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结缔组织生长因子体外调控奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3446-3459页

作者：王若薇许曦瑶汤晓娜王春梅赵锋东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

旨在探究结缔组织生长因子在体外培养体系中对奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化的调控作用。本研究主要通过人为添加结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)重组蛋白和过表达CTGF基因分析其对细胞增殖、凋亡、乳脂和乳... 详细信息

旨在探究结缔组织生长因子在体外培养体系中对奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化的调控作用。本研究主要通过人为添加结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)重组蛋白和过表达CTGF基因分析其对细胞增殖、凋亡、乳脂和乳蛋白合成分泌及信号通路的影响。使用EdU试剂盒和流式细胞仪分别检测细胞增殖凋亡情况;应用尼罗红染料和甘油三酯试剂盒检测细胞内脂滴数量和细胞外培养液乳脂含量;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测细胞增殖凋亡,β酪蛋白,乳脂和乳蛋白合成关键信号分子以及细胞外基质细胞表面受体β1整联蛋白的表达;免疫共沉淀分析CTGF和β1整联蛋白之间的蛋白质相互作用。结果表明:体外培养时,无论CTGF重组蛋白还是CTGF过表达均能通过增强增殖、抑制凋亡促进贴壁细胞生长;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果表明,CTGF在转录和翻译水平增强促增殖的CyclinD1、MAPK和Bcl2表达,抑制促凋亡的Caspase3和Bax表达;CTGF一方面上调乳脂合成关键基因FASN、SREBP1、PPARγ表达水平,促进细胞内脂滴合成和胞外甘油三酯分泌;另一方面上调乳蛋白合成关键基因PRLR、STAT5和p-STAT5表达水平,进而显著促进β酪蛋白合成;CTGF上调β1整联蛋白表达水平,Co-IP也证实了CTGF和β1整联蛋白之间存在蛋白质相互作用。综上所述,CTGF促进体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长及泌乳能力;CTGF与β1整联蛋白共存于黏附复合物,可以通过影响β1整联蛋白信号途径实现其部分生物学作用。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞 CTGF 细胞生长乳脂 β-酪蛋白

白藜芦醇缓解NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞的周期阻滞和凋亡

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中国兽医学报 2024年第5期44卷 1032-1040页

作者：曹丽光刘思宇栾奕高文睿刘恺李国金杨子凤董忆飞李心慰高文文刘国文吉林大学动物医学学院吉林长春130062

围产期奶牛能量负平衡(negative energy balance, NEB)可引起高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids, NEFA)血症。大量NEFA被乳腺组织吸收,可诱发细胞凋亡。白藜芦醇(resveratrol, RES)是一种非黄酮类多酚有机化合物,具有抗炎抗凋... 详细信息

围产期奶牛能量负平衡(negative energy balance, NEB)可引起高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids, NEFA)血症。大量NEFA被乳腺组织吸收,可诱发细胞凋亡。白藜芦醇(resveratrol, RES)是一种非黄酮类多酚有机化合物,具有抗炎抗凋亡等作用。目前,尚不清楚RES对高NEFA处理的乳腺上皮细胞(MAC-T)的周期阻滞和凋亡的影响。因此本研究主要探讨NEFA对MAC-T细胞周期阻滞和凋亡的影响以及RES是否能改善高浓度NEFA对MAC-T的病理作用。添加不同浓度的NEFA处理MAC-T,利用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测细胞活力,通过Western blot检测细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bcl-2、Bax和细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达水平,采用qRT-PCR法检测细胞凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA转录水平,利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果显示,NEFA剂量依赖性地诱导MAC-T细胞凋亡,降低细胞活力,阻滞细胞周期。高NEFA显著增加Bax、Caspase-3的mRNA转录水平和Bax/Bcl-2、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达,降低细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达及Bcl-2 mRNA转录水平。此外,单独添加最高浓度80μmol/L的RES对MAC-T细胞活力无影响,且不会引起细胞凋亡。用高浓度NEFA处理细胞并分别添加10、20、40μmol/L RES,RES的添加可以缓解NEFA导致的Cyclin D1蛋白水平下降,降低Bax/Bcl-2和Cleaved-Caspase-3/caspase-3蛋白水平。同时,RES的添加还可以降低G2/M和S期细胞百分比和细胞凋亡。结果表明,NEFA可以引起细胞周期阻滞和细胞凋亡,RES能缓解NEFA诱导的MAC-T细胞周期阻滞和细胞凋亡。

关键词：白藜芦醇乳腺上皮细胞非酯化脂肪酸细胞周期细胞凋亡

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山羊乳中乳腺上皮细胞的体外分离培养及鉴定

黑龙江畜牧兽医 2024年第5期 14-21页

作者：刘思漪张丹丹朱少倩胡雅楠黄奔广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 广西大学动物科学技术学院南宁530004 广西医学科学院广西壮族自治区人民医院南宁530021

为了探索获得乳腺上皮细胞(MECs)的新途径,试验采用乳汁分离法分离培养山羊乳腺上皮细胞(GMECs),并以山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为对照,通过形态学观察、免疫荧光染色观察细胞形态,油红O染色检测脂滴形成情况;实时荧光定量PCR检测特异性... 详细信息

为了探索获得乳腺上皮细胞(MECs)的新途径,试验采用乳汁分离法分离培养山羊乳腺上皮细胞(GMECs),并以山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为对照,通过形态学观察、免疫荧光染色观察细胞形态,油红O染色检测脂滴形成情况;实时荧光定量PCR检测特异性基因;Western-blot检测乳腺分泌的特异性蛋白;此外,对GMECs和GEFs进行转录组测序(RNA-seq)分析及GO功能注释和KEGG信号通路富集分析。结果表明:从山羊奶中分离出来的细胞表现出MECs的结构特征;与GEFs对照相比,GMECs中乳腺上皮特异性基因CDH1、LTF、CSN2、CSN3、EpCAM、KRT18、ELF3和ELF5的相对表达量在第8代(GMEC8)极显著增加(P上皮的形态发生和上皮发育为显著富集的GO条目;乳腺发育相关的信号通路如WNT、PI3K-Akt和MAPK信号通路明显富集。说明从山羊奶中可以分离出GMECs。

关键词：山羊乳腺上皮细胞体外转录组测序分离培养

SOCS1基因过表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

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南方农业学报 2024年第1期55卷 207-216页

作者：毛同辉杨酸罗杰苏徵张依裕铜仁市畜牧技术推广站贵州铜仁554300 铜仁职业技术学院贵州铜仁554300 贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS... 详细信息

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC,分别转染猪乳腺上皮细胞,然后通过CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测转染后JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化。【结果】以过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC分别转染猪乳腺上皮细胞,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的SOCS1基因相对表达量极显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组(P乳腺上皮细胞的OD值极显著低于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组,说明过表达载体pcDNA3.1-SOCS1能有效抑制猪乳腺上皮细胞的增殖能力;过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的细胞凋亡率[(36.15±0.92)%]显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组[(30.55±0.35)%](P细胞比例极显著降低,而S期和G2期细胞比例显著升高。与阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组相比,除JAK2、STAT3和TYK2基因外,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的SOCS2、SOCS3、JAK1、STAT2、STAT5A、IL-6、PRLR、MCL1和PIAS3等9个JAK/STAT信号通路相关基因的相对表达量均极显著升高。【结论】SOCS1基因过表达可抑制猪乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡,并影响JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化,从而在猪的乳腺发生发育调控机制中发挥重要作用。

关键词：猪乳腺上皮细胞 SOCS1基因细胞增殖细胞凋亡 JAK/STAT信号通路

外泌体miR-126-5P对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的调控作用

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黑龙江八一农垦大学学报 2024年第5期36卷 63-69页

作者：袁涛许浩天连帅杨跃杰王建发黑龙江八一农垦大学动物科技学院/农业农村部东北寒区牛病防治重点实验室大庆163319

外泌体是一类由各种类型细胞分泌的直径为30~200 nm的细胞外囊泡,其可通过内含的多种miRNA发挥相应的调节功能。为明确外泌体miR-126-5P对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的调控作用,应用TargetScan和miRanda两款软件预测miR-126-5P的... 详细信息

外泌体是一类由各种类型细胞分泌的直径为30~200 nm的细胞外囊泡,其可通过内含的多种miRNA发挥相应的调节功能。为明确外泌体miR-126-5P对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的调控作用,应用TargetScan和miRanda两款软件预测miR-126-5P的靶基因,之后使用脂质体转染技术构建miRNA的过表达与抑制细胞模型,并利用q-PCR与Western blotting方法进一步验证miR-126-5P对炎症的调控作用。结果发现,miR-126-5P在脂多糖刺激的细胞来源外泌体中下调了0.3倍。靶基因预测结果表明,肿瘤坏死因子超家族成员13B(TNFSF13B)、C-C基序趋化因子配体22(CCL22)、免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11)、白细胞介素5受体α亚基(IL5RA)和白细胞介素13(IL13)为miR-126-5p的主要靶基因。过表达miR-126-5p后,IL-6的转录水平与I-κBα蛋白的磷酸化水平均显著上调。抑制miR-126-5p后,IL-6转录水平与I-κBα蛋白的磷酸化水平均显著下调。结果为进一步探究奶牛乳腺上皮细胞来源外泌体miRNA的炎症调节机制奠定了基础。

关键词：外泌体 miRNA 乳腺上皮细胞脂多糖炎症

乳腺上皮细胞经致癌物苯并芘和4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-1-丁酮联合诱导后的生物学特性变化研究

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卫生研究 2011年第3期40卷 368-370页

作者：宋筱瑜王华骞中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100050 美国田纳西大学兽医学院比较医学系

目的探讨正常乳腺上皮细胞经致癌物联合慢性处理后生物学特性的变化。方法使用低剂量(100pmol/L)的化学致癌物4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-1-丁酮(NNK)和苯并芘(B[a]P)连续处理人正常乳腺上皮MCF10A细胞,20代后研究细胞是否获得癌细胞相关... 详细信息

目的探讨正常乳腺上皮细胞经致癌物联合慢性处理后生物学特性的变化。方法使用低剂量(100pmol/L)的化学致癌物4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-1-丁酮(NNK)和苯并芘(B[a]P)连续处理人正常乳腺上皮MCF10A细胞,20代后研究细胞是否获得癌细胞相关生物学特性。结果经致癌物低剂量长期处理后的细胞对生长因子的依赖性降低,获得锚定非依赖性生长特性以及在3D细胞外基质培养基上形成不规则的腺泡。结论经100pmol/L NNK和B[a]P长期处理的人正常乳腺上皮MCF10A细胞可获得癌细胞相关特性。

关键词：乳腺上皮细胞癌症发生致癌物生物学特性乳腺肿瘤

乳酸菌抑制病原菌对奶牛乳腺上皮细胞的粘附和侵入作用

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中国食品学报 2017年第11期17卷 20-27页

作者：许女史改玲张浩杜立红王俊东山西农业大学食品科学与工程学院山西农业大学山西太谷030801 山西省生态畜牧与环境兽医学重点实验室山西农业大学山西太谷030801

考察了分离自健康牛乳管中的乳酸乳球菌CM2和来源于奶牛肠道中的干酪乳杆菌CI2,对奶牛乳腺炎病原菌金黄色葡萄球菌SMS81和大肠杆菌SME177的粘附侵入乳腺上皮细胞的抑制作用;研究了菌体细胞侵入乳腺上皮细胞后相关抗菌肽表达的情况。结... 详细信息

考察了分离自健康牛乳管中的乳酸乳球菌CM2和来源于奶牛肠道中的干酪乳杆菌CI2,对奶牛乳腺炎病原菌金黄色葡萄球菌SMS81和大肠杆菌SME177的粘附侵入乳腺上皮细胞的抑制作用;研究了菌体细胞侵入乳腺上皮细胞后相关抗菌肽表达的情况。结果表明:两株乳酸菌CM2和CI2具有显著抑制病原菌粘附和侵入b MEC的能力,并且具有一定的浓度依赖性;加热灭活处理的乳酸菌仍然具有抑制病原菌粘附b MEC的能力,但抑制侵入的能力严格依赖于菌体细胞的活性;乳酸菌细胞培养上清液还可以降低病原菌对b MEC细胞的粘附能力,这可能与乳酸菌产生细菌素有关。实时荧光定量PCR结果显示:CM2菌株显著提高了金黄色葡萄球菌SMS81和大肠杆菌SME177侵入b MEC后抗菌肽TAP和BNBD10基因的表达水平,推测可能与乳酸菌抑制病原菌侵入内化牛乳腺上皮细胞有关。本研究成果为奶牛乳腺炎天然、安全、无污染的有效治疗提供了新的开发前景。

关键词：乳酸菌乳腺上皮细胞粘附侵入

miR-138对小鼠乳腺上皮细胞的作用及其调控的靶序列

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生物化学与生物物理进展 2008年第7期35卷 834-838页

作者：王春梅李庆章李晔东北农业大学乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030

miRNA是一类长约20～25nt的内源性非编码蛋白的小***的作用遍及生命体的发生、生长、发育、分化和死亡等过程,但目前对miRNA在细胞中的确切功能和其如何发挥作用知之甚少.应用miRNA基因沉默技术,抑制小鼠乳腺上皮细胞miR-138的表达,应... 详细信息

miRNA是一类长约20～25nt的内源性非编码蛋白的小***的作用遍及生命体的发生、生长、发育、分化和死亡等过程,但目前对miRNA在细胞中的确切功能和其如何发挥作用知之甚少.应用miRNA基因沉默技术,抑制小鼠乳腺上皮细胞miR-138的表达,应用荧光定量PCR、Westernblot、细胞活力分析技术等分析mi-138的表达及miR-138对小鼠乳腺上皮细胞的影响,结果显示,miR-138抑制后细胞活性增强(P乳腺上皮细胞的增殖.miR-138在乳腺上皮细胞调控的靶序列是PRL-R,抑制其表达而发挥作用.miR-138通过调控STAT5、MAPK信号转导通路而调控乳腺上皮细胞增殖.

关键词：乳腺上皮细胞 miR-138 基因沉默

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乳腺上皮细胞在乳腺炎症反应中的作用

中国畜牧兽医 2009年第12期36卷 103-105页

作者：孟丽丽钟凯朱河水河南农业大学动物生理生化实验室郑州450002

乳腺上皮细胞的重要生理功能是合成和分泌乳汁中的主要营养成分。近年来乳腺上皮细胞作为先天性免疫的重要组成部分,其在预防和治疗乳腺炎中的作用受到人们的广泛关注。通过乳腺上皮细胞原代培养物和乳腺上皮细胞系对乳腺分泌的免疫活... 详细信息

乳腺上皮细胞的重要生理功能是合成和分泌乳汁中的主要营养成分。近年来乳腺上皮细胞作为先天性免疫的重要组成部分,其在预防和治疗乳腺炎中的作用受到人们的广泛关注。通过乳腺上皮细胞原代培养物和乳腺上皮细胞系对乳腺分泌的免疫活性物质进行研究,结果表明,乳腺上皮细胞在病原微生物侵入乳腺时,能分泌众多的免疫调节因子(如炎症趋化因子、前炎性细胞因子和宿主防御肽等),这些免疫活性成分对乳腺炎的发生与病程发展起重要作用。

关键词：乳腺上皮细胞乳腺炎免疫调节因子

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