交叉反应性。方法从不同白血病细胞株中分别制备混合抗原肽,与Hsp70体外结合,观察Hsp70-抗原肽复合物对人外周血单个核细胞(PBMC)... 详细信息

目的探讨T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性抗瘤免疫的作用及不同细胞株混合抗原肽之间的交叉反应性。方法从不同白血病细胞株中分别制备混合抗原肽,与Hsp70体外结合,观察Hsp70-抗原肽复合物对人外周血单个核细胞(PBMC)的激活增殖作用;以激活增殖的PBMC为效应细胞,对不同的靶细胞进行体外杀伤试验。结果不同白血病细胞株的抗原肽为混合肽,经Hsp70提呈均能够有效激活PBMC,并能使激活的PBMC增殖,增殖活化的PBMC可以特异性杀伤与抗原肽对应的白血病细胞;Hut78-肽和Molt-4-肽激活的PBMC对Hut78细胞、Molt-4细胞和Jurkat细胞的细胞毒作用均显著高于HL-60-肽激活的PBMC(P性抗肿瘤免疫,其所含的抗原肽之间存在交叉性,通过多株来源的抗原肽混合,这种交叉性可以被放大。

关键词： T淋巴细胞白血病混合抗原肽细胞毒效应交叉反应性

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交叉反应性抗脂多糖单克隆抗体的制备及鉴定

交叉反应性抗脂多糖单克隆抗体的制备及鉴定

作者：蒋小滔南方医科大学

学位级别：硕士

脓毒症是ICU病人最常见的死亡原因,尽管其医疗投入巨大,严重脓毒症的死亡率还是居高不下,可达25%-30%,而脓毒症休克的死亡率则更高,达到了40%-70%。脓毒症可由多种病原微生物感染引起,包括革兰氏阳性(G)菌、革兰氏阴性(G)菌和真菌等等... 详细信息

脓毒症是ICU病人最常见的死亡原因,尽管其医疗投入巨大,严重脓毒症的死亡率还是居高不下,可达25%-30%,而脓毒症休克的死亡率则更高,达到了40%-70%。脓毒症可由多种病原微生物感染引起,包括革兰氏阳性(G)菌、革兰氏阴性(G)菌和真菌等等,而其中G菌感染是最重要的一种,占总发病人数的40%以上。脂多糖(LPS)是G菌细胞壁的重要组成成分,也是G菌感染脓毒症中最主要的毒力因子和抗原成分。所以在G菌感染引起的脓毒症的诊断与治疗中,LPS是一个重要的靶点。目前尚无LPS拮抗剂用于临床应用或进入临床观察,但有证据显示,预存抗LPS抗体与败血症的发生、大样本住院肿瘤患者、烧伤、外科手术等因感染死亡的病人数呈负相关,即对LPS诱发的病理进程有明确的保护作用。动物实验显示针对LPS的单克隆抗体(mAb)对实验性脓毒症动物模型具有良好的保护作用。所以,抗LPS的mAb有可能成为治疗G菌感染诱发的脓毒症的一种新制剂。 LPS由三部分组成:O特异性抗原,也叫O抗原或体抗原,位于G菌细胞壁的最外面,由一长链多糖构成;核心寡糖,是一由大约10个左右的单糖组成的寡糖;类脂A。所以,脂多糖是一结构十分复杂、具有多种异质性的生物大分子,而且属于胸腺非依赖抗原(TI)抗原。与蛋白质等胸腺依赖(TD)抗原不同,TI抗原不能诱导抗体亲和成熟,也不能诱导免疫记忆,所以按常规的免疫方法很难产生高亲和力、交叉反应性抗LPS的mAb。为解决此难题,一个可行的方法就是用分子模拟技术,即用蛋白质、多肽来模拟LPS的抗原结构,从而将多糖类TI抗原转变为多肽类TD抗原,提高抗原的免疫原性。那么,筛选出能够模拟LPS抗原结构的多肽就成为其中关键的一步。噬菌体展示技术是一种用于筛选和改造功能性短肽和蛋白质强有力的生物技术,广泛应用于免疫学和分子生物学领域。事实上,噬菌体展示技术早已成功的应用于多糖表位的模拟肽筛选,如对脑膜炎奈瑟球菌A、B、C三种血清型的荚膜多糖的模拟肽筛选。这些结果说明,用噬菌体展示技术可以筛选出模拟多糖抗原表位的模拟肽,从而将TI抗原转变为TD抗原,诱导强而有力的记忆性免疫应答,制备出高亲和力、交叉反应性抗LPS的mAb。所以,本课题的主要研究思路是:利用噬菌体展示技术筛选并合成模拟LPS保守抗原表位的多肽,将其抗原表位的化学性质由脂多糖改变为短肽,由此使TI抗原改变为TD抗原;然后将多肽与适当的载体进行交联,用交联物作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备具有高亲和力、广泛交叉反应性的抗LPS的mAb。最后对其在动物体内、外的保护活性进行初步探讨。本课题组在前期工作中,以具有交叉保护活性的抗鼠伤寒沙门氏菌多克隆抗体为配基成功的从噬菌体环七肽库中筛选到四个可模拟LPS表位的保守序列,其免疫原性和抗原性已通过一系列实验得以证实。其中一个模拟肽经加入延长序列被命名为13L,我们的前期实验显示,用13L交联蓝载体(BC)作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,可以诱导小鼠产生针对G菌感染和内毒素休克的保护作用。以这些实验结果为依据,本实验选择13L作为候选模拟肽,交联BC后免疫BALB/c小鼠,制备抗LPS的单克隆抗体。本研究包括以下两个部分: 一、抗脂多糖单克隆抗体的制备及鉴定模拟肽13L的筛选与合成按照本课题组以前建立的方法进行,现简述如下:以大肠杆菌LPS L2630为配体用亲和层析法从抗鼠伤寒沙门氏菌兔血清中纯化出抗LPS的多克隆抗体;以纯化的多克隆抗体为配体从环七肽库中筛选出模拟LPS抗原表位的多肽,其中的一个亲和力较强的多肽被命名为L7;为了增加L7的结构稳定性,我们在其氨基酸序列两侧各加入两个额外的氨基酸,并命名为13L,然后交由生物公司进行合成。由于短肽分子量过低而不具备免疫原性,遂将其与蓝载体通过交联剂EDC的作用而进行交联,将交联物13L-BC作为本次实验的免疫原。用13L-BC免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,共免疫7次,免疫程序如下:第1次免疫,将13L-BC与福氏完全佐剂(CFA)充分乳化后,小鼠足垫、皮下多点注射,1mg/ml,100μl/只,3周后进行第二次免疫;第2-5次免疫,将13L-BC与福氏不完全佐剂(IFA)充分乳化后,小鼠足垫、皮下多点注射,1mg/ml,100μl/只,每次间隔2周;第6次免疫,将煮沸处理过的大肠杆菌O111:B4和鼠伤寒杆菌直接行小鼠腹腔注射,5×10CFU/只;第七次免疫,2周后,小鼠眼眶静脉采血并包被L2630和L7261用间接ELISA检测血清中抗LPS抗体的滴度,抗体滴度高的小鼠再尾静脉注射10μg L2630加强免疫一次。 3天后,处死小鼠,取其脾细胞与NS-1细胞融合制备杂交瘤,用L2630和L7261进行复合筛选,对双阳性孔进行克隆化。连续三次克隆化100%阳性后,扩大培养杂交瘤细胞,收集杂交瘤细胞行小鼠腹腔注射制备腹水,用亲和层析法从制备的腹水中纯化单克隆抗体。共融合3次,

关键词：单克隆抗体脂多糖模拟肽交叉反应性

鸭坦布苏病毒E蛋白具有独特交叉反应性中和表位的鉴定

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中国兽医学报 2021年第1期41卷 26-32页

作者：林委卫陈雪明李晨曦白小飞刘明张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

利用抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)中和单抗1G2,结合E蛋白多肽扫描技术,鉴定了最小抗原表位^(227)GSSAGTWQN^(235)。Western blot显示,残基^(231)G或^(233)W的突变后,表位完全失去了与1G2抗体识别的功能,表明^(231)G或^(233)W是抗体1G2识别的... 详细信息

利用抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)中和单抗1G2,结合E蛋白多肽扫描技术,鉴定了最小抗原表位^(227)GSSAGTWQN^(235)。Western blot显示,残基^(231)G或^(233)W的突变后,表位完全失去了与1G2抗体识别的功能,表明^(231)G或^(233)W是抗体1G2识别的关键氨基酸位点。通过免疫荧光分析(IFA)显示,MAb 1G2与JEV、WNV和ZIKV的E蛋白发生交叉反应,表明该表位是黄病毒的交叉反应性表位。蛋白质和病毒模型显示,表位定位于成熟病毒粒子可接近的表面,在E蛋白结构域Ⅱ的hi环中。本研究首次证明,中和抗体1G2靶向交叉反应表位定位在E蛋白结构域Ⅱ的hi环,该表位的鉴定有助于提高对黄病毒血清诊断中存在交叉反应问题的认识和理解。

关键词：黄病毒鸭坦布苏病毒中和抗体交叉反应性交叉表位

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T细胞交叉反应性研究进展

中华微生物学和免疫学杂志 2015年第7期35卷 546-549页

作者：周超颖马骊南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所广州510515

T淋巴细胞是免疫系统的重要成分，执行特异性细胞免疫应答，在感染、肿瘤以及自身免疫病的免疫过程中发挥着至关重要的作用。初始T细胞通过其细胞膜表面的T细胞受体（Tcellreceptor，TCR）与抗原提呈细胞（antigenpresentingcell，APC... 详细信息

T淋巴细胞是免疫系统的重要成分，执行特异性细胞免疫应答，在感染、肿瘤以及自身免疫病的免疫过程中发挥着至关重要的作用。初始T细胞通过其细胞膜表面的T细胞受体（Tcellreceptor，TCR）与抗原提呈细胞（antigenpresentingcell，APC）表面的抗原肽-主要组织相容性复合体（majorhistocompatibilitycomplex，MHC）复合物特异结合后，在其他辅助因素作用下，活化、增殖并分化为效应T细胞，进而完成对抗原的清除，以及对免疫应答的调节。

关键词： T细胞受体交叉反应性特异性细胞免疫应答主要组织相容性复合体抗原提呈细胞 T淋巴细胞自身免疫病初始T细胞

花粉症伴食物过敏的致敏花粉、食物变应原交叉反应性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第S2期21卷 72-74页

作者：王良录文昭明尹佳何海娟文利平中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院变态反应科北京100730

为明确致敏花粉与食物之间是否具有交叉反应性 ,应用PharmaciaCAPSystem对 14例花粉症合并食物过敏患者进行了RAST抑制试验 ,结果显示 :桃、龙眼、葵花籽、核桃、花生、大豆、葡萄、西红柿与蒿属花粉、草花粉间均具有交叉反应性 ;苹... 详细信息

为明确致敏花粉与食物之间是否具有交叉反应性 ,应用PharmaciaCAPSystem对 14例花粉症合并食物过敏患者进行了RAST抑制试验 ,结果显示 :桃、龙眼、葵花籽、核桃、花生、大豆、葡萄、西红柿与蒿属花粉、草花粉间均具有交叉反应性 ;苹果与蒿属花粉间具有交叉反应性 ;

关键词：花粉症食物过敏花粉症合并食物过敏交叉反应性