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血小板活化因子乙酰水解酶融合蛋白的表达、纯化及鉴定

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第二军医大学学报 2007年第5期28卷 504-507页

作者：邹颖毕新岭顾军缪明永王梁华时多第二军医大学长海医院皮肤科上海200433 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:获得血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)全长编码基因并在GST原核表达系统中表达。方法:通过RT- PCR方法,从正常人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出PAF-AH全长编码基因,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T- 3,转化大肠杆菌BL21并诱... 详细信息

目的:获得血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)全长编码基因并在GST原核表达系统中表达。方法:通过RT- PCR方法,从正常人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出PAF-AH全长编码基因,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T- 3,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,采用GST蛋白纯化系统进行纯化。所得纯化蛋白以SDS-PAGE及Western印迹方法鉴定,并进行酶活性测定。结果:获得了PAF-AH基因,序列分析与GenBank数据库中序列一致。SDS-PAGE及Westem印迹结果显示,诱导表达出可溶性的融合蛋白,其相对分子质量与预期相符。纯化蛋白经Western印迹检测能够被特异性抗体所识别,具有免疫学活性;酶活性检测证实其具有特异的水解PAF的活性。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的PAF-AH蛋白。

关键词：血小板活化因子乙酰水解酶基因表达纯化

血小板活化因子乙酰水解酶对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的影响

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中华实验外科杂志 2006年第1期23卷 34-35页

作者：王刚孙备孟庆辉高长路潘尚哈姜洪池哈尔滨医科大学第一临床医学院肝胆胰外科 150001

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的影响。方法将45只雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=15):sham组、SAP组和PAF-AH干预组。PAF-AH干预组于造模1、24h后经阴茎背动脉注射PAF-AH(5mg/kg体重)。各组... 详细信息

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的影响。方法将45只雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=15):sham组、SAP组和PAF-AH干预组。PAF-AH干预组于造模1、24h后经阴茎背动脉注射PAF-AH(5mg/kg体重)。各组于造模48h后测定血清中血小板活化因子(PAF)、内毒素、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;对肺组织进行病理学评分。结果与SAP组比较,PAF-AH干预组血PAF(7.91±0.12)pg/L、内毒素(0.28±0.02)EU/ml、TNF-α(1.46±0.76)μg/L含量及肺组织MPO活性(5.24±1.34)U/g、肺组织病理学评分(4.88±1.35)显著降低(P<0.05)。结论应用PAF-AH可从改善微循环障碍、保护肠道屏障功能和抑制急性炎症反应等方面减轻SAP并发肺损伤。

关键词：血小板活化因子乙酰水解酶大鼠重症急性胰腺炎肺损伤微循环障碍急性炎症反应

血小板活化因子乙酰水解酶在急性胰腺炎中的应用进展

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中华实验外科杂志 2006年第1期23卷 120-121页

作者：王刚孙备哈尔滨医科大学第一临床医学院肝胆胰腺外科 150001

急性胰腺炎(AP)是一种病情凶险、病死率高的外科常见急腹症.其病变常使患者处于免疫过反应状态[1],经历着局部组织坏死和全身炎症反应的双重打击.因此,首先针对其发病及进展机制的治疗显得极为重要[2].近年来,随着对AP发病机制研究的不... 详细信息

急性胰腺炎(AP)是一种病情凶险、病死率高的外科常见急腹症.其病变常使患者处于免疫过反应状态[1],经历着局部组织坏死和全身炎症反应的双重打击.因此,首先针对其发病及进展机制的治疗显得极为重要[2].近年来,随着对AP发病机制研究的不断深入,胰腺微循环障碍在AP病程演进中所起的重要作用已日益受到关注.大量的血管活性物质如血小板活化因子(PAF)、内皮素、缓激肽等均在胰腺微循环障碍中发挥着重要作用。

关键词：血小板活化因子乙酰水解酶急性胰腺炎内皮素缓激肽微循环障碍

钩端螺旋体血小板激活因子乙酰水解酶基因特征分析

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中国人兽共患病杂志 2003年第3期19卷 17-21页

作者：张怡轩郭晓奎茅翔缪有刚吴春福赵国屏中国科学院上海生命科学院上海200031 上海第二医科大学病原生物学教研室沈阳药科大学国家人类基因组南方研究中心

目的　由于钩端螺旋体病的主要特征之一是组织器官广泛性出血 ,出血部位发生在黏膜、脏器、浆膜和皮肤等处 ,严重者出现大面积肺弥散性出血、咳血 ,是危重钩端螺旋体病早期最常见的死因 ,其致病机理仍不清楚。本文使用生物信息学软件分... 详细信息

目的　由于钩端螺旋体病的主要特征之一是组织器官广泛性出血 ,出血部位发生在黏膜、脏器、浆膜和皮肤等处 ,严重者出现大面积肺弥散性出血、咳血 ,是危重钩端螺旋体病早期最常见的死因 ,其致病机理仍不清楚。本文使用生物信息学软件分析钩端螺旋体基因LA2 14 4 (血小板激活因子乙酰化酶 ,PafAH)所编码蛋白的结构和功能 ,并探讨其在致病过程中的作用。方法　使用NCBI ,Swissprot/TrEMBL ,ProDom ,Pfam ,Jpred2 ,SWISS -MODEL ,TMpred ,SignalP ,ClustW对问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株全基因组ORF基因诠释 ,编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析。结果　确定了问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株血小板激活因子乙酰化酶基因 ,该基因编码蛋白质与哺乳动物 pafAH在一级结构上相似性达 4 2 % ,以牛脑 pafAH(Ib)γ亚基 (1WAB/PDB)为模件模拟该蛋白三级结构 ,发现两者立体结构与非常相似 ,催化位点完全相同 ,均由Ser-His-Asp组成催化三合体。结论　该基因可能与钩体染色体所编码的胶原酶基因 ,溶菌酶基因 ,YopM基因 ,VwA基因协同在钩端螺旋体病出血过程中起作用。

关键词：钩端螺旋体血小板激活因子乙酰水解酶基因特征分析

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与儿童哮喘易感性关系的研究

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中国实用儿科杂志 2004年第3期19卷 159-161页

作者：王振华赵凯姝鲁继荣李洪霞赵芳兴长春市儿童医院 130061 吉林大学第一医院儿科长春130021

目的　探讨血小板活化因子乙酰水解酶 (PAF AH)基因多态性与儿童哮喘严重程度的关系。方法　采用等位基因特异性聚合酶链式反应 (AS PCR)技术 ,检测 131例不同严重程度的哮喘患儿及 10 4例健康儿童PAF AH基因第 9外显子Val 2 79Phe基因... 详细信息

目的　探讨血小板活化因子乙酰水解酶 (PAF AH)基因多态性与儿童哮喘严重程度的关系。方法　采用等位基因特异性聚合酶链式反应 (AS PCR)技术 ,检测 131例不同严重程度的哮喘患儿及 10 4例健康儿童PAF AH基因第 9外显子Val 2 79Phe基因多态性。结果　轻、中度哮喘组与对照组 3种基因型 (Val 2 79Val、Val 2 79Phe、Phe 2 79Phe)在分布频率上差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,但重度哮喘患儿与轻、中度哮喘组及对照组相比 ,差异显著 (P 均 <0 0 5 ) ;Phe等位基因频率重度哮喘组与轻、中度哮喘组及对照组相比差异显著 (P 均 <0 0 5 )。结论　PAF AH基因 (Val 2 79Phe)突变可能为重度哮喘儿童的易感基因之一。

关键词：血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性儿童哮喘易感性

血小板活化因子乙酰水解酶基因突变（Val～(279)→Phe）与脑血管病的相关性研究

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血小板活化因子乙酰水解酶基因突变（Val～(279)→Phe）与脑血管...

作者：孙淑云青岛大学

学位级别：硕士

目的研究血小板活化因子(PAF)乙酰水解酶基因突变(Val→Phe)与中国人脑血管病的关系及其在脑血管病发病过程中的作用。方法采用多聚酶链式反应分析153例脑血管病患者及100例健康对照者基因组DNA的突变等位基因，并分别测定血浆... 详细信息

目的研究血小板活化因子(PAF)乙酰水解酶基因突变(Val→Phe)与中国人脑血管病的关系及其在脑血管病发病过程中的作用。方法采用多聚酶链式反应分析153例脑血管病患者及100例健康对照者基因组DNA的突变等位基因，并分别测定血浆PAF乙酰水解酶的活性。结果脑梗死组与脑出血组突变基因型(42.7％，47.4％)及突变等位基因(24.0％，26.3％)的频率均显著高于对照组(25.0％，13.5％)(均P＜0.01)。伴高血压的脑血管病患者突变基因型的频率(39.1％)及突变等位基因的频率(21.7％)低于无高血压患者(55.3％，31.6％)，但差别无统计学意义(P＞0.05)。伴高血脂、糖尿病及有阳性家族史的脑血管病患者突变基因型及突变等位基因的频率高于无危险因素的患者，差别无统计学意义(分别P＞0.5，P＞0.2，P＞0.1)。结论 PAF乙酰水解酶基因突变(Val→Phe)所致的酶缺乏可能是中国人脑血管病的遗传学危险因素。

关键词：脑血管病血小板活化因子乙酰水解酶基因突变

血小板活化因子乙酰水解酶基因突变与脑血管病的相关性研究

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临床神经病学杂志 2002年第6期15卷 338-340页

作者：孙淑云周畅张晨青岛大学医学院附属医院神经内科

目的　研究血小板活化因子 (PAF)乙酰水解酶基因突变与中国人脑血管病 (CVD)的关系。方法对 15 3例脑血管病患者及 10 0名健康对照者分别用多聚酶链式反应分析基因组DNA的突变等位基因 ,用Stafforini等的方法测定血浆PAF乙酰水解酶的活... 详细信息

目的　研究血小板活化因子 (PAF)乙酰水解酶基因突变与中国人脑血管病 (CVD)的关系。方法对 15 3例脑血管病患者及 10 0名健康对照者分别用多聚酶链式反应分析基因组DNA的突变等位基因 ,用Stafforini等的方法测定血浆PAF乙酰水解酶的活性。结果　脑梗死组与脑出血组突变基因型及突变等位基因的频率显著高于对照组 (P 乙酰水解酶基因突变所致的酶缺乏可能是我国脑血管病的遗传学危险因素之一。

关键词：脑血管病血小板活化因子乙酰水解酶基因突变 CVD

血小板活化因子乙酰水解酶基因突变与脑血管病的关系

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青岛大学医学院学报 2003年第4期39卷 379-381页

作者：李江章政孙喜梅杨庆辉青岛大学医学院附属医院神经内科山东青岛266003

①目的　探讨血小板活化因子 (PAF)乙酰水解酶基因突变与脑血管病发病的关系。②方法　应用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,分析 16 0例脑血管病病人及 10 0例健康对照者的PAF乙酰水解酶基因型及基因组DNA突变等位基因频率 ,并测定血浆PAF乙... 详细信息

①目的　探讨血小板活化因子 (PAF)乙酰水解酶基因突变与脑血管病发病的关系。②方法　应用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,分析 16 0例脑血管病病人及 10 0例健康对照者的PAF乙酰水解酶基因型及基因组DNA突变等位基因频率 ,并测定血浆PAF乙酰水解酶的活性。③结果　脑梗死组与脑出血组PAF乙酰水解酶突变基因型及突变等位基因的频率显著高于对照组 ,差异有显著性 (χ2 =6 .397～ 9.75 8,P <0 .0 5、0 .0 1) ;伴不同危险因素脑血管病病人基因突变的差异无统计学意义。

关键词：脑血管病血小板活化因子乙酰水解酶基因突变基因频率多聚酶链反应

多器官功能障碍综合征患者外周血白三烯B4与血小板活化因子乙酰水解酶的变化

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中华急诊医学杂志 2005年第8期14卷 670-672页

作者：唐皓梁艳冰马中富熊仕秋廖晓星翟诚顺中山大学附属第一医院急诊科广东省广州510080 中山大学免疫教研室

目的探讨多器官功能障碍综合征(MODS)患者外周血中白三烯B4(LTB4)与血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性变化的临床意义。方法对26例MODS患者进行病情评分,并用ELISA法检测血清中LTB4含量与PAF-AH活性,与12例健康体检者对照。同时比较... 详细信息

目的探讨多器官功能障碍综合征(MODS)患者外周血中白三烯B4(LTB4)与血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性变化的临床意义。方法对26例MODS患者进行病情评分,并用ELISA法检测血清中LTB4含量与PAF-AH活性,与12例健康体检者对照。同时比较MODS患者MODS的评分与外周血LTB4及PAF-AH的相互关系,以及比较MODS组死亡患者与存活患者的MODS评分、外周血LTB4含量及PAF-AH活性。结果MODS患者血清中LTB4含量(923·96±308·65)ng/L与健康对照组(2453·31±400·93)ng/L比较,差异有显著性(P0·05)。MODS组中死亡患者血清LTB4含量(444·98±206·30)ng/L与存活患者血清LTB4含量(1334·51±530·35)ng/L比较,差异有显著性(P<0·01);PAF-AH活性(10·04±4·11)μmol/(min·L)与存活患者(5·16±3·32)μmol/(min·L)有显著性差异(P<0·01)。且MODS患者的MODS评分与外周血LTB4含量之间有明显的负相关性(P<0·01)。结论MODS重症患者病情复杂,LTB4与PAF-AH活性变化不一,它们可能共同参与了MODS的病理生理过程,能作为反映MODS患者病情的监测指标之一。

关键词：多器官功能障碍综合征外周血白三烯B4 血小板活化因子乙酰水解酶 LTB4 MODS