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抗生素暴露大肠杆菌活性氧及抗氧化酶的变化

环境与健康杂志 2020年第4期37卷 294-297页

作者：吴海燕师丹阳杨栋尹静杨忠委李海北王华然邵一帆李君文金敏杨武东北师范大学环境学院吉林长春130117 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室中国人民解放军31610部队

目的探究大肠杆菌Mach1-T1暴露于不同抗生素种类和浓度下,活性氧(reactive oxygen species,ROS)和抗氧化酶的变化。方法将大肠杆菌Mach1-T1分别暴露于8种抗生素分别测定亚抑菌浓度(sub-inhibitory concentration,subMIC)以及最小抑菌浓... 详细信息

目的探究大肠杆菌Mach1-T1暴露于不同抗生素种类和浓度下,活性氧(reactive oxygen species,ROS)和抗氧化酶的变化。方法将大肠杆菌Mach1-T1分别暴露于8种抗生素分别测定亚抑菌浓度(sub-inhibitory concentration,subMIC)以及最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),使用流式细胞仪及多功能酶标仪测定暴露于sub-MIC和MIC的8种抗生素的细菌体内ROS和抗氧化酶变化水平。结果当大肠杆菌暴露于不同抗生素时,8种抗生素均可以诱导大肠杆菌Mach1-T1体内ROS和抗氧化酶水平发生变化,其中,利福平诱导能力最强,与对照组相比,细菌经利福平诱导后ROS水平提高了80%。但细菌的抗氧化酶的变化会随着抗生素的变化而做出不同的响应,如红霉素只能引起大肠杆菌的过氧化氢酶变化,头孢氨苄可引起大肠杆菌的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽还原酶发生变化等。结论当大肠杆菌Mach1-T1暴露于不同抗生素时,会引起细菌体内ROS的变化以及抗氧化系统做出不同响应。

关键词：抗生素活性氧亚抑菌浓度最小抑菌浓度抗氧化系统

抗生素M331的抗铜绿假单胞菌的作用及对其体外形成生物被膜影响的研究

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抗生素M331的抗铜绿假单胞菌的作用及对其体外形成生物被膜影响的...

作者：李越天津医科大学

学位级别：硕士

目的：本课题通过对铜绿假单胞菌临床株和标准株的生物学特性、其生物被膜形态学的研究,探讨了不同浓度的M331以及其联合大环内酯类抗生素对铜绿假单胞菌及其形成生物被膜的影响,以探讨新的治疗铜绿假单胞菌感染及它的生物被膜的方法;... 详细信息

目的：本课题通过对铜绿假单胞菌临床株和标准株的生物学特性、其生物被膜形态学的研究,探讨了不同浓度的M331以及其联合大环内酯类抗生素对铜绿假单胞菌及其形成生物被膜的影响,以探讨新的治疗铜绿假单胞菌感染及它的生物被膜的方法;并初步探讨了药物M331的药物毒性。方法：应用四区划线法分离纯化了菌株;通过对比其对细胞的粘附能力,来观察其毒力;采用改良的组织培养平板法,建立了临床株PA1和标准株PA27853生物被膜的模型;应用微量稀释法,测定了不同药物及其联合用药对PA1、PA3、PA5、PA2059, PA27853的MIC值,应用微量稀释法,测定了PA1、PA2059的MBEC值;应用MTT法测定了不同剂量M331及联合用药后PA1、PA27853生物被膜中的存活细菌数;应用银染法及扫描电镜鉴定生物被膜,并观察了不同剂量M331及其联合用药后PA1、PA27853的超微结构,对其菌落形态学进行描述。结果：临床株和标准株不同菌株的产绿色素的情况不一;PA1、PA27853对Hela细胞的粘附性实验显示,PA1、PA27853对Hela细胞的粘附类型为弥散性粘附,且临床株PA1比标准株PA27853更易于粘附Hela细胞。银染法快速鉴定结果显示,都可见浓密黑染交织分布的物质,其间隙中可见聚集的短杆状菌体。扫描电镜观察,铜绿假单胞菌呈短杆状,聚集成团,为浓厚的粘液样物质紧密包绕,菌体之间相互以粘稠的纤维状粘液丝相连。MTT法测定不同剂量M331及联合罗红霉素PA1、PA27853生物被膜中存活的细菌数,结果显示,罗红霉素对M331有增效作用。应用银染法、扫描电镜观察不同剂量M331和联合罗红霉素处理的PA1、PA27853的生物被膜,可见随着M331及罗红霉素的剂量增大,PA1、PA27853生物被膜中的细菌逐渐被清除,细菌量逐渐减少。结论：通过前期的实验研究,发现从贵州省耕土中分离的某种放线菌能产生一种抗生素,经前期的实验证实其对铜绿假单胞菌疗效较确定,对其它常见菌种无效,我们将此代谢产物命名为M331。本课题通过研究发现,不同抗菌药物对PA1、PA27853的浮游菌的杀菌活性存在明显差异,M331的疗效比庆大霉素弱,与多粘菌素B相当,强于羧苄青霉素。使用大环内酯类抗生素能显著增强M331的抗菌活性,酶抑制剂也能增强β-内酰胺酶类抗生素的抗菌活性。国内外研究发现,14、15元环的大环内酯类抗生素能抑制细菌藻酸盐的合成,其作用机制可能是抑制藻酸盐合成的关键酶——甘露糖脱氢酶(GMD)的活性,与其它药物联合应用能够抑制细菌生物被膜的形成。应用不同剂量的M331及联合罗红霉素在生物被膜培养过程中分别处理PA1、PA27853,显示了罗红霉素联合M331可有效抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成,其对Vero细胞无细胞毒性作用,是一个较为理想的针对铜绿假单胞菌的抗生素。

关键词：铜绿假单胞菌生物被膜 M331 亚抑菌浓度大环内酯类抗生素

大蒜素对金黄色葡萄球菌外毒素表达的抑制作用

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大蒜素对金黄色葡萄球菌外毒素表达的抑制作用

作者：冷冰峰吉林大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌是一种重要的革兰氏阳性病原体，它可以引发人类和动物的多种疾病，从微小的局部皮肤感染到威胁生命的深层组织感染，和系统性感染（如肺炎，心内膜炎和外毒素综合征等），并且这些疾病具有很高的发病率和致死率。由于金... 详细信息

金黄色葡萄球菌是一种重要的革兰氏阳性病原体，它可以引发人类和动物的多种疾病，从微小的局部皮肤感染到威胁生命的深层组织感染，和系统性感染（如肺炎，心内膜炎和外毒素综合征等），并且这些疾病具有很高的发病率和致死率。由于金葡菌还可以导致胃肠炎和食物中毒，因此其又是一种十分重要的食源性病原体。金葡菌的致病因素主要包含其由毒素介导的毒力，细菌的侵袭力及日益增长的抗生素抗性，所以治疗由金葡菌引发的感染疾病异常困难。因此，这种日趋严重的现象迫使我们急需一种新的抗菌药物或治疗策略来与之抗衡。 α-溶血素，肠毒素和毒素性休克综合症毒素（TSST-1）是金葡菌所分泌几种主要的毒力因子。α-溶血素是一种33.2kDa的穿孔胞外蛋白，由大多数金葡菌分泌。α-溶血素具有溶血，溶细胞，引起皮肤坏死和引起中毒的特性，其在宿主的细胞膜上组成七聚体，并形成穿膜孔，最终导致细胞裂解。α-溶血素可以对红细胞，单核细胞，淋巴细胞，巨噬细胞和上皮细胞等多种人类细胞造成损伤。葡萄球菌肠毒素（SEs）是一组重要的热稳定肠毒素，其分类从SEA到SEE，SEG到SEJ。这些毒素可以引起葡萄球菌肠胃炎，食物中毒，毒素性类休克综合症和一些过敏性及自身免疫性疾病。TSST-1是导致毒素性休克综合症（TSS）的关键毒素。TSS是一种具有强致命性的葡萄球菌综合症。此外，SEs和TSST-1都可以作为细菌性超抗原与细胞中主要组织相容性复合物（MHC）II类相结合，并选择性地刺激T细胞在其T细胞受体（TCRs）上表达适当的Vβ基因片段。葡萄球菌外毒素的分泌以一种生长时期依赖性的方式调节，分泌时期主要发生在细菌的后指数生长期。辅助基因调节位点—agr，它是一种双组份调节系统，在金葡菌外毒素的产生中起到相当关键的作用。耐药菌株的不断出现使得治疗金葡菌感染疾病变得十分困难。因此，无论是在食品还是制药产业，人们都迫切地需求一种新的治疗方法以预防和治疗由金葡菌引发的致命性感染疾病。近年来，由于毒力抑制剂的发现，人们研究出了许多新的治疗策略，也研发了许多新的药物化合物。因此，以细菌毒力因子为靶标用以治疗细菌性感染疾病成为了一种极其引人关注并具有很大发展空间的治疗方法。大蒜（蒜科）是一种长期以来被人们用于医疗的可食用植物，而大蒜素便是从大蒜中提取的一种有机硫磺化合物。这种无色的液体具有一种很强的刺激性味道，并具有很多医疗特性，如抑制脂肪沉积和粥样动脉硬化，恢复脂蛋白平衡，降低血压，具有抗血栓和抗炎症的活性，一定的抗氧化功能，其中最为显著的还是大蒜素较强的抗细菌和抗真菌活性。本研究的目的是对大蒜素的抗金葡菌活性进行评价，并更深一步地了解其亚抑菌浓度对耐甲氧西林金葡菌和甲氧西林敏感金葡菌中α-溶血素，SEA， SEB和TSST-1产生的影响。此外，我们还应用了live/dead实验和细胞毒性实验，观察大蒜素在体外是否对α-溶血素所损伤的人肺癌上皮细胞（A549）具有保护作用。本研究的实验结果表明，大蒜素对α-溶血素，SEA，SEB和TSST-1的基因表达和产生具有抑制作用，并可以保护A549细胞免受金葡菌α-溶血素的损伤。这个结果说明，当用β-内酰胺类药物治疗金葡菌感染疾病时，由于其亚抑菌浓度可以导致金葡菌毒力因子分泌增强，所以我们可以选用大蒜素与β-内酰胺类药物进行联合用药，以降低金葡菌毒力因子的产生。此外，大蒜素通过抑制金葡菌的生长和减少其外毒素（特别是肠毒素）的分泌，也可以合理地作为一种新的食品防腐剂应用于食品系统中。

关键词：大蒜素亚抑菌浓度金黄色葡萄球菌毒力因子

定量竞争性RT-PCR检测耐受山梨酸钾的大肠杆菌菌株中acrA-mRNA表达水平

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中国食品添加剂 2008年第3期19卷 154-159,124页

作者：陈爱美施庆珊谢小保欧阳友生陈仪本广东省微生物研究所广州510070 广东省菌种保藏与应用重点实验室广州510070

采用含有亚抑菌浓度(1/2×MIC)山梨酸钾的LB琼脂平板连续传代的方法,对大肠杆菌(Escherichia coli)进行诱导,获得具有一定耐受性的大肠杆菌菌株;通过定量竞争性RT-PCR检测诱导后的各个菌株与未经诱导的各个菌株的acrA-mRNA的表达水平。... 详细信息

采用含有亚抑菌浓度(1/2×MIC)山梨酸钾的LB琼脂平板连续传代的方法,对大肠杆菌(Escherichia coli)进行诱导,获得具有一定耐受性的大肠杆菌菌株;通过定量竞争性RT-PCR检测诱导后的各个菌株与未经诱导的各个菌株的acrA-mRNA的表达水平。结果表明,各个菌株经过含有亚抑菌浓度山梨酸钾的LB琼脂连续培养10代后获得的诱导菌株,与普通LB琼脂平板连续培养10代后获得的菌株相比可以耐受更高浓度的山梨酸钾,并且acrA-mRNA表达水平在诱导后的各个菌株中比未经诱导的各个菌株均有一定程度的提高。说明大肠杆菌主动外排系统AcrAB-TolC中acrA基因的表达水平提高可能与大肠杆菌对山梨酸钾的耐受程度增加有一定相关性。

关键词：定量竞争性RT—PCR 亚抑菌浓度山梨酸钾耐受性 acrA—mRNA

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细菌致病机制及耐药机制的研究现状与进展

国际医药卫生导报 2020年第14期26卷 2035-2040页

作者：孙国壮谢军陈平盱眙县人民医院检验科淮安211700

细菌致病机制和耐药机制比较复杂,涉及多种机制共同作用。随着抗菌药物的不断使用,细菌的耐药谱也在呈现不断变化。由于抗菌药物选择性压力的存在,细菌的耐药和毒力也在不断增强,面对这样的现状,临床迫切需要最新的致病和耐药机制研究,... 详细信息

细菌致病机制和耐药机制比较复杂,涉及多种机制共同作用。随着抗菌药物的不断使用,细菌的耐药谱也在呈现不断变化。由于抗菌药物选择性压力的存在,细菌的耐药和毒力也在不断增强,面对这样的现状,临床迫切需要最新的致病和耐药机制研究,为临床合理使用抗菌药物及了解细菌致病和耐药机制的过程提供理论指导。本文就细菌的致病机制和耐药机制的研究现状予以综述,以期为未来对细菌的防治研究提供新思路。

关键词：致病机制耐药机制氢化酶亚抑菌浓度 Wnt/β-catenin

四季青对临床铜绿假单胞菌运动能力抑制和生物被膜消除的量-效关系

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成都大学学报（自然科学版） 2020年第4期39卷 352-357页

作者：何家林周杨杨程强羿国娟陈勇鲁兰成都大学四川抗菌素工业研究所四川成都610052

考察亚抑菌浓度的四季青水煎液对临床分离的铜绿假单胞菌运动能力及生物被膜的抑制作用,并探究其消除生物被膜的量-效关系。以琼脂二倍稀释法测定四季青水煎液对常见致病菌临床分离菌株的最小抑菌浓度,配制不同亚抑菌浓度的四季青水煎... 详细信息

考察亚抑菌浓度的四季青水煎液对临床分离的铜绿假单胞菌运动能力及生物被膜的抑制作用,并探究其消除生物被膜的量-效关系。以琼脂二倍稀释法测定四季青水煎液对常见致病菌临床分离菌株的最小抑菌浓度,配制不同亚抑菌浓度的四季青水煎液的浮泳运动和蹭行运动平板,将复苏后的铜绿假单胞菌接种于运动平板上,37℃正置培养18 h后测定菌落生长直径.于96孔板中加入铜绿假单胞菌菌液培养3 d以构建生物被膜,再加入不同亚抑菌浓度的四季青水煎液共同培养,于24 h和72 h取样测定OD值,拟合四季青水煎液对铜绿假单胞菌消除生物被膜的量-效关系。在亚抑菌浓度1/2×MIC下,四季青水煎液能显著抑制铜绿假单胞菌的运动能力,在1×MIC^1/16×MIC下能消除已生成的生物被膜并具有一定的量-效关系。

关键词：四季青临床铜绿假单胞菌亚抑菌浓度运动能力生物被膜量-效关系

基于转录组学策略分析川银花对耐药铜绿假单胞菌生物被膜的影响

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成都大学学报（自然科学版） 2023年第2期42卷 119-124页

作者：赵玉婷廖黎王镜雅杨晨鲁兰成都大学四川抗菌素工业研究所四川成都610052

采用结晶紫染色法、扫描电镜法观察亚抑菌浓度川银花水煎液对耐药铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响,并从整体水平上运用转录组学技术分析耐药铜绿假单胞菌基因表达情况,对差异基因进行功能富集及通路分析.结果显示,转录组测序共筛选出36... 详细信息

采用结晶紫染色法、扫描电镜法观察亚抑菌浓度川银花水煎液对耐药铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响,并从整体水平上运用转录组学技术分析耐药铜绿假单胞菌基因表达情况,对差异基因进行功能富集及通路分析.结果显示,转录组测序共筛选出362个差异表达基因,其中下调基因206个,上调基因156个,可为耐药铜绿假单胞菌在临床上感染造成的相关疾病的治疗提供新思路.

关键词：川银花转录组学铜绿假单胞菌亚抑菌浓度生物被膜

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中药“肠宁”对致病性大肠杆菌K_(88)的抑菌效果及对细菌形态影响的研究

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吉林畜牧兽医 2005年第1期27卷 10-11页

作者：王楠鞠玉琳冯旭李晓梅延边大学农学院动物医学系吉林延边133400

为了探明中药“肠宁”的抑菌疗效,本试验以致病性大肠杆菌K88为试材,通过葡萄糖酚红肉汤稀释法,研究了不同提取方式提取的中药“肠宁”的抑菌效果及亚抑菌浓度下对细菌形态的影响。结果表明循环回流浸出法制得的中药“肠宁”最小抑菌浓... 详细信息

为了探明中药“肠宁”的抑菌疗效,本试验以致病性大肠杆菌K88为试材,通过葡萄糖酚红肉汤稀释法,研究了不同提取方式提取的中药“肠宁”的抑菌效果及亚抑菌浓度下对细菌形态的影响。结果表明循环回流浸出法制得的中药“肠宁”最小抑菌浓度为0.0625g/mL,亚抑菌浓度为0.03125g/mL;煎煮法最小抑菌浓度为0.5g/mL,亚抑菌浓度为0.25g/mL;而冷浸法制得的1g/mL中药“肠宁”无抑菌作用。循环回流浸出法提取的中药“肠宁”在亚抑菌浓度下对细菌形态有明显的影响。

关键词：不同提取方式大肠抑菌K88 抑菌效果亚抑菌浓度

三颗针提取物含量测定及其对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究

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四川畜牧兽医 2020年第12期47卷 22-26页

作者：格桑卓嘎四朗玉珍拉巴次旦吴金措姆班旦西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009

本研究通过高效液相色谱法测定了川产、藏产三颗针中小檗碱、药根碱和巴马汀的含量,采用微量肉汤稀释法测定三颗针提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)USA300的最低抑菌浓度,在亚抑菌浓度下采用结晶紫染色法评估其对MRSA生物被膜形... 详细信息

本研究通过高效液相色谱法测定了川产、藏产三颗针中小檗碱、药根碱和巴马汀的含量,采用微量肉汤稀释法测定三颗针提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)USA300的最低抑菌浓度,在亚抑菌浓度下采用结晶紫染色法评估其对MRSA生物被膜形成的抑制和清除作用,同时检测提取物与MRSA共培养上清液的溶血活性。结果表明,三颗针提取物在亚抑菌浓度下对USA300生物被膜的形成具有一定的抑制作用,在较高浓度下三颗针提取物对24h和48h形成的生物被膜具有良好的清除作用;不同浓度三颗针提取物对USA300的α-溶血素分泌有一定的抑制作用,其中1/2MIC的抑制作用最强。本研究为临床合理应用抗MRSA药物提供了理论依据。

关键词：三颗针高效液相色谱法(HPLC) USA300 亚抑菌浓度