检索结果-南通市图书馆

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶的分离纯化与酶学性质

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

化工学报 2006年第12期57卷 2938-2942页

作者：孟晓蕾齐向辉韦宇拓黄日波广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西南宁530004 南宁中诺生物工程公司广西南宁530003

1，3-丙二醇（1，3-propanediol，1，3-PD）是一种重要的化工和医药中间体原料，是良好的溶剂、抗冻剂或保护剂，是聚酯——聚对苯二甲酸丙二醇酯（PTT）和聚氨酯的单体，可在地毯、纺织、工程塑料等领域中广泛应用，也可用于食品、化... 详细信息

1，3-丙二醇（1，3-propanediol，1，3-PD）是一种重要的化工和医药中间体原料，是良好的溶剂、抗冻剂或保护剂，是聚酯——聚对苯二甲酸丙二醇酯（PTT）和聚氨酯的单体，可在地毯、纺织、工程塑料等领域中广泛应用，也可用于食品、化妆品和制药等行业食品．当前化工合成是生产1，3-丙二醇的主要方法，

关键词： Lactobacillus diolivorans 二醇脱水酶辅酶B12 甘油脱水酶

Lactobacillus collinoides二醇脱水酶及其激活因子的功能鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Lactobacillus collinoides二醇脱水酶及其激活因子的功能鉴定

作者：梁甜广西大学

学位级别：硕士

甘油脱水酶(EC 4.***.1.30)是生物转化法生产1，3-丙二醇(工业上有重要用途的化工材料)的限速酶，而二醇脱水酶(EC4.***.1.28)是甘油脱水酶的同工酶，所以近年来也成为研究的热点。以Lactobacillus collinoides基因组DNA为模板，PCR扩增得... 详细信息

甘油脱水酶(EC 4.***.1.30)是生物转化法生产1，3-丙二醇(工业上有重要用途的化工材料)的限速酶，而二醇脱水酶(EC4.***.1.28)是甘油脱水酶的同工酶，所以近年来也成为研究的热点。以Lactobacillus collinoides基因组DNA为模板，PCR扩增得到了二醇脱水酶基因(pduCDE)及其激活因子基因(pduGH)，分别连接到pSE380和pET30a(+)中，构建了重组质粒pSE-pduCDE与pET-pduGH，两外源基因分别在*** JM109和*** rosseta(DE3)中得到表达。经SDS-PAGE分析表明，pduCDE基因的表达蛋白包括63kDa、28kDa、22kDa三个亚基，结果与预期的相符;pduGH基因的表达蛋白包括64.5 kDa、12.4 kDa两个亚基，结果与预期的相符。重组菌中的二醇脱水酶基因pduCDE表达产物不具备脱水酶活力，与Lactobacillus diolvorans二醇脱水酶基因在***(BL21)中的重组表达情况一致。重组质粒pET-pduGH的表达蛋白，在***(DE3)中形成不溶性的包涵体，经变性和复性后再经进一步酶功能鉴定，在国内外首次证明，复性后的pET-pduGH表达蛋白能激活Glostridipasteurianum甘油脱水酶um，具有甘油脱水酶激活因子活性。

关键词： 1,3-丙二醇二醇脱水酶甘油脱水酶激活因子 Lactobacillus collinoides

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶及其激活因子的功能鉴定

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶及其激活因子的功能鉴定

作者：孟晓蕾广西大学

学位级别：硕士

从天然菌***中纯化了二醇脱水酶。经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与SDS-PAGE电泳结果显示，该酶分子量约200kDa，由分子量分别为62kDa、35kDa、22kDa的三种亚基组成，酶相对三种主要底物的K值分别是，1，2-丙二醇1.3mmol／L，甘油5.8mmol／... 详细信息

从天然菌***中纯化了二醇脱水酶。经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与SDS-PAGE电泳结果显示，该酶分子量约200kDa，由分子量分别为62kDa、35kDa、22kDa的三种亚基组成，酶相对三种主要底物的K值分别是，1，2-丙二醇1.3mmol／L，甘油5.8mmol／L，1，2-乙二醇10.3 mmol／L，酶对辅酶B的K值为1.5μmol／L，而辅酶B是酶催化活力必需的辅助因子。酶反应的最适pH为8.6，最适温度为37℃。以***基因组DNA为模板，PCR扩增得到了二醇脱水酶基因(gldCDE)及其激活因子基因(gldGH)，分别构建了重组质粒pSE-gldCDE与pSE-gldGH，两外源基因均在*** BL21中得到表达。经SDS-PAGE分析表明，gldCDE基因的表达蛋白包括62kDa、35kDa、22kDa三个亚基，与其基因序列中的三个读码框相符，并与天然菌中纯化所得二醇脱水酶的蛋白质组成相同;gldGH基因的表达蛋白包括68kDa、13kDa两个亚基，与其基因序列中的两个读码框相符。gldGH基因的表达蛋白经金属鏊合亲和层析与凝胶过滤纯化后，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析中显示其分子量约325kDa，因此推测其很可能为大小两种亚基形成的αβ多聚体。在进一步的酶功能鉴定中，重组菌中的二醇脱水酶基因表达产物不具备脱水酶活力，与丘状乳杆菌(Lactobacillus collinoides)二醇脱水酶基因在***中的重组表达情况一致;纯化后的gldGH基因的重组表达产物，以天然菌中纯化得到的二醇脱水酶为对象，经酶功能检测后确认为二醇脱水酶激活因子。

关键词： 1,3-丙二醇二醇脱水酶甘油脱水酶激活因子 Lactobacillus diolivorans

丘状乳杆菌中二醇脱水酶激活因子pduGH的克隆与功能鉴定

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

广西农业生物科学 2007年第B6期26卷 12-15,21页

作者：梁甜齐向辉韦旭钦韦宇拓黄日波广西大学生命科学与技术学院

以丘状乳杆菌(Lactobacillus collinoides)基因组DNA为模版,通过PCR方法得到二醇脱水酶激活因子基因pduGH,连接到表达载体pET30a上,得到重组质粒pET-pduGH。将此重组质粒转化到*** Rosseta(DE3)中进行表达,重组菌株SDS-PAGE结果显示有... 详细信息

以丘状乳杆菌(Lactobacillus collinoides)基因组DNA为模版,通过PCR方法得到二醇脱水酶激活因子基因pduGH,连接到表达载体pET30a上,得到重组质粒pET-pduGH。将此重组质粒转化到*** Rosseta(DE3)中进行表达,重组菌株SDS-PAGE结果显示有明显的64.5 ku和12.4 ku两条特异性蛋白。表达的目的蛋白大多为不溶性的包涵体,经变性、复性后得到部分可溶性蛋白。在辅酶B12,ATP,Mg2+或Mn2+存在下,以Clostridium pasteurianum甘油脱水酶为对象进行激活实验,结果证实,重组质粒pET-pduGH的表达产物具有甘油脱水酶激活活性。

关键词：丘状乳杆菌激活因子 1,3-丙二醇二醇脱水酶克隆

甘油脱水酶和二醇脱水酶β亚基生物信息学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术 2006年第4期16卷 1-4页

作者：洪燕李雯君张燎原夏启容方柏山工业生物技术福建省高等学校重点实验室(华侨大学) 福建泉州362021

依赖辅酶B12的甘油脱水酶和二醇脱水酶是同工酶。它们不仅氨基酸序列和蛋白质折叠方式非常相似,而且有着相同的催化机制。该文在同一菌株中将编码甘油脱水酶β亚基基因和编码二醇脱水酶β亚基基因片段分别克隆至T载体,从而获得两段核苷... 详细信息

依赖辅酶B12的甘油脱水酶和二醇脱水酶是同工酶。它们不仅氨基酸序列和蛋白质折叠方式非常相似,而且有着相同的催化机制。该文在同一菌株中将编码甘油脱水酶β亚基基因和编码二醇脱水酶β亚基基因片段分别克隆至T载体,从而获得两段核苷酸片段序列,将pddB序列提交Genbank数据库,获登陆号为DQ483052。同时结合PDB数据库中甘油脱水酶和二醇脱水酶的晶体结构,该文用生物信息学方法对所测序列进行了初步分析,并对两种同工酶的β亚基对脱水酶与辅酶的亲和力进行了比较。

关键词：甘油脱水酶二醇脱水酶催化机制辅酶B12

在Klebsiella oxytoca中构建不依赖辅酶B12的1，3-丙二醇合成途径

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

在Klebsiella oxytoca中构建不依赖辅酶B12的1，3-丙二醇合成途径

作者：郑学瑞山西大学

学位级别：硕士

1,3-丙二醇(1,3-propanediol,简记1,3-PD)是一种重要的化工原料的中间产物,是工业生物技术领域研究的重要产品之一。最主要的用途是作为一种重要的单体原料,其可以合成多种重要的化工产品如:聚酯、聚醚和聚氨酯。其中,作为单体与对苯二... 详细信息

1,3-丙二醇(1,3-propanediol,简记1,3-PD)是一种重要的化工原料的中间产物,是工业生物技术领域研究的重要产品之一。最主要的用途是作为一种重要的单体原料,其可以合成多种重要的化工产品如:聚酯、聚醚和聚氨酯。其中,作为单体与对苯二甲酸合成新型聚酯材料聚对苯二甲酸丙二醇酯(PTT),具有许多优良特性如:生物可降解性、安全无毒等,这是许多其它合成塑料所不具有的。1,3-PD主要用于增塑剂、洗涤剂、防腐剂、乳化剂的合成,也用于食品、化妆品和制药等行业。目前用于生物合成1,3-PD的菌种主要有Clostridium pasteurianum、Clostridiumbutyricum、Clostridium freundii、Klebsiella pneumoniae和Klebsiella oxytoca等。本实验室前期关于***的研究较多,其为兼性厌氧细菌,遗传操作较为方便简单;该菌可耐受较高浓度甘油与1,3-PD,具有较高的1,3-PD生产率和得率;该菌还可直接以废弃甘油为底物进行1,3-PD生产。目前,该菌厌氧发酵甘油生产1,3-PD的途径已比较清楚,一个关键问题是:催化该途径第一步反应的二醇脱水酶需要在辅酶B的辅助下才具有催化活性,但是很容易失活,因此成为关键性限速酶,限制了1,3-PD的生物合成。为解决这一问题,本研究拟利用基因工程手段将来源于Clostridium butyricumDSM 10702的的甘油脱水酶(一种二醇脱水酶的同工酶,但催化过程不依赖于辅酶B)导入***中,以提高1,3-PD合成效率。本研究以实验室前期构建的1,3-PD高产菌*** DA-1HB为出发菌,初步研究了上述策略的可行性。首先,对出发菌的形态、分子特性和生理生化特性进行了重新鉴定,并对该菌进行了遗传稳定性和发酵特性的研究。其次,对购自德国微生物菌种保藏中心的菌株Clostridium butyricum DSM 10702利用16S rDNA进行了鉴定,证实其为丁酸梭菌。第三,利用基因工程手段扩增了*** DSM 10702基因组中的甘油脱水酶基因及其激活因子序列,为避免有毒中间产物3-羟基丙醛积累,同时扩增了位于同一操纵子(1,3-PD操纵子)上的1,3-PD脱氢酶基因(编码1,3-PD合成途径的第二个酶)。通过连接到T vector测序,发现该操纵子与GenBank报道的***的1,3-PD操纵子序列(序列号AY112989)具有96.07%的同源性,进一步扩增和测序研究发现该差异性源于菌种间差异。随后,利用含不同启动子的表达载体构建了表达质粒,并电转化到*** DA-1HB中,筛选获得了携带不同表达质粒的重组产酸克雷伯氏菌。初步摇瓶发酵实验发现,携带有表达质粒pIPK的重组菌*** PK的1,3-PD产量提高52.7%。对表达质粒在重组菌*** PK中进行了重组质粒稳定性研究表明:重组菌PK的质粒稳定性良好,在前80代保持了100%的稳定性,从80代开始LBK平板结果显示质粒稳定性略微下降,但是仍然保持在较高的水平。本研究通过基因工程手段在***中构建了不依赖辅酶B的1,3-PD合成途径,并对质粒的稳定性及重组菌进行了初步发酵研究,对促进生物法合成1,3-PD的工业化进程具有重要意义。另外,该不依赖于辅酶B的甘油脱水酶的1,3-PD操纵子的成功克隆,将为应用于体外酶催化转化过程提供依据。

关键词：二醇脱水酶甘油脱水酶辅酶B12 1,3-丙二醇产酸克雷伯氏菌丁酸梭菌